甘肅省19 361例42 d至6歲健康兒童血常規參考區間建立*

韓 璐,趙慧敏,石云深,王平平,張 穎,錢柏友,汪夢棋,王臨艷△

1.成都市公共衛生臨床醫療中心檢驗科,四川成都 610066;2.甘肅省婦幼保健院臨床檢驗中心,甘肅蘭州 730050

我國幅員遼闊,環境差異極大,海拔、民族和生活習慣、年齡等方面的差異均會使得血常規參考范圍出現差異[1]。甘肅省屬于高海拔地區,多民族聚居,有必要科學建立本地區兒童血常規參考區間。末梢血檢測血常規因采血量少,創傷小,低齡兒童及家長易接受等優勢在兒童專科醫院及兒科門診中使用最為廣泛,但其檢測結果通常與靜脈血存在差異[2]。本研究依據WS/T 402-2012《臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》[3]標準,對甘肅地區19 361例健康體檢兒童末梢血血常規進行調查分析,初步建立了本實驗室針對42 d至6歲兒童末梢血血常規參考區間。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2021年8月在甘肅省婦幼保健院兒童保健科行常規健康體檢,以及同時間段分別于甘肅省東、南、西、北、中部地區及甘南藏族自治州合作市、臨夏回族自治州東鄉縣和張掖市裕固縣等少數民族地區體檢篩查的42 d至6歲的健康兒童19 361例作為研究對象。所有研究對象均根據WS/T 779-2021《兒童血細胞分析參考區間》[4]要求納入。按照年齡分成6組,各組年齡段及人數分別為:42 d至6個月1 985例(男1 051例,女934例),>6個月至1歲5 783例(男3 027例,女2 756例),>1～2歲6 014例(男3 182例,女2 832例),>2～3歲2 830例(男1 513例,女1 317例),>3～4歲1 348例(男790,女558例),>4～5歲956例(男521例,女435例),>5～6歲445例(男236例,女209例)。

1.2檢測參數 紅細胞相關參數包括紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白(Hb)、血細胞比容(HCT)、紅細胞平均體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC),白細胞相關參數包括白細胞計數(WBC)、中性粒細胞百分比(NEUT%)、中性粒細胞絕對值(NEUT#)、淋巴細胞百分比(LYMPH%)、淋巴細胞絕對值(LYMPH#)、單核細胞百分比(MO%)、單核細胞絕對值(MO#)、嗜酸性粒細胞百分比(EO%)、嗜酸性粒細胞絕對值(EO#)、嗜堿性粒細胞百分比(BASO%)、嗜堿性粒細胞絕對值(BASO#),血小板相關參數包括血小板計數(PLT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、血小板比容(PCT)、大血小板比率(P-LCR)。

1.3儀器與試劑 甘肅省婦幼保健院XN-550全自動五分類血液分析儀為本研究的基準儀器,其他合作醫院均為日本 Sysmex五分類血液分析儀及其配套的試劑、質控品及校準品。校準和質控:每半年由廠商工程師對上述血液分析儀進行校準1次,每年上半年和下半年對儀器作精密度測試各1次,要求變異系數在儀器說明書規定范圍內。每天開機用3個濃度(高值、中值、低值)XN-CHECK 質控品對血液分析儀進行檢測,所有質控結果均在控。各醫院室間比對均合格。

1.4方法

1.4.1檢測方法 由熟練的檢驗人員嚴格按照《中國末梢采血操作共識》[5]采集末梢血的方法,采取兒童無名指末梢血100 μL于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管內,1 h內完成血常規檢測。對有少部分有核紅細胞報警的樣本,參照《臨床檢驗操作規程》第4版的說明,由副高以上人員使用顯微鏡計數 200 個白細胞所看到的有核紅細胞數,結果以有核紅細胞數/100個WBC的形式記錄,并進行人工白細胞的分類,同時對紅細胞總數進行糾正[6]。白細胞的校正值=100×校正前白細胞數/(100+有核紅細胞數)。

