南昌市2301 例5 歲以下兒童病毒性腹瀉病原檢測結果分析

張艷妮，熊英，龔甜，李健雄，施勇，徐剛

（江西省疾病預防控制中心，江西 南昌 330029）

腹瀉通常是指一天內大便次數大于3 次且有性狀改變的消化道綜合征，一般可由多種因素、多種病原引起；是全球重要的公共衛生問題之一[1]。在我國兒童腹瀉是一種常見疾病，其發病率幾次于呼吸道感染類疾病[2]。引起兒童腹瀉的常見病毒有輪狀病毒、諾如病毒、腸道腺病毒、星狀病毒等。本研究通過對2010 年5 月至2021 年4 月在江西省兒童醫院采集的2 301 份腹瀉患兒的標本，采用Real-timePCR 和RT-PCR 等方法輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、星狀病毒等腹瀉相關病毒的檢測，了解南昌市病毒性腹瀉的病原體及其流行特征，為南昌市病毒性腹瀉的預防提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 標本 根據《腹瀉癥候群監測技術方法》里關于腹瀉病例的定義，在江西省兒童醫院采集每日排便3 次以上且糞便性狀有明顯改變門診腹瀉患兒的糞便標本，于-80℃保存。

1.2 方法

1.2.1 標本處理 取15 mL 的離心管，加入4.5 mL的PBS，取0.5 g 的標本，用震蕩器震蕩10 min，制成10%的混懸液，再3 000 rpm 離心10 min，取200 ul 上清提核酸，其余上清裝入凍存管于-80℃保存備用。

1.2.2 病毒檢測 上清采用GIAGEN 公司的mini kit 試劑盒提取核酸，提取方法參考試劑盒說明書；8 種病毒檢測方法參考 《腹瀉癥候群監測技術方法》。

1.3 統計學分析 所采集的標本按照患兒年齡進行分組，0～6 月、6～12 月、1～2 歲、2～3 歲、3～4 歲、4～5 歲共6 組進行統計分析；數據采用Excel 2007軟件進行數據統計處理，用SPSS 21 軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基本情況 2010 年5 月至2021 年4 月共采集2 301 份腹瀉患兒標本，其中男性患兒1 537 例，女性患兒764 例，男女患兒的比例為2.01:1。在2010年至2018 年的監測中，腹瀉標本的陽性率總體呈現逐年下降趨勢，由2010 年最高61.11%下降至2017 年19.74%；見圖1。

圖1 2010 年5 月至2021 年4 月各年標本檢測陽性率分布

2.2 病毒性腹瀉病原普構成 2 301 份腹瀉患兒標本，898 份標本陽性，總陽性率為39.03%（898/2 301），其中混合感染130 份，占14.48%（130/898）。A 組輪狀病毒共檢出陽性498 份，陽性率為21.64%（498/2 301）；B 組輪狀病毒共檢出陽性19份，陽性率為0.90%（19/2 102）；C 組輪狀病毒共檢出陽性13 份，陽性率為0.62%（13/2 102）；諾如病毒GI 共檢出陽性6 份，陽性率為0.26%（6/2 301）；諾如病毒GII 共檢出陽性260 份，陽性率為11.30%（260/2 301）；扎如病毒共檢出陽性18 份，陽性率為0.78%（18/2 301）；腺病毒病毒共檢出陽性156 份，陽性率為6.78%（156/2 301）；星狀病毒共檢出陽性65 份，陽性率為2.82%（65/2 301）。

2.3 7 種病毒分別與性別、年齡、季節單因素分析A 組輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、星狀病毒、扎如病毒、B 組輪狀病毒和C 組輪狀病毒分別于性別、年齡、季節單因素關系分析，具體見表1—2。

