咪唑斯汀緩釋片仿制藥與原研藥質量對比研究*

崔亞寧，鄧穎鵬，張思楠，雷 軒

（1. 陜西省食品藥品檢驗研究院，陜西 西安 710065； 2. 國家藥品監督管理局藥品微生物檢測技術重點實驗室，陜西 西安 710065； 3. 陜西中醫藥大學，陜西 咸陽 712046）

咪唑斯汀具有獨特的抗組胺和其他炎性介質的雙重作用，其屬非鎮靜性抗組胺藥，且為強效和高選擇性H1受體拮抗劑［1］。其制劑為由法國Sanofi - Synthelabo公司研制生產的長橢圓形異型緩釋片［2］，用于季節性和常年性過敏性鼻癢、過敏性結膜炎、蕁麻疹和其他過敏反應的治療［3］。咪唑斯汀未收載于中國藥典、歐洲藥典、美國藥典、英國藥典及日本藥局方，其在我國獲得的藥品行政保護已于2005 年9 月12 日終止［4］。原國家食品藥品監督管理局發布了《國家食品藥品監督管理局關于開展仿制藥質量一致性評價工作的通知》，旨在淘汰內在質量不達標的藥品，促進國內仿制藥整體水平提高，達到或接近國際先進水平［5］。衡量仿制藥與原研藥的質量是否一致，關鍵在于“雜質（有關物質）”和“體外釋放（釋放）度曲線”［6］。為掌握國產和進口咪唑斯汀緩釋片的質量差異，參考原國家食品藥品監督管理總局進口藥品注冊標準（JX19990243，JX20100260）及相關文獻［7］，對不同廠家產品的含量、有關物質及體外溶出相似性等指標進行比較，為評價仿制藥質量提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U3000 型高效液相色譜儀、Evolution 300 型紫外-可見分光光度計（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；XPE105 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）；708DS型溶出儀（美國Agilent公司）；KQ-500DE型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

咪唑斯汀對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100913-200701，含量100%）；咪唑斯汀緩釋片原研藥［法國Sanofi-Winthrop 公司（A 廠），批號代號為A1，A2，A3，規格為每片10 mg］，咪唑斯汀緩釋片仿制藥［國內某生產企業（B 廠），批號代號為B1，B2，B3，規格為每片10 mg），輔料（各生產廠家提供）；甲醇、乙腈均為色譜純，鹽酸、磷酸、磷酸二氫鉀均為分析純，水為高純水。

2 方法與結果

2.1 咪唑斯汀含量測定

2.1.1 試驗條件

采用紫外- 可見分光光度法，于280 nm 波長處測定吸光度。

2.1.2 溶液制備

取咪唑斯汀對照品10.0 mg，精密稱定，用甲醇-0.1 mol/L鹽酸（1∶1、V/V，下同）溶解并稀釋至100 mL；精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇-0.1 mol/L鹽酸定容，即得對照品溶液。取樣品20 片，置200 mL 容量瓶中，加甲醇25 mL 超聲（功率500 W、頻率40 kHz，下同）處理30 min，再加0.1 mol/L鹽酸50 mL超聲至溶解，冷卻至室溫，用甲醇- 0.1 mol/L 鹽酸定容，濾過，取續濾液；精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，用甲醇-0.1 mol/L鹽酸定容，即得供試品溶液。

2.1.3 方法學考察

按相關要求進行方法學考察，結果精密度、穩定性、重復性試驗的RSD均小于2.0%，表明儀器精密度良好，供試品溶液在室溫放置12 h 內基本穩定，方法重復性良好。

2.1.4 樣品含量測定

取各批次樣品適量，依法制備供試品溶液，再按擬訂試驗條件進樣測定，記錄吸光度，并計算樣品含量，結果均為標示量的95.0%～105.0%，符合規定，但B 廠3個批次產品間含量的相對偏差（RD）較大。詳見表1。

表1 仿制藥與原研藥含量測定結果（%）Tab.1 Results of content determination of mizolastine in the generic and original - patented drugs（%）

