LncRNA SNHG17 通過miR-384 靶向AEG1 對非小細胞肺癌細胞生物學行為的調控作用

劉韻鵬, 劉子豪, 康伯銘, 楊志廣

（1.吉林大學第一醫院胸外科，吉林 長春 130021；2.吉林大學藥學院藥學系，吉林 長春 130021）

在世界范圍內，肺癌已經成為最常見的癌癥之一，目前已有針對肺癌高風險特定患者群體的重點治療策略，但多數非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）病例被診斷為晚期或已發生轉移，總體預后仍然很差［1］。因此，識別新的預后生物標志物已成為NSCLC 研究中最緊迫的挑戰之一。長鏈非編碼RNA （long non-coding RNA，lncRNA）是長度超過200 個核苷酸的非編碼RNA轉錄體家族，其失調在NSCLC、乳腺癌和胃癌等癌癥發生發展過程中發揮重要作用［2-4］。NSCLC 的發生發展與lncRNAs 和微小RNA （microRNA，miRNA）的表達失調有關，異常表達的非編碼RNA 可以作為NSCLC 的治療靶點及診斷和預后標志物［5］。lncRNA 參與調控細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡和耐藥等多種生理病理過程［6］。lncRNA 小核仁RNA 宿 主 基 因17 （lncRNA small nucleolar RNA host gene 17，lncRNA SNHG17）是 長 度 為1 186 個核苷酸的lncRNA，是SNHG 家族的成員，位于人類染色體20q11.23 上，在癌癥中發揮重要的 致 病 作 用［7］。MA 等［8］首 先 發 現SNHG17 在 結直腸癌中的過表達促進細胞增殖。SNHG17 在NSCLC［9］、肝 癌［10］、骨 肉 瘤［11］和 其 他 腫 瘤 組 織中過度表達，其表達水平與預后不良有關。SNHG17 可作為競爭性內源性RNA （competing endogenous RNA，ceRNA）吸附miRNAs，影響其他基因與該miRNAs 的結合，從而發揮調節基因表達的作用。目前，有研究［9］顯示：SNHG17 在NSCLC 中過表達。然而，目前尚不清楚SNHG17在NSCLC 中發揮作用的具體機制。本研究通過生物信息學方法分析miR-384 與SNHG17 和星形細胞上調基因1 （astrocyte elevated gene 1，AEG1）3′端非編碼區（3′-untranslated region，3′-UTR）之間的結合位點，探討SNHG17、miR-384 和AEG1在NSCLC 中的功能和調控關系，闡明lncRNA SNHG17 通過miR-384/AEG1 軸調控NSCLC 細胞生物學行為的機制，為尋找NSCLC 有價值的治療靶點提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 細胞、主要試劑和儀器NSCLC 細胞系（A549 和H1299 細胞）均購于中國典型培養物保藏中心。RPMI 1640 培養基和胎牛血清（FBS）購自美國Hyclone 公司，青鏈霉素混合液（×100）、Hieff TransTM脂質體核酸轉染試劑、第一鏈cDNA合成試劑盒、實時定量PCR 擴增預混液和BCA 蛋白質定量試劑盒均購自翌圣生物科技（上海）股份有限公司，TRIpure 總RNA 提取試劑盒購自北京百泰克生物技術有限公司，miRNA 快速提取試劑盒和miRNA 第一鏈cDNA 合成試劑盒購自北京全式金生物技術股份有限公司，Transwell 小室和基質凝膠購自美國Corning 公司，SNHG17 過表達質粒（pcDNA3.1-SNHG17）、SNHG17 小干擾RNA（si-SNHG17）、miR-384 模 擬 物 （miR-384 mimics）、miR-384 抑 制 劑（miR-384 inhibitor）和相應的陰性對照（NC）均購自上海GenePharma 公司。微量分光光度計購自美國Thermo Scientific 公司，實時熒光定量PCR （real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）儀購自德國耶拿公司，奧林巴斯CKX31 倒置光學顯微鏡購自日本奧林巴斯公司。

