新生兒溶血病檢測結果在臨床診斷中的應用

王蓮慧，徐子恒，舒錦，萬貝妮，劉昕

（江西省兒童醫院輸血科，江西 南昌 330006）

新生兒溶血病（HDFN）指母嬰血型不合所引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性貧血、黃疸、胎兒水腫、肝脾腫大、膽紅素腦病等一系列臨床表現的疾病[1]。胎兒從父親遺傳了母親所缺乏的紅細胞抗原[2]，攜帶此類抗原的紅細胞經胎盤進入母體并刺激母親產生相應的IgG 類免疫性抗體[3]，該類抗體可通過胎盤引起胎兒特異性抗原抗體反應，使胎兒在宮內或出生后大量紅細胞被破壞。近年來，HDFN 的檢出率呈逐年上升趨勢[4]，引起HDFN 的血型抗原中以ABO 系統最為普遍，其次是Rh 系統，Lewis、Kell、Kidd、Duffy 等系統引起的HDFN 也有報道[5-6]。本研究收集本院2021 年4 月至2022年1 月以來922 例疑似HDFN 的高膽紅素血癥患兒標本，進行溶血病檢測并分析，了解HDFN 的血清學檢測結果及其臨床意義，分析檢測結果在臨床中的應用價值，以期輔助臨床提高治療效果。

1 資料與方法

1.1 病例資料 2021 年4 月至2022 年1 月期間我院送檢的疑似HDFN 高膽紅素血癥患兒標本，確認為HDFN 的患兒247 例，年齡區間從1～34 d，總膽紅素區間從58 到620 μmol/L 不等，EDTA-K2抗凝管采集患兒靜脈血2 mL，采集標本后立即完成新生兒溶血病檢測。

1.2 試劑與儀器 ABO 標準試劑紅細胞、抗體篩選細胞、抗體鑒定譜細胞、抗人球蛋白試劑均為上海血液生物醫藥責任有限公司產品；新生兒溶血病檢測卡、抗人球蛋白檢測卡均由長春博迅生物有限公司提供。所有試劑均在有效期內使用。使用儀器如下：日本久保田公司KA-2 200 血型專用離心機，金壇HH-W420 水浴箱，Baso2005-2 型離心機，長春博研血型血清學專用離心機。

1.3 方法

1.3.1 新生兒溶血病檢測 對所有的新生兒血標本進行ABO、RhD 血型鑒定及直接抗人球蛋白試驗、游離抗體試驗、抗體釋放試驗，以上各種試驗方法均按照《全國臨床檢驗操作規程》[7]操作，抗體釋放試驗常規采用熱放散法，必要時采用酸放散方法進行。

1.3.2 抗體鑒定 針對懷疑為非ABO-HDFN 患兒標本，采集患兒母親血標本，用患兒紅細胞放散液和（或）母親血清進行抗體鑒定，試驗過程嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》執行，根據抗體特異性，進一步檢測患兒及母親相應抗原，根據需要挑選不規則抗體相應抗原陰性的ABO 同型細胞，鑒定有無合并ABO-HDFN。

1.3.3 統計分析 選擇SPSS 26.0 統計分析軟件進行統計學分析，分類數據及計數資料采用卡方檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 新生兒溶血病確診病例中男女性別構成情況922 例疑似HDFN 的高膽紅素血癥患兒標本中，男性患兒591 例，確診HDFN 者130 例，檢出率21.99%。女性患兒331 例，確診HDFN 者117 例，檢出率為35.3%，女性患兒檢出率高于男性患兒（χ2=19.28，P<0.05），見表1。

表1 HDFN 確診病例中男女性別構成情況

2.2 引起新生兒溶血病的抗體特異性分布情況本研究共收集的922 例患者標本，確診為HDFN的247 例，其中231 例（93.5%）由ABO 血型系統引起，15 例（6.1%）由Rh 系統（抗-D、抗E、抗Ec）引起，1 例由MNS 系統（抗-M）引起，見表2。