1.4.2參考區間的驗證 各實驗室、各年齡段隨機選取20例末梢血血常規檢測結果,驗證新建立的參考區間,若各項檢驗結果不超過2例落在新建參考區間以外,則新建立的參考區間通過驗證。

2 結 果

2.1紅細胞相關參數參考區間 42 d至6歲兒童末梢血中紅細胞相關參數RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MCHC的統計合并后的參考區間見表1。RBC、MCV、MCH在同年齡段不同性別間差異均有統計學意義(P<0.000 1);Hb在>2～6歲兒童中不同性別差異有統計學意義(P=0.012 8),在小于2歲的兒童中不同性別差異無統計學意義(P=0.177 7、0.115 3)。MCHC在1歲以上兒童中不同性別差異有統計學意義(P<0.000 1),在小于1歲的嬰幼兒中不同性別差異無統計學意義(P=0.573 3、0.184 3)。

表1 甘肅地區42 d至6歲兒童紅細胞相關參數參考區間

2.2血小板相關參數參考區間 42 d至6歲兒童末梢血中血小板相關參數PLT、PDW、MPV、P-LCR、PCT統計合并后的參考區間見表2。6歲及6歲以內,PLT隨年齡的增加而減少,女童PLT略高于男童,且在42 d至2歲兒童中不同性別差異有統計學意義(P<0.000 1),在>2～6歲兒童中不同性別差異無統計學意義(P=0.219 4)。MPV及PCT在同年齡段不同性別間差異均有統計學意義(P<0.05)。PDW在同年齡段不同性別間差異無統計學意義(P=0.941 5)。

表2 甘肅地區42 d至6歲兒童血小板相關參數參考區間

2.3白細胞相關參數參考區間 42 d至6歲兒童末梢血中WBC、LYMPH%、MO%、NEUT%、EO%、BASO%、LYMPH#、MO#、NEUT#、EO#、BASO#統計合并后的參考區間見表3。MO%、EO%、BASO%、MO#、EO#、BASO#在同年齡段不同性別間差異均有統計學意義(P<0.05);LYMPH%在>3～6歲兒童中不同性別差異有統計學意義(P=0.036 9、0.006 9),在42 d至3歲兒童中不同性別差異無統計學意義(P>0.05);NEUT%及NEUT#在42 d至2歲兒童中不同性別差異有統計學意義(P<0.05),在>2～6歲兒童中不同性別差異無統計學意義(P>0.05);WBC在同年齡段不同性別間差異無統計學意義(P=0.517 7)。

表3 甘肅地區42 d至6歲兒童白細胞相關參數參考區間

2.4淋巴細胞、中性粒細胞及嗜酸性粒細胞隨年齡段變化趨勢 在42 d至4歲兒童的LYMPH%較NEUT%更高,在>4～6歲時,LYMPH%與NEUT%趨于相等,見圖1。而42 d至6個月兒童EO#在學齡前兒童中最高,且隨年齡的增加而逐漸降低,>3～6歲趨于穩定,見圖2。

圖1 NEUT%及LYMPH%變化趨勢

圖2 EO#變化趨勢

2.5參考區間驗證 各實驗室、各年齡段隨機選取20例末梢血血常規檢測,結果落在待驗證參考區間以外的測定值均未超過2例,新建立的參考區間通過驗證。

3 討 論

正常參考區間通常是指健康人群參考值95%的中心區間,這類區間可作為分析檢驗結果,解釋疾病情況的標準及依據。醫學實驗室擁有根據客觀的、符合實際的參考區間,對于臨床更加具有指導意義。對于兒童專科醫院,兒童是就診的重要主體之一,但是由于兒童疾病具有主訴不明,病情易隱藏,疾病進展迅速以及檢測樣本獲得不易等情況,兒童參考區間的建立具有很大的難度,且血液學參考區間受許多因素的影響,如人口、地理位置、經濟背景、生活習慣和飲食結構。對于有條件的實驗室,有必要針對其實驗室主要受眾建立血液學指標的參考區間[8]。