1.2 細胞培養A549 和H1299 細胞在含有10%FBS、100 U·mL－1青霉素和100 mg·L－1鏈霉素的RPMI 1640 培養基中，于37 ℃、5%CO2條件下培養。

1.3 RT-qPCR 法檢測A549 和H1299 細胞中SNHG17、miR-384 和AEG1 mRNA 表達水平收集各組細胞，按照總RNA 提取試劑盒說明書操作，檢測RNA 濃度及純度，并將RNA 逆轉錄為cDNA。根 據Hieff?qPCR SYBR Green Master Mix（No Rox）試劑盒說明書完成RT-qPCR 操作。分別以GAPDH 和U6 為內參，采用2－△△Ct法分別計算目的基因和目的miRNA 表達水平。引物序列：SNHG17 上 游 引 物，5′-TGAATCTCTTGGTGGTGTTTGTG-3′，SNHG17 下 游 引 物，5′-TGTCTGGACCCCGAATCTTG-3′；AEG1 上 游 引 物，5′-CCAGTTTCTCAGTCTACCACTT-3′，AEG1下 游 引 物 ，5′-CCCAGACCATTCATCATCGATA-3′；GAPDH 上 游 引 物，5′-CCTTCATTGACCTCAACTACATGG-3′，GAPDH 下 游 引 物，5′-CTCGCTCCTGGAAGATGGTG-3′；miR-384上游引物，5′-CTGCCGCGATTCCTAGAAATTGTTCA-3′，miR-384 下游引物為試劑盒通用下游引 物；U6 上 游 引 物，5′-GGTCGGGCAGGAAAGAGGGC-3′，U6 下游引物為試劑盒通用下游引物。實驗重復3 次。

1.4 細胞轉染A549 和H1299 細胞接種于6 孔細胞培養板，每孔5×104個細胞，待細胞密度達到60%～70%時，按照Hieff TransTM脂質體核酸轉染試劑說明書步驟操作，根據不同實驗的分組要求，分 別 將 pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-SNHG17、si-NC、si-SNHG17、mimics NC、miR-384 mimics、inhibitor NC、miR-384 inhibitor、pcDNA3.1-AEG1和si-AEG1 轉 染 至A549 或H1299 細 胞，采 用RT-qPCR 法檢測細胞轉染是否成功。

1.5 預測miR-384 與SNHG17 和AEG1 之間的靶向性采用ENCORI 數據庫（https：//starbase.sysu.edu.cn/index.php）預 測miR-384 與SNHG17和AEG1 之間的靶向性。

1.6 CCK-8 法檢測各組細胞的細胞活力收集各組細胞，離心重懸后稀釋至1×104mL－1的密度，在96 孔細胞培養板中接種100 μL 細胞懸液，放入培養箱孵育24 h 后，每孔加入CCK-8 溶液10 μL，培養箱內孵育1 h，酶標儀檢測450 nm 處的吸光度（A）值。細胞活力＝（干預組A 值－空白組A值）/（對照組A 值－空白組A 值）×100%。

1.7 Transwell 實驗檢測各組細胞遷移細胞數和侵襲細胞數在Transwell 遷移和侵襲實驗中，收集用0.25%胰蛋白酶處理的細胞，離心并用無血清培養基重懸，將200 μL 細胞（4×104mL－1）懸液加入無涂層或涂有基質凝膠的小室上層，將700 μL含15% FBS 的培養基加入下室。將細胞在37 ℃培養24 h。Transwell 膜用4%多聚甲醛固定20 min，用0.1%結晶紫染色，采用光學顯微鏡對遷移細胞數和侵襲細胞數進行計數。

