甘露寡糖對波紋龍蝦葉狀幼體生長的影響

何藝賓 黃標武 林金華

摘要：為探索甘露寡糖（mannose-oligosaccharides，MOS） 對波紋龍蝦葉狀幼體生長的促進作用，本研究設置3個試驗組，分別投喂用不同濃度甘露寡糖強化的鹵蟲，統計各試驗組培養3d、5d、7d后波紋龍蝦葉狀幼體的成活率。實驗結果表明，1#餌料組（0.4 %甘露寡糖強化）培養3d、5d、7d的成活率分別為（72.5±2.5）%、（57.5±2.5）%、（42.5±2.5）%，明顯高于其它試驗組。餌料中添加甘露寡糖可提高波紋龍蝦葉狀幼體的成活率，甘露寡糖最佳添加濃度為0.4 %。

關鍵詞：甘露寡糖；波紋龍蝦；葉狀幼體；生長發育

中圖分類號：S962 ????文獻標識碼：A

基金項目：廈門海洋職業技術學院海洋生物學院2019年高層次人才科研專項。

作者簡介：何藝賓（1981-），男，講師。研究方向： 海洋生物技術， E-mail： 59948397@qq.com．

波紋龍蝦 （Panulirus homarus）屬于節肢動物門，甲殼綱，十足目， 龍蝦科， 龍蝦屬，分布于印度洋-西太平洋海域，常棲息在水質清新的巖礁有沙地帶。波紋龍蝦不僅肉味鮮美具有極高的食用價值 ， 而且在工業、醫藥及工藝欣賞等方面也具有一定的價值，深受人們的喜愛。近年來，波紋龍蝦的人工養殖越來越引起人們的關注，然而中國海區龍蝦資源缺乏，以捕撈天然龍蝦苗種進行人工養殖無法滿足長期需求［1］。

波紋龍蝦的幼體分為葉狀幼體和游龍蝦幼體。由于葉狀幼體期較長，餌料組成較復雜，葉狀幼體人工培育迄今還是世界難題［2］。目前國內關于波紋龍蝦人工繁殖的報道較少，陳昌生等（2003年）對波紋龍蝦早期葉狀幼體培育進行了初步研究，經過 69 d培育獲得了蛻皮8次的幼體。劉慧玲等（2008年）研究發現將藻類與鹵蟲作為餌料喂食波紋龍蝦早期葉狀幼體，培育效果較好，經過 54 d培育獲得了脫皮9次的葉狀幼體［3］。波紋龍蝦人工育苗技術迄今仍未突破，嚴重阻礙了波紋龍蝦人工養殖業的發展。

甘露寡糖是從酵母培養細胞壁中提取的一類新型抗原活性物質，具有提高成活率、促進生長和提高免疫力等作用，已作為飼料添加劑廣泛用于飼料工業［4-5］。張炎灼［6］等（2014年）報道在大黃魚飼料中添加0.2 %甘露寡糖能有效促進大黃魚幼魚生長并提高幼魚的抗病能力。Sang［7］等（2010年）報道餌料中添加甘露寡糖不僅能夠促進錦繡龍蝦幼體的生長，而且還能提高波紋龍蝦幼體的成活率。本研究中先用甘露寡糖對鹵蟲幼體進行營養強化，進而喂食波紋龍蝦葉狀幼體，研究甘露寡糖對波紋龍蝦葉狀幼體生長發育的影響，為波紋龍蝦的人工繁育提供一種新的思路。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

波紋龍蝦：由廈門海滄某水產種苗有限公司提供。

主要實驗試劑：甘露寡糖購自Sigma公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 抱卵波紋龍蝦培育

從養殖池中將抱卵的波紋龍蝦挑選出來，放入網箱暫養于水泥池（約 30 m2）中，鹽度 30 ‰，水溫保持在28～29℃，早晚各投喂新鮮花蛤 1次，花蛤投喂前先用高猛酸鉀中浸泡10 min，充氣，隔天清理花蛤殼并更換10 %的水，暫養過程中注意觀察卵的顏色變化。

1.2.2 葉狀幼體培育

從暫養池中將卵的顏色為棕紅色的波紋龍蝦挑選出來，放入新的水泥池繼續培養7～10 d后可孵出葉狀幼體，燈誘收集龍蝦幼體，培養于新的水泥池中，密度：2萬～3萬尾/m3，鹽度 30 ‰，水溫保持在28～29℃，pH保持在8.0～8.2，第一天投喂鹵蟲幼體，第二天投喂鹵蟲和豐年蟲各半，第三天以后投喂豐年蟲，早晚各投喂2次，定期觀察葉狀幼體的形態變化并記錄各期所用時間。

1.2.3 甘露寡糖對波紋龍蝦葉狀幼體成活率的影響

設置3個試驗組，每組1個重復，投喂餌料分別為1#餌料：鹵蟲，0.4 %甘露寡糖強化；2#餌料：鹵蟲，0.2 %甘露寡糖強化；3#餌料：鹵蟲。各隨機選取20尾剛孵化出來的葉狀幼體，移入5 L的容量瓶中充氣培養，鹽度 30 ‰。每天投喂餌料2次早上9∶00和 下午17∶00，分別培養3d、5d、7d后統計各試驗組的存活率。