2.2 溶出度測定

2.2.1 試驗條件

采用槳法。溶出介質為0.1 mol/L鹽酸、0.01 mol/L鹽酸、pH 3.8 醋酸鹽緩沖液、pH 4.5 醋酸鹽緩沖液；介質體積為900 mL；轉速為50 r/min［8-11］。

2.2.2 溶液制備

取咪唑斯汀對照品10.0 mg，精密稱定，分別以上述4 種溶出介質溶解并稀釋至100 mL；精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，用溶出介質定容，即得對照品溶液。取樣品12 片，分別以上述4 種溶出介質，于15，30，45，60，90，150，180 min 時各取10 mL（不補液），濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 溶出度測定

3個批次的咪唑斯汀緩釋片仿制藥在4種溶出介質中的累積溶出度均低于3 個批次的原研藥，且介質為pH 3.8 醋酸鹽緩沖液、pH 4.5 醋酸鹽緩沖液時尤為明顯，15 min 時溶出度的變異系數均大于20%，且平均溶出度的變異系數高于10%。詳見圖1（圖中A 為原研藥，B為仿制藥）。

圖1 溶出曲線a.Hydrochloric acid（0.1 mol/L） b.Hydrochloric acid（0.01 mol/L） c.Acetate buffer（pH 3.8） d.Acetate buffer（pH 4.5）Fig.1 Dissolution profiles of Mizolastine Sustained-Release Tablets

2.3 有關物質I含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：Supelco C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-用磷酸調pH至3.2的0.05 mol/L磷酸二氫鉀（30∶15∶55，V/V/V）；流速：1.5 mL/ min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.3.2 溶液制備

對照品溶液：取咪唑斯汀對照品約15 mg，精密稱定，置25 mL 容量瓶中，加流動相溶解并定容；精密量取1 mL，置250 mL 容量瓶中，加流動相定容；精密量取5 mL，置10 mL容量瓶中，即得。

供試品溶液：稱取樣品細粉適量（約相當于咪唑斯汀60 mg），精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加流動相80 mL，振搖約1 h，用流動相定容，搖勻，靜置，濾過，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：按咪唑斯汀緩釋片處方和工藝制備缺咪唑斯汀的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.3.3 方法學考察

專屬性試驗：取樣品60 片，研細，稱取適量（約相當于咪唑斯汀60 mg），精密稱定，各5 份，分別進行破壞試驗（氧化破壞、高溫破壞、酸破壞、堿破壞、光照破壞）。取上述破壞試驗條件下樣品制成的供試品溶液及陰性樣品制成的陰性對照品溶液各適量，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖至咪唑斯汀峰保留時間的5 倍。結果主峰與雜質峰及各雜質峰之間分離良好，且空白輔料對測定結果均無干擾，表明方法專屬性強。

線性關系考察：分別精密量取2.3.2項下對照品溶液適量，制成系列對照品溶液。各取20 μL，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以咪唑斯汀質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=9 175.521 0X–661.312 1（r=0.999 1）。結果表明，咪唑斯汀質量濃度在0.62～1.80 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

定量限考察：分別精密量取2.3.2項下對照品溶液適量，倍比稀釋，并按2.3.1項下色譜條件進樣測定，以信噪比為10∶1 時的質量濃度記作定量限。結果咪唑斯汀定量限為0.3 μg/mL。

2.3.4 有關物質Ⅰ含量測定

取3 批次原研藥和仿制藥樣品各適量，分別按2.3.2 項下方法制備供試品溶液，再按2.3.1 項下色譜條件進樣測定，平行3 次，記錄峰面積，并計算樣品含量。3批次原研藥制劑中雜質總量均小于0.05%，而3批次仿制藥制劑中雜質總量均為0.25%，且最大雜質的量為0.1%。詳見圖2。

圖2 有關物質I高效液相色譜圖1-4.ImpuritiesA.Original-patented drug B.Generic drugFig.2 HPLC chromatograms of related substance I