1.8 Western blotting 法檢測各組細胞中AEG1 蛋白表達水平用預冷的RIPA 裂解液裂解細胞并在冰上孵育20 min，4 °C、13 000 r·min－1離 心15 min。收集上清液，使用BCA 蛋白質定量試劑盒對蛋白質進行定量。調節蛋白質濃度后，將蛋白質與SDS蛋白上樣緩沖液混合，在沸水中加熱5 min 并變性，然后行Western blotting 電泳。用5%脫脂奶粉封閉膜。將膜與稀釋的一抗孵育：AEG1抗體（1∶1 000，ABclonal）和 GAPDH 抗 體 （1∶2 000，ABclonal）在4 ℃下過夜，然后與二抗（1∶2 000，ABclonal）在室溫下孵育1 h。最后，TBST 洗膜3 次后，條帶使用顯影劑進行顯影。條帶灰度值使用Image J 軟件計算。以GAPDH 為內參，目的蛋白表達水平=目的蛋白條帶灰度值/GAPDH 蛋白條帶灰度值。

1.9 統計學分析采用SPSS 17.0 統計軟件進行統計學分析。各組細胞中lncRNA SNHG17、miR-384 和AEG1 mRNA 表達水平，各組細胞活力、遷移細胞數、侵襲細胞數及AEG1 蛋白表達水平均以x±s表示，多組間樣本均數比較采用單因素方差分析，組間樣本均數兩兩比較采用SNK-q檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 A549 和H1299 細胞中lncRNA SNHG17 表達水平H1299 細胞中lncRNA SNHG17 表達水平（0.66±0.09）明顯低于A549 細胞（1.01±0.11）（P<0.01）。因此，本研究選擇沉默A549 細胞中的lncRNA SNHG17 和過表達H1299 細胞中的lncRNA SNHG17 進行后續實驗。

2.2 沉默或過表達lncRNA SNHG17 實驗各組細胞中lncRNA SNHG17 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數在A549 細胞中，與si-NC 組比較，si-SNHG17 組細胞中SNHG17 表達水平和細胞活力明顯降低（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯減少（P<0.01）；在H1299 細胞中，與pcDNA3.1-NC 組比較，pcDNA3.1-SNHG17 組細胞中SNHG17 表達水平和細胞活力明顯升高（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯增加（P<0.01）。見表1。

表1 沉默或過表達lncRNA SNHG17 后各組細胞中lncRNA SNHG17 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數Tab.1 Expression levels of lncRNA SNHG17, cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after silencing lncRNA SNHG17 or over-expression of lncRNA SNHG17 (n=3，±s)

表1 沉默或過表達lncRNA SNHG17 后各組細胞中lncRNA SNHG17 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數Tab.1 Expression levels of lncRNA SNHG17, cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after silencing lncRNA SNHG17 or over-expression of lncRNA SNHG17 (n=3，±s)

*P<0.01 compared with si-NC group；△P<0.01 compared with pcDNA3.1-NC group.

Group si-NC (A549 cells)si-SNHG17 (A549 cells)pcDNA3.1-NC (H1299 cells)pcDNA3.1-SNHG17 (H1299 cells)Number of invasion cells 191.00±5.03 111.00±3.06*147.00±6.11 271.00±7.21△lncRNA SNHG17 1.03±0.24 0.21±0.02*1.02±0.19 6.35±1.42△Cell viability(η/%)95.32±5.45 45.68±10.22*96.56±3.89 136.23±10.93△Number of migration cells 384.00±12.00 289.00±6.08*499.00±13.53 716.00±11.27△

2.3 沉默或過表達lncRNA SNHG17 后各組細胞中miR-384 和AEG1 mRNA 表達水平在A549 細胞中，與si-NC 組比較，si-SNHG17 組細胞中miR-384 表達水平明顯升高（P<0.01），AEG1 mRNA 表達水平明顯降低（P<0.01）；在H1299細胞中，與pcDNA3.1-NC 組比較，pcDNA3.1-SNHG17 組細胞中miR-384 表達水平明顯降低（P<0.01），AEG1 mRNA 表 達 水 平 明 顯 升 高（P<0.01）。見表2。