表2 引起HDFN 的抗體特異性分布及構成比

2.3 ABO 血型抗體檢出差異 統計本研究中有完整數據的ABO-HDFN 的患兒母嬰血型，確診ABO溶血159 例，抗-A 抗體引起HDFN 86 例，檢出率為58.5%，抗-B 引起HDFN 73 例，檢出率39.9%，抗-A 抗體引起的HDFN 明顯高于抗-B 抗體，有統計學意義（χ2=11.311，P<0.01），見表3。

表3 ABO 血型抗體檢出差異情況

2.4 新生兒溶血病檢測結果與患兒日齡的關系

2.4.1 HDFN 血清總膽紅素隨日齡的變化趨勢 計算各不同日齡階段總膽紅素平均值，患兒總膽紅素峰值出現在第5 d（375±50.3）μmol/L，見圖1。

圖1 HDFN 血清總膽紅素隨日齡的變化情況

2.4.2 HDFN 檢出率與患兒日齡之間的關系 統計不同日齡患兒HDFN 檢出率，患兒出生后1 d 內HDFN 檢出率為50.5%，2 d 為52.8%，3 d 后HDFN 檢出率明顯降低，（χ2=82.029，P<0.01），見表4，此結果說明隨著患兒日齡的增加，HDFN 檢出率呈下降趨勢。

表4 HDFN 檢出率隨患兒日齡的變化情況

2.4.3 溶血三項試驗與患兒日齡之間的關系 溶血三項試驗中，直接抗人球試驗陽性率最低（29.6%），血清抗體游離試驗陽性率85%，抗體釋放試驗最敏感（99.6%），直抗試驗（χ2=40.711，P<0.01）和血清抗體游離試驗陽性率 （χ2=20.766，P<0.01）隨日齡增加而降低，見表5。

表5 不同日齡患兒溶血三項試驗陽性率情況

3 討論

引起新生兒溶血病發生的原因較多，母嬰血型不合是HDFN 最常見的病因。新生兒發生HDFN后如未得到及時診斷和救治，可引起嚴重溶血性貧血、膽紅素腦病等并發癥，是臨床上造成新生兒死亡的重要因素之一[8]，因此及時對新生兒進行溶血病血清學檢測，有助于HDFN 的早期診斷[9]。在此次研究的922 例疑似HDFN 的高膽紅素血癥患兒中，確診由血型抗體引起的HDFN 共247 例，檢出率26.79%，其中女性患兒陽性檢出率35.3%，高于男性患兒陽性檢出率21.99%（χ2=19.28，P ＜0.05），與楊璇等[10]報道一致，與李亞等[11]報道不同，考慮本研究標本來源未隨機覆蓋所有新生兒，可能存在選樣偏倚，該結果無法明確女性HDFN 的發病率要更高。

臨床上以ABO-HDFN 最常見，Rh 系統引起的HDFN 次之。本研究中247 例HDFN 確診病例中，ABO 血型系統引起的231 例，占93.5%，Rh 血型系統引起的15 例，占6.1%，MNS 血型系統引起的1 例，占0.4%。在ABO 血型系統引起的HDFN中，ABO-HDFN 發生的嚴重程度與母體內IgG 型抗-A/抗-B 抗體效價[12]、新生兒紅細胞上A/B 抗原結合位點的數量、胎盤屏障作用及IgG 亞型類別不同等因素相關[13]。按母嬰血型不同，分析本研究中有母嬰血型數據的抗-A、抗-B 抗體引起的陽性病例發現抗-A 抗體引起的HDFN（58.5%）明顯高于抗-B 抗體（39.9%），卡方檢驗χ2=11.311（P＜0.01），差異有統計學意義。此結果與Matteocci A[14]、朱潔妤[15]等報道一致，推測與新生兒紅細胞表面A 抗原數量比B 抗原數量更多有關，同時A 抗原免疫原性強于B 抗原，更易誘導機體產生免疫應答，但不排除因地區ABO 血型分布比例不同造成的差異性。