2.4 有關物質Ⅱ含量測定

2.4.1 色譜條件

色譜柱：Thermo C8柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：含0.02%N，N-二甲基辛胺的0.05 mol/L 磷酸二氫鉀緩沖液（用10%氫氧化鉀溶液調pH 至6.5）-乙腈- 甲醇（35∶30∶35，V/V/V）；流速：1.5 mL/ min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.4.2 溶液制備

取咪唑斯汀對照品適量，按2.3.2 項下方法用2.4.1 項下流動相制得對照品溶液。取樣品細粉適量（約相當于咪唑斯汀30 mg），置50 mL容量瓶中，加流動相30 mL，振搖約30 min，用流動相定容，靜置，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.4.3 方法學考察

專屬性試驗：取樣品30片，研細，精密稱取適量（約相當于咪唑斯汀30 mg），各5份，分別進行破壞試驗（氧化破壞、高溫破壞、酸破壞、堿破壞、光照破壞）；取上述破壞試驗條件下樣品制成的供試品溶液及陰性樣品制成的陰性對照品溶液各適量，按2.4.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖至咪唑斯汀峰保留時間的5倍。

線性關系考察：分別精密量取2.4.2項下對照品溶液適量，制成系列對照品溶液。各取20 μL，按2.4.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以咪唑斯汀質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=16 066.015 1X–68.252 2（r=0.999 5）。結果表明，咪唑斯汀質量濃度在0.63～1.78 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

定量限考察：分別精密量取2.4.2項下對照品溶液適量，倍比稀釋，并按2.4.1項下色譜條件進樣測定，以信噪比為10∶1 時的質量濃度記作定量限。結果咪唑斯汀定量限為0.3 μg/mL。

2.4.4 有關物質Ⅱ含量測定

取3 批次原研藥和仿制藥樣品各適量，分別按2.4.2 項下方法制備供試品溶液，再按2.4.1 項下色譜條件進樣測定，平行3 次，記錄峰面積，并計算樣品含量。結果3批次原研藥中雜質總量均小于0.1%，最大單個雜質的量均為0.03%，而3批次仿制藥中雜質總量分別為0.57%，0.54%，0.57%，且最大雜質的量均為0.2%。詳見圖3。

圖3 有關物質Ⅱ高效液相色譜圖1-5.ImpuritiesA.Original-patented drug B.Generic drugFig.3 HPLC chromatograms of related substance Ⅱ

3 討論

由于國內外藥品生產企業使用原料藥的供應商不同，故原料藥的理化性質（粒徑、晶型、合成工藝等）也存在差異；另外，制劑處方組成與生產工藝等的不同均可能導致藥品質量產生極大差異［12］。因此，本研究以原研咪唑斯汀緩釋片為參比制劑，以含量、有關物質及體外溶出相似性為考察指標，對國產仿制藥的質量進行研究。結果表明，在含量方面，原研藥與仿制藥并無明顯差異，但仿制藥的批間RD較大，說明質量工藝控制存在差異。

測定仿制制劑與參比制劑在多種溶出介質中的溶出曲線，是多國評價口服固體制劑內在質量的重要手段，也廣泛用于預測生物等效性［13-14］。本研究中采用4 種不同溶出介質對仿制藥體外溶出度進行了相似性評價，結果發現，仿制藥與原研藥存在較大差異，故無法采用相似因子法對其在不同溶出介質中的體外溶出度進行相似度評價［15］；仿制藥與原研藥體外溶出行為不一致，也表明仿制藥質量較差，有必要進行仿制藥處方工藝再研發，以提升仿制藥的質量。在有關物質方面，仿制藥與原研藥也存在較大差異。考慮到仿制藥與原研藥的生產工藝及原輔料配方的不同，所得結果均作為探索性研究。

仿制藥一致性評價不僅能提升我國制藥行業的整體發展水平，促進醫藥產業升級和結構調整，同時還可節約醫療費用，保障患者用藥安全［16］。建議有關廠家從制劑原輔料、制備工藝等方面做出相應改進，提升仿制藥質量，為其一致性評價工作提供有力支撐。