表2 沉默或過表達lncRNA SNHG17 后各組細胞中miR-384 和AEG1 mRNA 表 達 水 平Tab.2 Expression levels of miR-384 and AEG1 mRNA in cells in various groups after silencing lncRNA SNHG17 or over-expression of lncRNA SNHG17 (n=3，±s)

表2 沉默或過表達lncRNA SNHG17 后各組細胞中miR-384 和AEG1 mRNA 表 達 水 平Tab.2 Expression levels of miR-384 and AEG1 mRNA in cells in various groups after silencing lncRNA SNHG17 or over-expression of lncRNA SNHG17 (n=3，±s)

*P<0.01 compared with si-NC group；△P<0.01 compared with pcDNA3.1-NC group.

AEG1 mRNA 1.03±0.24 0.06±0.02*1.02±0.19 2.34±0.27△Group si-NC(A549 cells)si-SNHG17(A549 cells)pcDNA3.1-NC(H1299 cells)pcDNA3.1-SNHG17(H1299 cells)miR-384 1.01±0.10 1.46±0.20*1.01±0.13 0.64±0.14△

2.4 抑制或增強miR-384 后各組細胞中miR-384表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數在A549 細胞中，與inhibitor NC 組比較，miR-384 inhibitor 組細胞中miR-384 表達水平明顯降低（P<0.01），細胞活力明顯升高（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯增加（P<0.01）；在H1299細胞中，與mimics NC 組比較，miR-384 mimics 組細胞中miR-384 表達水平明顯升高（P<0.01），細胞活力明顯降低（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯減少（P<0.01）。見表3。

表3 各組細胞中miR-384 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數Tab.3 Expression levels of miR-384, cell viabilities, numbers of migration and invasion cells in various groups (n=3，±s)

表3 各組細胞中miR-384 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數Tab.3 Expression levels of miR-384, cell viabilities, numbers of migration and invasion cells in various groups (n=3，±s)

*P<0.01 compared with inhibitor NC group；△P<0.01 compared with mimics NC group.

Group miR-384 Inhibitor NC(A549 cells)miR-384 inhibitor(A549 cells)Mimics NC(H1299 cells)miR-384 mimics(H1299 cells)Number of invasion cells 160.00±7.00 243.00±3.79*207.00±6.03 116.00±8.00△1.02±0.21 0.02±0.01*1.02±0.21 4.68±1.00△Cell viability(η/%)97.16±4.22 145.69±22.24*96.37±3.22 65.67±6.40△Number of migration cells 417.00±11.14 489.00±16.64*518.00±11.53 406.00±17.67△

2.5 抑制或增強lncRNA SNHG17 和miR-384 后各組AEG1 蛋白表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數采用ENCORI 數據庫預測SNHG17與miR-384 有2 個結合位點（圖1）。在A549 細胞中，與si-NC+inhibitor NC 組比較，si-SNHG17+inhibitor NC 組細胞中AEG1 蛋白表達水平和細胞活力明顯降低（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞 數 明 顯 減 少（P<0.01）；與si-SNHG17+inhibitor NC 組 比 較，si-SNHG17+miR-384 inhibitor 組細胞中AEG1 蛋白表達水平和細胞活力明顯升高（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明 顯 增 加（P<0.01）。在H1299 細 胞 中，與pcDNA3.1-NC+mimics NC 組比較，pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC 組細胞中AEG1 蛋白表達水平和細胞活力明顯升高（P<0.01），遷移細胞數和 侵 襲 細 胞 數 明 顯 增 加 （P<0.01）；與pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC 組 比 較，pcDNA3.1-SNHG17+miR-384 mimics 組細胞中AEG1 蛋白表達水平和細胞活力明顯降低（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯減少（P<0.01）。見表4 和圖2。

圖1 lncRNA SNHG17 與miR-384 的 結 合 位 點Fig.1 Binding sites of lncRNA SNHG17 and miR-384