2.3.1 A 組輪狀病毒 由表1 可以看到，輪狀病毒的感染與年齡和季節有關系，與性別沒有關系。與其他任意一年齡組相比，1～2 歲兒童是A 組輪狀病毒易感人群（P＜0.001），感染率高達29.84%；冬季是A 組輪狀病毒的高發 （P＜0.001），陽性率為43.2%，夏季的陽性率最低（9.44%）。

2.3.2 諾如病毒 由表1 可以看到，諾如病毒的感染與性別、年齡和季節均存在相關性。男性的感染率（13.21%）明顯的高于女性（8.25%）（P＜0.001）；與其他任意一年齡組相比，1～2 歲組諾如病毒的陽性率最高為15.48%（P＜0.001）；夏季是諾如病毒高發（P＜0.001），陽性率為16.20%。諾如病毒進行了分型，其中GI 為6 例，GII 為259 例，諾如病毒GII的構成比97.74%，為諾如病毒流行的優勢基因型。

表1 A 組輪狀病毒和諾如病毒感染因素的單因素分析

2.3.3 腺病毒 腺病毒的感染與性別和年齡均沒有關系，只與季節有關系。春季是腺病毒的高發季節（P＜0.05）,檢出率高達9.11%。

2.3.4 星狀病毒 星狀病毒的感染與性別和年齡均沒有關系，只與季節有關系。冬季是星狀病毒的高發季節（P＜0.001），檢出率高達6.67%，夏季檢出率最低為0.89%。

2.3.5 扎如病毒 扎如病毒的感染與性別和年齡均沒有關系，只與季節有關系。秋季是扎如病毒的高發季節（P＜0.05），檢出率最高1.62%。

2.3.6 B 組輪狀病毒和C 組輪狀病毒 B 組輪狀病毒感染與性別、年齡和季節均沒有關系。C 組輪狀病毒感染與性別沒有關系。與其他年齡組相比，3歲年齡組的檢出率最高3.28%，在4 歲年齡組未檢出C 組輪狀病毒。夏季是C 組輪狀病毒的高發季節（P＜0.05），檢出率最高1.36%。

2.4 監測各年份病原普構成 由連續11 年的監測分析得知，引起5 歲以下兒童的腹瀉主要病原體是A 組輪狀病毒和諾如病毒，但是每年的病原普構成又存在一定的差異；見圖2。A 組輪狀病毒和諾如病毒在2010 至2014 年所占的比例別為：2010 年54.55% 和39.23%、2011 年53.85% 和30.07%、2012 年 56.72% 和 32.84%、2013 年63.83%和18.08%、2014 年54.05%和35.13%，都是當年引起兒童腹瀉的主要病原體；在2015 年，雖然A 組輪狀病毒仍然是主要病原體，但星狀病毒所占的比例卻和諾如病毒相同，也是當年引起腹瀉的主要病原體。而在2016 年，扎如病毒則的檢出率比A 組輪狀病毒和諾如病毒都高，則成為當年的主要病原體。2019 年腺病毒的檢出率明顯高于A 組輪狀病毒，諾如病毒和腺病毒則是引起腹瀉的主要病原體。

圖2 2010.5 至2021.4 各年腹瀉病原普構成

表2 腺病毒、星狀病毒、扎如病毒和B 組、C 組輪狀病毒感染因素的單因素分析

3 討論

腹瀉是一種急性胃腸道傳染病，其主要傳播途徑為糞-口傳播，兒童是主要的易感人群；是一種嚴重危害兒童健康的疾病，是影響兒童健康發育的主要因素[3]。在連續11 年對南昌市5 歲以下腹瀉患兒糞便標本檢測結果分析顯示，2 歲以內兒童腹瀉相關病原的檢出率是最高的，這可能與低齡幼兒全身免疫系統發育不完善有關，與龔春華、龔四堂等文獻報道相一致[4-6]。A 組輪狀病毒和諾如病毒是引起5 歲以下兒童腹瀉的主要病原體，但隨著監測時間的增加發現每一年的病原普構成又存在一定的差異。2017 年只檢出了A 組輪狀病毒和星狀病毒，其他病毒均未檢出；2018 年的主要病原體則是A 組輪狀病毒和腺病毒；2019 年的主要病原體則是諾如病毒和腺病毒。B 組輪狀病毒和C組輪狀病毒的檢出率較少，而且自2015 年以后均沒有檢出，這說明其不是南昌市5 歲以下兒童腹瀉的常見病原體，這與任增志等的文獻報道相一致[3]，有文獻報道B 組和C 組輪狀病毒是成人腹瀉的常見病原體[7-8]，因此在后續對兒童腹瀉的監測中，并未對B 組和C 組輪狀病毒進行監測。