隨著各級實驗室檢測技術的提高，Rh 血型系統引起的HDFN 也越來越多地被發現。本研究中確診Rh-HDFN 共15 例，7 例為抗-D 引起，8 例為抗-E/Ec 引起。據研究，在隨機人群和孕婦中檢出的不規則抗體最多的為抗-E 抗體[3,16]，與本研究中檢出抗-E（包括抗-Ec）最多的結果一致，但此結果與國內外HDFN 相關文獻[4,17]報道檢出的抗體類型分布略有不同，推測是因為部分抗-E 抗體效價低，在臨床上易被漏檢，也可能與江西地區的地區差異性相關。隨著我國全面二胎政策的放開，其他血型系統引起HDFN 的概率也在升高。本研究中發現1 例抗-M 抗體引起的HDFN，用常規熱放散未放散出陽性結果，在患兒需要輸血時，因交叉配血困難而被發現，經過鹽水法和4℃抗篩鑒定發現抗-M 抗體存在。在本研究中，非ABO-HDFN 共16例，其中15 例患兒母親為二胎及以上多產婦，提示對有多胎、流產、死胎、輸血史的患兒母親，應及時進行Rh 血型系統分型檢測等溶血病篩查的檢測，避免非ABO-HDFN 的漏檢。

進行性黃疸增高是HDFN 的特征性癥狀，多出現在出生后2～5 d，常與生理性黃疸并存，也常因被誤診而延誤治療。計算不同日齡段血清總膽紅素的平均值發現，出生后血清總膽紅素呈進行性增高，在日齡第5 d 時達峰值（375±50.3）μmol/L，提示病理性黃疸持續時間較長。根據不同日齡HDFN 的陽性檢出率分析，新生兒日齡越小，HDFN陽性檢出率越高，日齡超過3 d 時HDFN 檢出率明顯下降，當日齡≥5 d 時陽性率更低（χ2=82.029，P＜0.01），該結果與薛雷[18]等報道一致，提示新生兒出生后3 d 內進行溶血病檢測對HDFN 診斷極其重要，有利于HDFN 的確診及治療，減緩疾病的迅速發展。

HDFN 確診依賴于血清學溶血三項試驗，即直接抗人球試驗、抗體游離試驗和抗體釋放試驗。根據日齡分組，直接抗人球試驗陽性率（χ2=40.711，P＜0.01）和抗體游離試驗（χ2=20.766，P＜0.01）隨日齡的增加而降低，差異有統計學意義。推測由于母體內免疫性IgG 抗體效價越高，對胎兒紅細胞致敏的能力越強，發生HDFN 的危險性越高。新生兒出生后體內的致敏紅細胞和游離抗體數量多，體內的致敏紅細胞隨日齡的增長而破壞 （直接抗人球試驗陽性率下降），游離的抗體也隨日齡增長逐漸被代謝而消失（抗體游離試驗陽性率下降）。三項試驗中抗體釋放試驗陽性率最高，最敏感（99.6%），僅一例抗-M 抗體引起的HDFN 常規抗體釋放試驗結果為陰性。因此，臨床上發現新生兒出現異常的血清總膽紅素增高，應及早及時地采集標本送檢，有利于提高HDFN 的陽性率和準確率。

綜上所述，臨床上對于疑似HDFN 的患兒，特別是3 d 內的新生兒，應做到早送檢、早診斷、早干預、早治療，以切實降低HDFN 的并發癥和后遺癥的發生概率。同時，本研究存在一定的局限性，作為一所省級兒童醫院，未來得及獲取所有新生兒母親的血型資料，因此對ABO 血型不合引起的HDFN 病例分析未做到全面覆蓋。在條件允許的情況下，建議開展更多大樣本和多中心的前瞻性研究，以進一步對HDFN 有更深的了解和掌握，為臨床診斷提供更多可靠依據[19-20]。