圖2 抑 制 或 增 強 lncRNA SNHG17 和 miR-384 后Western blotting 法檢測各組細胞中AEG1 蛋白表達電泳圖Fig.2 Electrophoregram of expressions of AEG1 protein in cells in various groups detected by Western blotting method after inhibiting or enhancing lncRNA SNHG17 and miR-384

表4 抑制或增強lncRNA SNHG17 和miR-384 后各組細胞活力、遷移細胞數及侵襲細胞數Tab.4 Cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after inhibiting or enhancing lncRNA SNHG17 and miR-384 (n=3，±s)

表4 抑制或增強lncRNA SNHG17 和miR-384 后各組細胞活力、遷移細胞數及侵襲細胞數Tab.4 Cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after inhibiting or enhancing lncRNA SNHG17 and miR-384 (n=3，±s)

*P<0.01 compared with si-NC+inhibitor NC group；△P<0.01 compared with si-SNHG17+inhibitor NC group；#P<0.01 compared with pcDNA3.1-NC+mimics NC group；○P<0.01 compared with pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC group.

Expression level of AEG1 protein 1.00±0.03 0.72±0.01*0.81±0.01△1.00±0.02 2.26±0.04#1.56±0.02○Group si-NC+inhibitor NC(A549 cells)si-SNHG17+inhibitor NC(A549 cells)si-SNHG17+miR-384 inhibitor(A549 cells)pcDNA3.1-NC+mimics NC(H1299 cells)pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC(H1299 cells)pcDNA3.1-SNHG17+miR-384 mimics(H1299 cells)Cell viability(η/%)98.07±4.84 63.26±6.04*78.69±6.65△101.26±5.91 138.61±9.05#108.64±7.87○Number of migration cells 364.00±18.15 314.00±8.72*350.00±8.74△496.00±18.23 674.00±6.93#582.00±14.53○Number of invasion cells 195.00±9.85 108.00±6.11*199.00±11.15△148.00±4.58 271.00±9.07#221.00±3.79○

2.6 抑制或增強AEG1 后各組細胞中AEG1 mRNA 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數在A549 細胞中，與si-NC 組比較，si-AEG1組細胞中AEG1 mRNA 表達水平和細胞活力明顯降低（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯減 少 （P<0.01）；在 H1299 細 胞 中，與pcDNA3.1-NC 組 比 較，pcDNA3.1-AEG1 組 細 胞中AEG1 mRNA 表達水平和細胞活力明顯升高（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯增加（P<0.01）。見表5。

表5 抑制或增強AEG1 后各組細胞中AEG1 mRNA 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數Tab.5 Expression levels of AEG1 mRNA in cells, cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after inhibiting or enhancing AEG1 (n=3，±s)

表5 抑制或增強AEG1 后各組細胞中AEG1 mRNA 表達水平、細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數Tab.5 Expression levels of AEG1 mRNA in cells, cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after inhibiting or enhancing AEG1 (n=3，±s)

*P<0.01 compared with si-NC group；△P<0.01 compared with pcDNA3.1-NC group.

Group si-NC(A549 cells)si-AEG1(A549 cells)pcDNA3.1-NC(H1299 cells)pcDNA3.1-AEG1(H1299 cells)Number of invasion cells 167.00±6.03 115.00±10.02*137.00±7.09 282.00±3.79△AEG1 mRNA 1.02±0.22 0.56±0.08*1.01±0.11 3.15±0.90△Cell viability (η/%)98.67±4.76 71.32±8.98*99.21±7.66 132.32±9.33△Number of migration cells 381.00±13.08 308.00±10.26*499.00±11.53 609.00±11.14△