關于血常規項目,臨床常用的采血方式有2種,EDTA-K2抗凝的靜脈血及末梢血。靜脈血由于重復性好,采血量充足,易于復查等因素,臨床上采用較多。末梢血位于肢體末端,受氣溫-肢體溫度、血液循環能力、采血時組織液干擾等因素影響存在不可控差異,檢測效果穩定性與靜脈血具有一定的差距,但由于痛感輕微、采集量少及采集過程便捷等因素,被兒童及家長廣泛接受,已經成為兒科門診尤其0～6歲兒童單一采集血常規的主要方式[2]。圍生期嬰兒因存在無法避免的母體因素、生產因素以及采集因素,如宮內感染,新生兒黃疸,胎兒宮內窘迫,ABO溶血換血,新生兒采血困難易凝集等因素,對其外周血血細胞分析有一定的干擾[9],且此階段的健康嬰兒通常不需要做外周血血細胞分析,因此建立該人群的外周血血細胞分析參考區間具有一定的難度及不確定性。

本研究分析甘肅地區19 361例體檢健康42 d至6歲兒童的血常規分布發現,與上海地區相比,RBC稍高,這可能與甘肅地區本地飲食中食用牛、羊肉等各類紅肉較多有關[10]。同年齡段MCV與MCH女童略高于男童,并且差異有統計學意義(P<0.05),這與ZHANG等[7]的研究結論相一致。42 d至6歲兒童WBC相較于現存成人血細胞參考區間稍高,可能與小齡兒童存在潛在的輕微感染,病程隱匿有關。PLT在兒童早期最高,并且隨著年齡的增長而降低,這與2021年4月頒布的中華人民共和國衛生行業標準WS/T 779-2021《兒童血細胞分析參考區間》[4]及WANG等[11]的研究相一致,這可能由于兒童血小板蛋白質組在促進正常生長發育及預防疾病發展方面發揮了重要作用[12],而同年齡段女童PLT略高于男童,差異有統計學意義(P<0.000 1)。有研究發現,女性PLT、PCT與男性有明顯差異,并在各個年齡段,男性PLT、PCT總體水平均低于女性[13-14]。

本研究人群以漢族兒童為主,同時納入甘肅省回族、蒙古族、藏族、東鄉族、裕固族、保安族等少數民族兒童,但由于各民族之間受教育程度及對兒童保健意識的差異,故本研究中納入少數民族人數較少,各民族之間未發現差異。

本研究分析了淋巴細胞、中性粒細胞及嗜酸性粒細胞隨年齡段的變化趨勢,結果顯示,在42 d至4歲兒童的LYMPH%較NEUT%更高,在>4～6歲時,LYMPH%與NEUT%比趨于相等,這與第5版《臨床檢驗基礎》[15]中敘述一致。在42 d至1歲嬰幼兒中EO#較高,高于其他學齡前年齡段,并且高于現行成年人血細胞參考區間中EO#,這可能與這一年齡段的嬰幼兒的飲食模式及飲食內容持續性改變,至腸道環境屬于持續致敏且兒童時期腸道通透性較高有關[16]。

本研究仍存在以下不足:(1)本研究納入人群不包括42 d內嬰兒,因受母體、生產方式、樣本采集難度大,家長難接受相關倫理等問題的影響,同時外周血常規指標變化靈敏,42 d內嬰兒樣本難獲得足夠樣本量。(2)喂養方式不同可能會間接影響紅細胞相關參數,尤其42 d至6個月嬰幼兒,因喂養方式不同分為母乳喂養、混合喂養及配方奶粉喂養,配方奶粉因其營養成分的添加,故配方奶粉喂養的嬰兒相較混合喂養及母乳喂養的嬰兒,其血清鐵及鐵蛋白含量水平升高[17]。因此,在今后的研究中可對此年齡段群體根據喂養方式再進一步詳細劃分。(3)本研究所涉及醫院均使用Sysmex XN系列血細胞五分類分析儀,故未進行不同血液分析儀之間的檢測結果的比對,后續可進行深入統計和研究。