A 組輪狀病毒是引起兒童腹瀉的主要病原體，但各年齡組的陽性率有顯著性差異，1～2 歲組的陽性率最高，6 個月以內嬰兒陽性率反而較低，這可能與6 個月以內嬰兒有母傳抗體的保護，對病毒有一定的抵抗力；6 月后母傳抗體慢慢降低，而自身的免疫系統又發育不完全抵抗力低下有關。A 組輪狀病毒感染有明顯的季節性，秋冬季發病率顯著高于春夏季，冬季檢出率高達43.2%；這可能與冬季溫度較低，有利于病毒長期存活有一定關系，這與國內外研究結果相一致[6，8-9]。

諾如病毒感染與性別、年齡和季節都有關系，在年齡分布上與輪狀病毒相似，1～2 歲組的陽性率最高；但是諾如病毒的高發季節則為夏季，與崔曉雙、文獻報道的秋季高發則不同[10]，與陳惠芳等[11]報道其流行沒有明顯的季節性分布也不相同；這可能與監測病例的選擇、當地的氣候特點等因素有關。本研究重點是監測5 歲以下兒童的腹瀉情況，并未對5 歲以上兒童及其他年齡組人群進行監測。諾如病毒的傳染性強，有多種傳播途徑，可經人傳人、食物和水傳播和糞口途徑等途徑傳播，人群聚集的地方易引起暴發；諾如病毒全年均可檢出，應加強南昌市諾如病毒的監測，全面掌握其流行規律及特點，諾如病毒的預防和防控提供數據支撐[12]。

腺病毒也是引起腹瀉的一種常見病原體，可通過糞-口途徑傳播。本研究顯示腺病毒的陽性率為6.78%，除2017 年外，其它年份均可檢出，其感染性與季節性有關，春季為其高發季節。星狀病毒也是一種引起腹瀉的常見病原體，但檢出率一直處于較低的水平，且冬季為其高發季節，年齡分布無統計學差異。扎如病毒只在2012、2013 和2016年有檢出，且2016 年扎如病毒的檢出率最高38.71%，并高于A 組輪狀病毒29.03%，成為當年腹瀉的主要病原體。但是扎如病毒在其他年份檢出率很低或者未檢出，很難掌握扎如病毒的流行特征，后續可以加強扎如病毒的監測，掌握其在南昌市的流行特點與規律。

隨著監測研究的持續進行，發現的合并感染病例越來越多，也越來越受到人們的重視。本研究共發現124 例合并感染，占比高達14.22%；明顯高于陳惠芳等文獻研究報道4.8%和劉志華等報道的10.4%[11-13]。合并感染對醫生確定腹瀉病原帶來一定的困難，可開展腹瀉多病原監測，為醫生診斷提供處理依據。

綜上所述，通過對南昌市2010 年5 月至2021年4 月的5 歲以下兒童腹瀉監測研究發現，南昌市5 歲以下兒童腹瀉的主要病原體是輪狀病毒和諾如病毒，其次是腺病毒，星狀病毒和扎如病毒一直維持在一個較低的檢出水平；通過本研究對南昌市腹瀉癥候群病原普構成有了全面的了解，為腹瀉類疾病的防控及疫情的處置提供有效的數據支撐。