近年禽腦脊髓炎病毒流行病學與重點防控方向

高天佐，孫娜娜，宋姍姍，趙成龍，張玉杰，段坦然，鄂偉，楊雪

（青島易邦生物工程有限公司動物基因國家重點實驗室 山東青島 266041）

1 病原學

1.1 分類及形態

禽腦脊髓炎病毒（AEV）屬于細小核糖核酸病毒科，腸道病毒屬，無囊膜，病毒粒子直徑為20～30nm，呈球形，該病毒只有一個血清型。

1.2 生物學特征

不同分離株屬于同一血清型，但可根據對組織的侵蝕性不同，分為嗜腸型和嗜神經型，嗜腸型以自然野毒株為代表，通過口腔感染雞，并在糞便中傳播；嗜神經型以胚適應株為代表，口腔一般不引起發病，通過腦內接種可引起嚴重的神經癥狀。

2 流行病學

2.1 AEV 發病歷史回顧

1932 年美國首先報道此病，其后開始在非洲、亞洲、澳大利亞、歐洲以及北美和南美蔓延；近年來，在伊朗、日本、巴西、韓國、希臘等國家時有發病的報道。

在我國，1980 年曾有疑似發病的報道；1982 年通過病理組織學方法，作出了此病的診療報告；1983 年通過流行病學調查、病理組織學的研究和人工發病等試驗，確診了此病，進一步證實AEV在我國的存在。此后，廣西、江蘇、福建、上海、山東、內蒙古、黑龍江、河北、河南、江西、湖北等全國大多數商業化養禽地區都有此病的報道[1]。

2.2 近年流行規律及發病特點

1）本病季節性不明顯，一年四季均可發生，雞、野雞、鵪鶉、火雞和鴿子均可感染本病，雞對本病最易感，產蛋雞主要表現一過性產蛋下降現象，本病既可垂直傳播，也可通過消化道等水平傳播，種雞產蛋期間感染后4 周內所產的種蛋帶有病毒，少部分感染的胚蛋在孵化后期死亡，大部分感染的雞胚可以孵化出殼，但出殼的雛雞在出殼后陸續出現典型的發病癥狀，隨著種雞感染后期抗體的產生與穩定，蛋傳現象隨之逐漸降低甚至消失[2]。

2）以往的認知中，AEV 在育成階段可感染并不表現臨床癥狀，但近年國內許多養殖場免疫多在用進口AEV 活疫苗，1～4 周左右的雞群不斷出現消瘦、癱瘓和頭頸震顫、翅膀下垂等雞只，且可持續長達一個月以上，發病率在1%～10%不等，大群正常，個別案例病程持續時間長，有的甚至持續到開產后，給養殖企業造成巨大損失，也是近期AE 發病的主要原因。

3 實驗室檢測數據分析

截至目前統計該現象明顯呈上升趨勢，發病時間（圖1，圖2）沒有明顯規律性，發病群間（圖3）主要為蛋雞系列（蛋雞、蛋種雞）其次為肉種雞，北方地區蛋用型雞群飼養較多，發病也較為突出（圖4），發病日齡（圖5）多集中在90～120 日齡。

圖1 2021 年發病時間分布

圖2 1～8 月發病時間分布（2021-2022 年）

圖3 發病群間分布

圖4 發病空間分布

圖5 發病日齡分布

4 近年相關案例分享

4.1 案例

案例1：2020 年山東煙臺某蛋雞養殖公司，50 日齡免疫進口A 公司AEV 活疫苗，70 日齡左右均出現不同程度癱瘓現象，主要表現側癱（如圖6，圖7），比例可高達10%左右，開產后未發現新增。

圖6 癱瘓、側癱

圖7 癱瘓、側癱

案例2：2021 年山東德州某90 日齡蛋種雞群免疫進口B 公司AEV 活疫苗，兩周后出現癱瘓。同一個場3 個雞舍110 日齡時都發現明顯癱瘓，比例約在0.5%。