2.7 抑制或增強miR-384 和AEG1 mRNA 后各組細胞活力、遷移細胞數和侵襲細胞數ENCORI 數據庫中顯示：TargetScan 預測miR-384 與AEG1 有1 個結合位點（圖3）。在A549 細胞中，與inhibitor NC+si-NC 組 比 較，miR-384 inhibitor+si-NC 組 細胞中細胞活力明顯升高（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯增加（P<0.01）；與miR-384 inhibitor+si-NC 組 比 較，miR-384 inhibitor+si-AEG1 組細胞中細胞活力明顯降低（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯減少（P<0.01）。在H1299 細 胞 中，與mimics NC+pcDNA3.1-NC 組比較，miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC 組細胞中細胞活力明顯降低（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯減少（P<0.01）；與miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC 組 比 較，miR-384 mimics+pcDNA3.1-AEG1 組細胞中細胞活力明顯升高（P<0.01），遷移細胞數和侵襲細胞數明顯增加（P<0.01）。見表6。

表6 抑制或增強miR-384 和AEG1 mRNA 后各組細胞活力、遷移和侵襲細胞數Tab.6 Cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after inhibiting or enhancing miR-384 and AEG1 mRNA (n=3，±s)

表6 抑制或增強miR-384 和AEG1 mRNA 后各組細胞活力、遷移和侵襲細胞數Tab.6 Cell viabilities and numbers of migration and invasion cells in various groups after inhibiting or enhancing miR-384 and AEG1 mRNA (n=3，±s)

*P<0.01 compared with inhibitor NC+si-NC group；△P<0.01 compared with miR-384 inhibitor+si-NC group；#P<0.01 compared with mimics NC+pcDNA3.1-NC group；○P<0.01 compared with miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC group.

Number of invasion cells 161.00±6.11 256.00±9.17*172.00±9.07△162.00±6.03 117.00±2.08#142.00±8.71○Group Inhibitor NC+si-NC(A549 cells)miR-384 inhibitor+si-NC(A549 cells)miR-384 inhibitor+si-AEG1(A549 cells)Mimics NC+pcDNA3.1-NC(H1299 cells)miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC(H1299 cells)miR-384 mimics+pcDNA3.1-AEG1(H1299 cells)Cell viability(η/%)101.36±7.40 145.37±19.97*112.36±7.47△98.63±8.83 63.17±9.12#81.06±5.75○Number of migration cells 408.00±12.58 481.00±8.66*425.00±9.07△520.00±8.14 401.00±10.44#589.00±6.24○

圖3 miR-384 與AEG1 的 結 合 位 點Fig.3 Binding sites of miR-384 and AEG1

3 討 論

肺癌的發病率和死亡率逐年上升，對人類健康構成嚴重威脅，其中約85%為NSCLC［12］。分子靶向療法和免疫療法明顯改善了NSCLC 患者的預后［13］。近年來，大量研究報道lncRNA 在癌癥中發揮至關重要的作用，受到廣泛關注。lncRNA 在NSCLC 發生發展過程中具有重要意義，如長非編碼RNA 巨人皂甙（lnc-GAN1）在NSCLC 中的表達與患者良好的存活率相關，并通過吸附miR-26a-5p激活磷酸酶和張力蛋白同源物（phoshatase and tensin homolog，PTEN）信號傳導來抑制腫瘤進展［14］。本研究結果顯示：在A549 細胞中SNHG17表達量高于H1299 細胞，過表達SNHG17 可以促進NSCLC 細胞的增殖、遷移和侵襲，而沉默SNHG17 抑制NSCLC 細胞的增殖、遷移和侵襲，表明SNHG17 在NSCLC 中發揮重要作用，為其作為NSCLC 治療靶點提供理論依據。