1.2.4 數據處理

采用GraphPad Prism 5軟件對實驗數據進行整理分析。

2 實驗結果

2.1 波紋龍蝦受精卵顏色變化觀察

波紋龍蝦受精卵發育過程中會發生顏色變化，培養初期為橘黃色，隨著培養時間的增加，卵的顏色逐漸加深，變為棕紅色，如圖1所示。

2.2 葉狀幼體形狀觀察

波紋龍蝦葉狀幼體每蛻皮1次即為一個新的發育時期，其肝胰臟、第 1步足外肢羽狀剛毛的對數等形態特征會發生相應的變化。本研究以第 1足外肢羽狀剛毛的對數為分期標準， 5對羽狀剛毛時期為發育Ⅰ期，6對羽狀剛毛時期為發育Ⅱ期，以此類推。隨著發育時期的進行，葉狀幼體肝胰臟逐漸變大、中葉瓣狀邊緣內陷程度也逐漸加深。不同發育時期的第 1步足外肢羽狀剛毛對數，如圖2所示。

2.3 甘露寡糖對波紋龍蝦葉狀幼體成活率的影響

分別統計用3種不同餌料投喂3d、5d、7d后，各試驗組中波紋龍蝦葉狀幼體的成活個數，并計算各試驗組的存活率。從如圖3可知：投喂3天后，1#餌料組的成活率為（72.5±2.5）%，2#餌料組的成活率為（62.5±2.5）%，3#餌料組的成活率為（57.5±2.5）%；投喂5d后，1#餌料組的成活率為（57.5±2.5）%，2#餌料組的成活率為（47.5±2.5）%，3#餌料組的成活率為（37.5±2.5）%；投喂7d后，1#餌料組的成活率為（42.5±2.5）%，2#餌料組的成活率為（32.5±2.5）%，3#餌料組的成活率為（22.5±2.5）%；與其它試驗組相比較，1#餌料組的成活率明顯高于2#餌料組和對照組。

3討論

由于波紋龍蝦葉狀幼體期較長，餌料組成較復雜，波紋龍蝦人工育苗迄今仍未取得突破，未能形成產業化。波紋龍蝦葉狀幼體每蛻皮1次即為一個新的發育時期，但養殖水體不同、投喂的餌料不同，各發育時期的時間長短也不相同。適合的餌料、合理的養殖密度是幼體人工培育成功的關鍵 。陳昌生等用魚油強化過的豐年蟲幼體投喂龍蝦幼體，經過 69 d培育獲得了蛻皮 8 次的幼體。劉慧玲等扁藻加鹵蟲作為餌料投喂喂龍蝦幼體，經過 54 d培育獲得了脫皮 9 次的幼體。本研究利用水泥池（約30 m2）進行幼體培育，用 0.4 % 甘露寡糖、小球藻強化過的豐年蟲幼體投喂龍蝦幼體，經過 37 d培育獲得了蛻皮 6 次的幼體，幼體的生長速度介于陳昌生和劉慧玲報道的生長速度之間，后續研究中將繼續對葉狀幼體的餌料組成進行優化。

近年來，甘露寡糖作為一種功能性寡糖，具有提高養殖動物的生產性能、改善腸道微生物區系以及提高免疫功能等功能，已被廣泛應用于水產動物飼料中。甘露寡糖對水產動物生長的促進作用也越來越引起廣大科研工作者的興趣。于艷梅［8］等報道在黃顙魚飼料中添加甘露寡糖可顯著提高黃顙魚血液白細胞吞噬活性，降低餌料系數進而促進黃顙魚的生長。胡凌豪［9］等（2019年）報道斜帶石斑魚飼料中添加寡聚糖通過提高腸道絨毛高度、絨毛寬度，改善幼魚腸道形態，促進營養吸收、消化，促進幼魚的生長。Lu z y［10］等（2020年）報道草魚飼料中添加甘露寡糖可顯著提升頭腎和脾臟的免疫功能，提高草魚的抗病能力。本研究發現甘露寡糖能提高波紋龍蝦葉狀幼體的成活率，甘露寡糖對龍蝦幼體生長的促進作用機理有待進一步深入研究。

參考文獻

［1］ 沈銘輝，范薇.波紋龍蝦工廠化養殖技術［J］.中國水產，2008，05：52，59.

［2］ 陳昌生，紀德華，吳坤杰，等.波紋龍蝦人工繁殖及早期葉狀幼體培育的初步研究［J］.集美大學學報，2003，08（03）：197-202.

［3］ 劉慧玲，李長玲，黃翔鵠，等. 波紋龍蝦早期葉狀幼體的培育及其形態觀察［J］.漁業現代化，2008，35（04）：36-40.

［4］ Dimitroglou A， Merrifield D L， Spring P， etal. Effects of mannan oligosaccharide （MOS） supplementation on growth performance， feed utilisation， intestinal histology and gut microbiota of gilthead sea bream （Sparus aurata）. Aquaculture，2010，300：182-188.

［5］ 翟浩杰.飼料中添加甘露寡糖對刺參生長性能、腸道及免疫功能的影響［D］.大連海洋大學，2022.

［6］ 張炎灼，張蕉南，胡兵.飼料中添加甘露寡糖對大黃魚幼魚生長性能的影響［J］.水產養殖，2014，35（18）：30-33.

［7］ Sang H M， Fotedar R. Effects of mannan oligosaccharide dietary supplementation on performances of the tropical spiny lobsters juvenile （Panulirus ornatus， Fabricius 1798）. Fish & Shellfish Immunology，2010，28：483-489.

［8］ 于艷梅，吳志新，陳孝煊，等.魔芋甘露寡糖對黃顙魚非特異性 免疫功能及生長的影響［J］.華中農業大學學報，2010，29（3）：351-355.

［9］ 胡凌豪，楊紅玲，趙蕓，等.果寡糖對斜帶石斑魚免疫功能和腸道形態的影響［J］.水產科學，2019，3（05）：499-594.

［10］ Lu Z Y， Jiang W D， Wu P， et al. Mannan oligosaccharides supplementation enhanced head kidney and spleen immune function in on-growing grass carp （Ctenopharyngodon idella）［J］. Fish & Shellfish Immunology， 2020， 106（4）： 596-608.