案例3：2022 年山西某肉種雞養殖公司，90 日齡免疫AEV 活疫苗，免后20 d 左右陸續出現癱雞（如圖8-圖10）

圖8 山西肉種雞側癱

圖9 山西肉種雞癱瘓

圖10 山西肉種雞癱瘓、側癱

案例4：2022 年吉林省某肉種雞養殖公司，2.4 萬套，51 日齡AEV活疫苗免疫，67 日齡常規免疫時發現癱瘓（如圖11，圖12）；6 棟雞舍，均出現，公雞少（肉種公雞飼養量多明顯低于母雞），母雞多，26 d 時間合計淘汰1.5%。

圖11 病雞癱瘓

圖12 病雞側癱

4.2 病原檢測

1）熒光PCR。通過熒光PCR 檢測，如圖13 中出現一條明顯的擴增線為滑液囊支原體（MS）陽性對照，檢測樣本均未出現明顯的擴增曲線。

圖13 熒光PCR 結果

2）RT-PCR/PCR 結果。送檢樣本通過RT-PCR/PCR 檢測到AEV 目的性基因條帶并送測序公司測序；均未檢測到病毒性關節炎與滑液囊支原體目的性基因條帶，圖14 為常規檢測樣本PTPCR/PCR 電泳結果，其中上數第2 排第6-10 樣本（圖15 為結果放大后圖片），檢測樣本分別為送檢樣本1、送檢樣本2、送檢樣本1、mark（2 000bp）、送檢樣本2，其中6、7 為短引物（285bp 擴增性廣，國內流行腦炎毒株外還可檢測日本腦炎），8、10 為AEV 長引物（1 600bp 針對性強）。

圖14 常規檢測電泳圖

圖15 結果放大后圖片

3）測序結果。通過RT-PCR 檢測對送檢樣本進行鑒定后送基因公司進行測序比對發現，AEV 活疫苗免疫后出現癱瘓、側癱情況多與疫苗關鍵位點突變有關，選擇部分發病群體使用的AEV 活疫苗進行測序比對，發現均在1408 位發生突變且存在毒力增強風險，與這部分雞群病雞腦組織中分離的AEV 毒株在VP2、VP3 核苷酸序列上同源性分別為99.8%、99.7%，而且在與致病力相關核苷酸位點1408 位均發生突變。

4）細菌分離。未分離到細菌。

5 AEV 毒力相關位點研究

5.1 AEV 傳代過程中毒力的增強

參考國外相關文獻（表1），疫苗毒、野毒隨著傳代次數增加，19日齡胚體癱瘓比率增加、胚胎死亡率增加，相比對照組，19 日齡胚體平均重量下降明顯。

表1 傳代過程中毒力的增強

5.2 AEV 傳代過程中位點改變情況

通過整合測序結果發現，部分疫苗毒于第五代在1120 位出現A 到G 堿基變化；野毒株此位點未出現變化；部分疫苗株、野毒株并可于第五代在1408 位出現C 到T 堿基變化（表2）。

表2 測序結果比對

6 血清學酶聯免疫吸附實驗（ELISA）

隨著國內雞群疫苗免疫意識越來越強、免疫廠家以及管理參差不齊的境況下，為了便于臨床診斷，試圖盡可能地通過Elisa（IDEXX）滴度值反映出雞群中野毒與疫苗毒之間的差距，近年對送檢樣本檢測中心收集并統計綜合數據（實驗室數據與送檢情況相關，僅供參考），取平均值作為目前國內雞群的參考值，雞群抗體滴度明顯高于參考值，建議結合場內、雞群實際情況等綜合因素進行分析，目前主要免疫品種為蛋（種）雞（圖16）、肉種雞（圖17）。

圖16 蛋（種）雞AE 參考值

圖17 肉種雞AE 參考值

7 討論

腦炎免疫后出現明顯癱瘓問題通過檢測顯示與毒株突變造成毒力增強有關，AEV 活疫苗的生產工藝具有較高的技術要求，建議選擇工藝成熟，質量可靠的疫苗預防，并嚴格按照免疫劑量進行免疫；在這里還要強調一下，也不是所有的癱瘓都是AEV 活疫苗毒力增強所致，臨床中要注意與滑液囊支原體、病毒性關節炎、飼料營養吸收等疾病及管理因素做好區分；疫苗毒可以在腦部檢測到，屬于正?，F象，需要通過基因測序進一步分析進行區分。