淺析食品、藥品、化妝品微生物檢驗的異同

曹魯娜 魏紅煥 趙蕊蕊 宋紅衛(wèi)

摘 要：通過對食品、藥品、化妝品三個品類微生物檢驗在檢驗依據(jù)、樣品采集及檢驗用量、培養(yǎng)基、實驗室環(huán)境、方法適用性、具體操作差異（以菌落總數(shù)為例）等方面進行對比分析，淺析三個品類在微生物檢驗中的異同，發(fā)現(xiàn)三品類微生物檢驗可以優(yōu)勢互補，互相借鑒。建議相關(guān)從業(yè)人員在工作中總結(jié)經(jīng)驗、融會貫通，持續(xù)增強實驗的嚴謹性和科學(xué)性，更好地保障人民群眾的飲食、用藥、用妝安全。

關(guān)鍵詞：食品，藥品，化妝品，微生物檢驗

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.20.032

0 引 言

近年來，隨著國務(wù)院就市場監(jiān)管系統(tǒng)機構(gòu)改革提出的指導(dǎo)意見，各級市場監(jiān)督管理機構(gòu)陸續(xù)完成了改革，其下屬的檢驗機構(gòu)隨之整合，涉及產(chǎn)品領(lǐng)域涵蓋了食品、藥品和化妝品（以下簡稱三品類）等品類的檢驗。目前，各相關(guān)檢驗機構(gòu)的檢驗部門組織結(jié)構(gòu)一般分為理化、微生物、毒理病理、動物實驗等科室，其中微生物室承擔(dān)著三品類的微生物檢驗。微生物檢驗控制是保障三品類質(zhì)量安全的重要措施，與人民群眾飲食、用藥、用妝安全息息相關(guān)。三品類在微生物檢驗中既有相同點，又有不同點，檢驗工作中有值得相互借鑒之處，對微生物從業(yè)人員提出了更高要求，把握三品類的各自特點，才能保證出具可靠的檢驗數(shù)據(jù)、準(zhǔn)確的檢驗結(jié)果。本文通過分析比較三品類微生物檢驗的異同點，為相關(guān)從業(yè)機構(gòu)和同行提高檢驗檢測水平提供參考依據(jù)。

1 三品類微生物檢驗的重要性

食品微生物檢測是國家食品風(fēng)險監(jiān)控項目的組成部分[1]，《國家食品安全監(jiān)督抽檢實施細則（2022版）》中共涉及33個食品大類，其中設(shè)置微生物檢驗項目的有30個食品大類[2]。這足以證明食品微生物檢驗的重要性。

藥品是用于調(diào)節(jié)人的生理機能的物質(zhì)。微生物污染直接影響藥品有效性，還有可能危及用藥患者的生命安全[3]。

化妝品是施用于皮膚、毛發(fā)、指甲、口唇等人體表面的日用化學(xué)工業(yè)產(chǎn)品[4]。劉佩等[5]研究發(fā)現(xiàn)化妝品不合格項目中菌落數(shù)超限的不合格樣品最多，而化妝品污染微生物后可能會導(dǎo)致人體發(fā)生皮膚過敏、感染、眼部疾患等損傷，危害使用者的健康[5-6]。

2 三品類微生物檢驗的異同

2.1 三品類微生物檢驗的共同處

三品類微生物檢驗均是以微生物分析為基礎(chǔ)，是微生物分析應(yīng)用的不同分支。其共同點在于：一是檢驗對象一致，都是微生物，有著相同的檢驗原理；二是檢驗?zāi)康囊恢拢际菫榱藱z驗樣品污染微生物的程度，保證人民群眾的使用安全有效；三是開展檢驗依據(jù)的法典、標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)范等都是國家頒布的。

2.2 三品類微生物檢驗的不同處

三品類微生物檢驗在標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)、檢驗對象（微生物種類）、培養(yǎng)基、環(huán)境及設(shè)備、方法適用性等方面均有差異。就檢驗依據(jù)而言，三品類微生物檢驗依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)名稱、現(xiàn)行有效版本及標(biāo)準(zhǔn)更新情況均不同，微生物限度標(biāo)準(zhǔn)也有所不同。檢驗依據(jù)：食品為《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)》、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等；藥品為《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）；化妝品為《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》?，F(xiàn)行有效版本：食品為GB 4789《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗系列標(biāo)準(zhǔn)》；藥品為《中國藥典》2020年版四部；化妝品為《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2021年修訂版。食品標(biāo)準(zhǔn)不定期更新，需要及時查新；藥品標(biāo)準(zhǔn)自1985年版以來，更新周期為5年，2020年版為第十一版；化妝品標(biāo)準(zhǔn)不定期更新，2002年發(fā)布第一版 ，分別于2007、2015、2021年更新。

