實驗條件下BT肽對南美白對蝦副溶血性弧菌的攻毒試驗

潘雪央 陸俊鍇 華建權

摘要：副溶血弧菌引起的急性肝胰腺壞死病是南美白對蝦的主要病害之一。通過在飼料中添加BT肽并進行攻毒實驗來探究BT肽是否能夠增強南美白對蝦的天然免疫力。結果表明，在飼料中添加BT肽可以顯著提高南美白對蝦對副溶血弧菌的抗病能力，但是免疫保護的持續時間稍顯不足，其原因有待進一步研究。

關鍵詞：南美白對蝦；BT肽；副溶血弧菌；免疫

中圖分類號：S941??? 文獻標識碼：A

經過幾十年的發展，南美白對蝦（Litopenaeus vananmei）已經成為我國水產養殖的主導品種；但同時，疾病爆發、養殖環境惡化和種質退化等問題都嚴重困擾著該產業的進一步發展，尤其是副溶血性弧菌引起的急性肝胰腺壞死病，每年都給養殖業造成了巨大的損失，成為制約南美白對蝦養殖發展的一個關鍵性因素。目前并無有效快速的方法防治對蝦疾病。

BT肽是土壤細菌Brevibacillus texasporus分泌的一種帶正電的含13個氨基酸殘基的非核糖體脂肽。體外試驗表明，BT肽是天然免疫受體TLR2的特異配體，其可作為“標志性微生物產物”（PAMP）被TLR2識別后激活Toll/TLRs天然免疫信號通道而增強天然免疫能力。飼料添加BT肽喂養雞，可以顯著的增加活性氧和一氧化氮的含量，并抑制雞大腸桿菌病、壞死性腸炎、沙門氏菌病等疾病的爆發。慈溪市農業農村局金湯東高級工程師在對同為節肢動物的昆蟲蜜蜂的研究中發現，發現飼喂含BT肽飼料的10箱蜜蜂沒有爆發任何疾病，但飼喂不含BT肽的常規飼料的10箱蜜蜂中有3箱爆發了歐洲幼蟲病。

目前，BT肽在水產動物上的應用還未有報道，如能對其在水產動物疾病爆發的效果進行評價，將可能極大地推動水產動物無抗養殖和疾病預防的發展。本試驗目的是在南美白對蝦喂食含BT肽的飼料與常規飼料下，經過副溶血性弧菌的攻毒，來證實BT肽是否對南美白對蝦的成活具有保護效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗在寧波市海洋與漁業研究院創新基地進行；副溶血性弧菌由寧波市海洋與漁業研究院提供，菌株來源于寧波市域送檢的南美白對蝦樣本中提取且帶有毒力基因副溶血性弧菌；南美白對蝦苗種由慈溪市傅金利水產養殖場采購且為其大田生產的同一批次，平均規格0.8厘米。飼料由強普公司生產，蛋白含量42%，不同階段投喂不同粒徑的飼料，分別是含96ppmBT肽的0#破碎、0#、1號破碎、1號料及不含BT肽的0#破碎、0#、1號破碎、1號料。

1.2 試驗時間

6月10日開始至7月30日結束。

1.3 試驗方法

取同一批次同規格的對蝦苗430尾，放置于6個活水箱（設3個實驗并行組、3個對照組），每個活水箱容積約5m3，先暫養7天，淘汰部分因移植造成的折損（見表1）；對照組投喂普通飼料、實驗組投喂BT肽添加飼料（普通飼料混合96 ppm BT肽加工而成），進行攻毒實驗；在各組飼料中加入活性副溶血弧菌（每kg飼料加入約6×109CFU），隨后分別投喂連續投喂七天，而后各組對蝦在相同條件下養殖50天；及時撈去死蝦，觀察并記錄各活水箱中對蝦的死亡情況及最后存活對蝦數量（見表2）。

2 試驗結果

攻毒實驗結果顯示（如圖），副溶血弧菌侵染對蝦后，實驗組的成活率顯著高于對照組，說明實驗組對蝦對副溶血弧菌的抗病能力比對照組強。

3 討論

副溶血性弧菌引起的肝胰腺壞死綜合癥是目前南美白對蝦養殖生產過程中影響最大、養殖戶的最為關心的問題，如果能找到一個解決方案，必將給南美白對蝦生產帶來巨大的影響和利好。目前生產中，控制副溶血性弧菌的最常用的方法，一是改善養殖生產環境，二是飼料中添加乳酸菌類微生態制劑，來抑制弧菌在腸道中的繁殖。

實驗條件下BT肽對南美白對蝦主要疾病-副溶血性弧菌的攻毒試驗，目的是為了了解BT肽對南美白對蝦主要疾病-副溶血性弧菌的抑制效果，也為大田試驗打下理論上的基礎。試驗表明，BT肽對副溶血弧菌侵染南美白對蝦后，其抗病能力顯著提高。

試驗數據也表明，攻毒前二天的對蝦死亡明顯高于攻毒后幾天；攻毒的保護率也顯不足；說明單一的攻毒其效果有限，其原因需要進一步進行研究；使用方法需要進一步完善。

另外，在系統改進方面，沈美雄等［10］在鰻鱺自循環水養殖系統中，發現了一種水面雙路排污器，具體是通過攔魚孔板將排污器分為進污區與排污區，進污區共有通向養殖池底及養殖池水面的帶有池面污物收集臂板的兩路進污通道，具備導流養殖池池底及池面污物至魚廁所，截留大顆粒雜物及病死鰻鱺的功能，值得借鑒和后期改進。

本次試驗在實施養殖過程中取得了一定的成效，但也不可避免的發現了一些問題，以便在后期的循環水養殖中引起注意，少走彎路，減少損失，提高養殖產量和經濟效益。建議如下：（1）水流推動設備養殖前期每天1次，每次1～2個小時；中后期每天2～3次，每次1～2個小時。（2）糞污收集設備耗電較高，建議養殖前期每隔5～7天開啟一次；后期每隔3～5天開啟一次，以減輕用電消耗。（3）加州鱸發病較為頻繁，成活率略低，建議加強養殖期間的池塘消毒和魚病防治工作。（4）相比3種魚類，湘云鯽抗逆性最強，成活率最高，值得優先推廣。（5）減少非必要人員驚擾，為魚類營造安全的生長與攝食環境。

參考文獻

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