甲狀腺乳頭狀癌中IFI6的表達與臨床意義

韋 芳 陳 罡 蔣洪棉 肖小月

1.廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院病理科，廣西南寧 530000；2.南寧市第一人民醫(yī)院病理科，廣西南寧 530000

甲狀腺癌是人類內(nèi)分泌系統(tǒng)常見惡性腫瘤，以甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）為主，占85%～90%，其發(fā)病率居全球第9 位，好發(fā)于青少年女性，且易復發(fā)，易轉移[1]。近年來，我國PTC 發(fā)病率呈明顯上升趨勢，且患者五年總體生存率（84.3%）與美國仍存在較大差距（98.4%）[2]。因此，需要進一步研究與PTC 相關的分子標志物，探尋特異性的診療及預后評估分子標志物。干擾素誘導蛋白6（interferon-inducible protein 6，IFI6）定位于線粒體，是最早鑒定出的干擾素刺激基因（interferon-stimulated genes，ISGs）之 一。IFI6 編碼的蛋白質在抗凋亡、抗病毒等方面起重要作用[3]。GEPIA 和Oncomine 數(shù)據(jù)庫顯示IFI6 mRNA 在多種腫瘤疾病中表達明顯上調(diào)，如胃癌、宮頸癌、乳腺癌等。然而，與PTC 相關的研究較少。本研究旨在通過免疫組化法檢測IFI6 蛋白在PTC 組織中的表達，并探討其表達與預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018 年8 月至2020 年8 月在南寧市第一人民醫(yī)院病理科確診為PTC 的77 例組織標本及其對應癌旁組織。其中男17 例，女60 例；年齡20 ～82 歲，平均（46.70±13.20）歲。根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會（American Joint Committeeon Cancer，AJCC）第8 版癌癥分期手冊中分化型甲狀腺癌的分期標準[4]，將患者分為≥55 歲和＜55 兩組；病理分期I 期69 例，Ⅱ期7 例，無Ⅲ、Ⅳ期病例，1 例淋巴結轉移情況記錄不詳，無法分期；經(jīng)典型PTC 37 例，微小型34 例，濾泡亞型5 例，透明型1 例。所有病例的HE 切片均經(jīng)兩位高年資病理科醫(yī)師復診。本研究已通過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準（倫理號：2021-063-01）。

納入標準：初發(fā)患者；原發(fā)腫瘤；術前未進行放化療和內(nèi)分泌治療的患者；術后病理診斷為PTC的患者；臨床資料完整的患者；切片大小滿足本實驗要求的患者。排除標準：復發(fā)患者；轉移癌；其他類型PTC 患者。

1.2 材料與方法

1.2.1 主要試劑 IFI6 兔抗多克隆抗體（Biorbyt公司，批號：orb247291）；即用型快捷免疫組化MaxVisionTM3HRP 試劑盒（福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，批號：2008175220G）。

1.2.2 方法 3 μm 薄切石蠟切片經(jīng)65℃恒溫箱烤片2 h，脫蠟至水。免疫組化染色采用SP 兩步法，嚴格按照試劑盒說明書操作。用已知陽性組織作為陽性對照，以PBS 緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.2.3 結果判讀 胞漿中出現(xiàn)淺黃色至棕褐色顆粒為IFI6 蛋白表達陽性。由兩名高年資病理科醫(yī)師進行雙盲閱片，并對陽性細胞百分比和染色強度進行評分。陽性細胞百分比評分：無表達、＜10%、10%～35%、36%～75%、＞75%各計0、1、2、3、4 分。染色強度評分：胞質無著色或基本無著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色各計0、1、2、3 分[5]。兩者乘積為總分；若兩人最終評分不一致，則取其平均分。總分0 ～3 分為低表達，4 ～12 分為高表達。

1.3 Kaplan-Meier plotter在線分析

利用Kaplan-Meier plotter 分 析IFI6 mRNA 表達水平與甲狀腺癌患者預后的關系。檢索條件：①IFI6；②auto select best cutoff；③OS 和RFS；④thyroid carcinoma。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 19.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，采用秩和檢驗比較IFI6 蛋白在PTC 與癌旁組織中的表達差異；采用χ2檢驗和Fisher 精確概率法分析IFI6 蛋白表達與患者臨床特征的關系；采用GraphPad Prism v7 繪圖軟件進行作圖。所有結果均采用雙側檢驗，以P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 IFI6蛋白在PTC及癌旁組織中的表達

IFI6 蛋白陽性物質定位于細胞質，呈淺黃至棕褐色顆粒染色，主要表達于PTC 組織中，部分表達于乳頭樣增生甲狀腺組織、淋巴濾泡及嗜酸性粒細胞內(nèi)。IFI6 蛋白在PTC 組織中的表達顯著高于癌旁組織[77 例PTC：4.5（3.0，8.0）；77 例癌旁：1.0（0.0，3.0），Z=7.236，P=0.000]，見圖1。