與其他lncRNA 相似，lncRNA SNHG17 也可以作為ceRNA 與幾種miRNA 相互作用，從而對癌細胞產生影響。因此，研究lncRNAs 和miRNAs 在NSCLC 進展中的作用，深入探討其分子機制，為NSCLC 的治療提供潛在的治療靶點。lncRNA SNHG17 可以通過調節miRNA-375/配對盒6（paired box 6，PAX6）軸促進口腔鱗狀細胞癌的進 展［15］；lncRNA SNHG17 還 可 以 通 過 靶 向miRNA-338-3p/SRY-box 轉 錄 因 子4 （SRY-box transcription factor 4，SOX4）軸調控食管鱗狀細胞癌的細胞增殖和侵襲［16］。本研究結果顯示：lncRNA SNHG17 還可以通過靶向miR-384/AEG1軸調控NSCLC 的細胞增殖、遷移細胞數和侵襲細胞數。SNHG17 在NSCLC 組織和細胞系中上調并與晚期TNM 分期和較短的總生存期相關［17-18］。在本研究中，過表達或沉默lncRNA SNHG17 后，AEG1 mRNA 表達水平會隨lncRNA SNHG17 的過表達或沉默而升高或降低，而miR-384 的表達水平會隨lncRNA SNHG17 的過表達或沉默而降低或升高，與FAN 等［19］的相關研究結果一致。ENCORI數據庫是一個開源平臺，用于從CLIP-seq、degradome-seq 和RNA-RNA 相互作用數據中研究miRNA-ncRNA、miRNA-mRNA、ncRNA-RNA、RNA-RNA、RBP-ncRNA 和RBP-mRNA 相 互 作用。采用ENCORI 數據庫預測SNHG17 與miR-384的結合位點以及miR-384 與AEG1 的結合位點，說明SNHG17 與miR-384 以 及miR-384 與AEG1 之 間靶向性良好。miR-384 可以影響胃癌和膠質瘤等細胞的生物學功能［20-21］。研究［22-23］顯示：miR-384 還可以影響NSCLC 細胞的增殖、轉移、化療耐藥性、凋亡和自噬。在本研究中通過對miR-384 進行過表達和抑制，結果顯示：其表達水平升高與NSCLC 的細胞活力降低及遷移細胞數和侵襲細胞數減少有關。AEG1 在各種癌癥類型中具有多方面的功能，其差異表達具有重要的臨床病理學意義，有作為治療靶點開發分子抑制劑的潛力。AEG1 參與調控NSCLC 的增殖、遷移、侵襲、化療耐藥和放射耐藥［24］。本研究通過對AEG1 進行過表達或抑制，結果顯示：AEG1 表達水平降低與NSCLC的細胞活力降低，遷移細胞數和侵襲細胞數減少有關。雖然lncRNA SNHG17、miR-384 和AEG1 分別在NSCLC 中均有相關研究，但相關數據資料仍舊較少，而且三者之間的調控機制在NSCLC 中尚無相關報道，因此本研究對lncRNA SNHG17/miR-384/AEG1 軸對NSCLC 細胞生物學功能影響進行了深入研究。本實驗結果表明：miR-384 inhibitor 部分逆轉了si-SNHG17 抑制細胞增殖、遷移和侵襲的作用，miR-384 mimics 部分逆轉了pcDNA3.1-SNHG17 促進細胞增殖、遷移和侵襲的作 用，說 明SNHG17 可 以 通 過miR-384 調 控NSCLC 細胞的增殖、遷移和侵襲。si-AEG1 部分逆轉了miR-384 inhibitor 促進細胞增殖、遷移和侵襲的作用，pcDNA3.1-AEG1 部分逆轉了miR-384 mimics 抑制細胞增殖、遷移和侵襲的作用，說明miR-384 可以通過AEG1 調控NSCLC 細胞增殖、遷移和侵襲。lncRNA SNHG17 可以通過miR-384靶向AEG1 調控NSCLC 細胞的增殖、遷移和侵襲［25］，表 明lncRNA SNHG17/miR-384/AEG1 軸在NSCLC 基因靶向治療中具有巨大潛力。

綜上所述，本研究證明了lncRNA SNHG17 通過miR-384/AEG1 軸調節NSCLC 細胞的增殖、遷移和侵襲，進而促進NSCLC 的進展。本研究通過對NSCLC 進展的分子機制進行深入研究，為NSCLC 患者的治療提供了一個潛在的治療靶點，為疾病的治療開發了潛在的生物標志物。