3 檢驗實踐中的借鑒

3.1 樣品采集

樣品采集是微生物檢驗的前置環(huán)節(jié)，也是關(guān)鍵影響要素，樣品是否具有代表性，直接關(guān)系到能否真實反映出樣品污染微生物的情況，影響檢驗結(jié)果。在抽樣方法和抽樣數(shù)量方面：食品隨機抽樣，根據(jù)檢驗?zāi)康牡戎贫ǘ壔蛉壊蓸臃桨?，抽取不少?份樣品；藥品隨機抽樣，不得抽取外包裝有明顯破損的樣品，抽取不少于2個最小包裝；化妝品要求樣品具有代表性，不少于2個包裝單位。在檢驗量方面：食品一般是25 g（mL）；藥品制劑一般是10 g（mL），大蜜丸、貼膏劑等特殊劑型另有規(guī)定，貴重藥品等檢驗量可酌減；化妝品一般是10g（mL）。

對比而言，本文認為食品抽樣方法更加復(fù)雜細致，更具隨機性和代表性，且檢驗量較大，能更好地反映出樣品的微生物真實污染水平。這與三品類的自身特點有關(guān)，相對于藥品和化妝品，食品抽樣包裝規(guī)格更大、使用量更大、使用人群范圍更廣、受輿論關(guān)注程度更高。

3.2 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基是微生物生長的物質(zhì)基礎(chǔ)，在微生物檢驗實驗物料中屬于關(guān)鍵要素，其質(zhì)量狀況直接影響檢驗結(jié)果。三品類質(zhì)控要求依據(jù)的區(qū)別：食品為GB 4789.28 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》；藥品為《中國藥典》四部通則（以下簡稱通則）9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則；化妝品未作要求。質(zhì)控試驗區(qū)別：食品為pH值、顏色、澄清度、生長率（PR值、G值、濁度值）、選擇性及特異性測試等；藥品為pH值、適用性檢查（回收率、促生長能力、抑制能力和指標(biāo)特性）、靈敏度檢查、穩(wěn)定性試驗；化妝品未作要求。

食品和藥品培養(yǎng)基質(zhì)控具體要求有所不同。比如通則9203藥品控制菌檢查培養(yǎng)基適用性試驗中僅對菌落生長狀況、大小和形態(tài)特征一致性作出要求；GB 4789.28食品培養(yǎng)基質(zhì)控則提出PR值、G值、濁度值等量化要求，實操性更強。再如，GB 4789.28要求培養(yǎng)基制備后標(biāo)記有效期，而通則9203中給出了保存參考期限（1周且須經(jīng)過驗證）。由此可見，食品和藥品培養(yǎng)基質(zhì)控各有優(yōu)劣，可相互借鑒，以保證培養(yǎng)基質(zhì)量，提高微生物檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性?；瘖y品微生物檢驗對培養(yǎng)基沒有提出質(zhì)控要求，其菌落總數(shù)用卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂，配方中的卵磷脂和吐溫80中和防腐劑的效果較差，可能造成檢驗結(jié)果不準(zhǔn)確[7]。建議參考食品、藥品用培養(yǎng)基的質(zhì)控要求，適當(dāng)進行控制。

3.3 實驗室環(huán)境要求

微生物檢驗對試驗環(huán)境要求較高，如果潔凈級別不達標(biāo)，可能造成樣品的二次污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。按行業(yè)共識，樣品的檢測環(huán)境不能低于生產(chǎn)環(huán)境，否則檢驗結(jié)果的可信度下降。三品類在環(huán)境要求方面：食品和化妝品均要求潔凈區(qū)域內(nèi)單方向工作流程；藥品要求不低于D級背景下的生物安全柜或B級潔凈區(qū)。在微生物監(jiān)測方面：食品對溫度、相對濕度、噪聲等物理參數(shù)有要求，藥品除溫度、相對濕度、噪聲等物理參數(shù)外，對懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物（含手套及操作服）等有明確要求；化妝品則未作要求，與藥品和化妝品相比較，食品標(biāo)準(zhǔn)對微生物的要求一般限值稍高，而且食品檢驗過程中，一般菌落生長比較多，對藥品和化妝品檢驗容易造成交叉污染，導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果。本文建議食品和化妝品實驗室可以參考通則9205的藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則開展?jié)崈舯O(jiān)測活動。微生物實驗室三品類潔凈區(qū)獨立設(shè)置可降低交叉污染的風(fēng)險，如果實驗室受條件限制沒有各自獨立區(qū)域，應(yīng)制定相應(yīng)的控制措施，避免出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果，保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.4 方法適用性