圖1 IFI6 蛋白在PTC 與癌旁組織中的表達（免疫組化SP 法，100×）

2.2 IFI6蛋白表達與PTC患者臨床特征單因素分析

IFI6 蛋白表達與PTC 患者年齡有關，＜55 歲者表達顯著高于≥55 歲者（P＜ 0.05）。IFI6 蛋白表達與性別、合并橋本氏甲狀腺炎（HT）、腫瘤直徑、病灶位置、病灶數(shù)目、淋巴結轉移、PTC 亞型及病理分期均無關（P＞ 0.05），見表1。

表1 IFI6蛋白表達與PTC患者臨床特征單因素分析

2.3 IFI6與PTC患者預后的關系

Kaplan-Meier plotter 在線分析結果顯示，IFI6mRNA 高表達者預后較好，其中總生存期的HR為0.358（logrankP=0.035），無復發(fā)生存期的HR為0.316（logrankP=0.002），見圖2。

圖2 PTC 組織中IFI6 mRNA 表達的預后價值

3 討論

IFI6 是一種ISGs，可被α 和β 干擾素高度誘導[3]。IFI6 在胃癌、乳腺癌、黑色素瘤、食管鱗狀細胞癌等多種腫瘤中表達升高，且可誘導腫瘤細胞對他莫昔芬、順鉑、紫杉醇耐藥[6-7]。有研究表明，降低IFI6 表達，可抑制舌鱗狀細胞癌的生長與轉移[8]、減少胰腺癌小鼠肺和肝臟轉移結節(jié)的數(shù)量和面積[9]；這揭示IFI6 用于靶向治療的潛力。這些研究表明IFI6可能是影響腫瘤形成與發(fā)展的關鍵癌基因。IFI6在腫瘤與正常組織中的差異表達，提示其可能對腫瘤性疾病有一定的區(qū)分能力。

目前，尚無文獻報道IFI6 蛋白在PTC 組織中的表達情況，其生物學特性也未知。本研究通過免疫組化方法，顯示IFI6 蛋白在PTC 組織中表達顯著上調(diào)，提示IFI6 可能參與PTC 的形成。此外，IFI6 高表達與年齡顯著相關。青少年和散發(fā)性結腸癌患者IFI6 表達水平顯著高于健康成人[10]。＜55 歲的PTC 患者IFI6 蛋白表達水平顯著高于≥55 歲者。AJCC 將PTC 分期的診斷年齡分界點由45 歲提至55 歲，主要是因為診斷年齡與預后息息相關。研究表明診斷年齡是PTC 預后的獨立危險因素，≥55 歲的PTC 患者預后更差[11]。這與本研究結果相符。PTC 已成為美國青少年發(fā)病率最高的惡性腫瘤。與老年PTC 患者相比，青少年患者更易發(fā)生局部區(qū)域淋巴結轉移、遠處轉移則少見、預后較好[12]。Kaplan-Meier 生存率分析表明IFI6 mRNA 高表達的PTC 患者生存期更長。本研究證據(jù)提示IFI6 高表達可能促進PTC 的發(fā)生，在腫瘤初期發(fā)揮促癌的作用，但隨著腫瘤的演進，PTC 細胞可能出現(xiàn)時間上異質性，IFI6 高表達者反而獲得更好的預后。其具體作用機制尚待進一步研究。

PTC 的病因至今未明，電離輻射是目前唯一一致認可的危險因素，它可導致DNA 單鏈斷裂或雙鏈斷裂[13]。DNA 損傷可引起基因毒性應激，并通過環(huán)GMP-AMP 合酶-STING 信號軸激活Ⅰ型干擾素的JAK/STAT 信號通路，誘導IFI6 表達上調(diào)[14-15]。上調(diào)IFI6 可減少輻射后細胞凋亡和活性氧的產(chǎn)生，從而促進細胞存活與增殖[16]。IFI6 通過下調(diào)活性氧，促進癌細胞增殖與轉移[5]。一項HT 和PTC 合并HT 的差異基因分析報告顯示IFI6 與免疫和炎癥功能、氧化應激和活性氧、DNA 損傷和修復、細胞周期和細胞凋亡有關[17]。綜上，推測IFI6 可能通過Ⅰ型干擾素信號通路被激活，下調(diào)活性氧，促進PTC 的形成與發(fā)展。

然而，本文尚存在不足之處。本文樣本量有限，IFI6 過表達趨勢仍有待大樣本、多中心研究證實。IFI6 在PTC 進展中的潛在作用及其機制亦有待深入探究。

綜上所述，IFI6 蛋白在PTC 中表達顯著升高，可能參與PTC 的發(fā)生、發(fā)展，有望成為PTC 潛在的診療和預后指標。