藥品微生物計數(shù)方法和控制菌檢查應(yīng)進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于本產(chǎn)品的微生物計數(shù)或控制菌檢查[8]?！吨袊幍洹?010年版以前，對方法適用性試驗未作要求，試驗中經(jīng)常遇到低稀釋級樣品沒有菌落生長，但高稀釋級樣品卻有菌落生長的現(xiàn)象。其原因在于可能是藥品中含有抑菌活性成分，方法適用性試驗可以去除樣品的抑菌活性。

在生產(chǎn)和加工食品的過程中使用化學(xué)防腐劑，能夠有效抑制微生物產(chǎn)生，延長保存期限。某些食品中有國家標(biāo)準(zhǔn)允許添加的防腐劑[9]，化妝品中加入防腐劑是為了控制化妝品衛(wèi)生質(zhì)量，但是防腐劑的存在會影響微生物的檢測結(jié)果[7]。食品和化妝品微生物檢驗未提出方法適用性的要求，但本文認為，為了增強試驗的科學(xué)性和嚴謹性，保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、真實性和可靠性，建議參考藥品微生物限度檢查的理念，開展方法適用性試驗考察及評估。目前，已有多個研究借鑒藥品微生物限度檢查方法適用性試驗對化妝品微生物檢驗開展方法適用性研究，用于判斷檢驗方法是否適用于相應(yīng)產(chǎn)品[10-12]。

3.5 實驗操作中的差異（以菌落總數(shù)為例）

三品類微生物檢驗在培養(yǎng)基配制、滅菌、儀器設(shè)備等方面要求相似，以菌落總數(shù)為例，比較三品類在稀釋液、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時間等方面的差異。稀釋液：食品用pH7.2 磷酸鹽緩沖液或0.85%生理鹽水；藥品用pH7. 0 無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，或 pH7.2 磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基；化妝品用0.85%生理鹽水。培養(yǎng)基：食品用PCA培養(yǎng)基；藥品用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；化妝品用卵磷脂吐溫 80 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度和時間：食品（36±1）℃培養(yǎng)（48±2） h，水產(chǎn)品（30±1）℃培養(yǎng)（72±3） h；藥品30～35℃培養(yǎng)3～5天；化妝品（36±1）℃培養(yǎng)（48±2） h。

4 微生物的鑒定

微生物鑒定是借助現(xiàn)有的分類系統(tǒng)，通過對未知微生物的特征測定，對其進行細菌、酵母菌和霉菌大類的區(qū)分或?qū)佟⒎N及菌株水平確定的過程[8]。藥品在微生物鑒定中可自行選擇適宜的驗證方法，呈現(xiàn)出開放性和靈活性[3]。食品中的致病菌、化妝品中的控制菌檢查在出現(xiàn)可疑菌落后，必須嚴格按照相應(yīng)的法定方法進行，不得自行變更。

5 結(jié) 語

通過對三品類微生物檢驗在檢驗依據(jù)、樣品采集及檢驗用量、培養(yǎng)基、實驗室環(huán)境、方法適用性、具體操作差異（以菌落總數(shù)為例）等方面進行對比分析，發(fā)現(xiàn)三品類微生物檢驗相似之處較多，兼具各自的特點，可以優(yōu)勢互補。食品微生物檢驗中檢驗程序更加詳細和明確，利于實際操作應(yīng)用；化妝品微生物檢驗由于開展時間較短，規(guī)范化程度尚待提高；而藥品微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)體系實現(xiàn)了與國際標(biāo)準(zhǔn)的接軌，可以對食品和化妝品的微生物鑒定提供借鑒。建議相關(guān)從業(yè)人員在工作中總結(jié)經(jīng)驗、融會貫通，關(guān)注實驗細節(jié)，持續(xù)增強實驗的嚴謹性和科學(xué)性，提高微生物檢驗的質(zhì)量控制水平，更好地保障人民群眾的飲食、用藥、用妝安全。