缺血性腦卒中患者外周血抗磷脂抗體、miR-125a-3p的檢測(cè)及臨床意義*

崔 佳,趙海利,仇 鵬,賈 敏,默海霞

河北省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,河北石家莊 050051

急性缺血性卒中(CIS)是由腦供血不足使腦組織局部缺血缺氧引發(fā)的一系列神經(jīng)功能障礙癥狀,為神經(jīng)內(nèi)科常見(jiàn)病,致殘、致死率較高,近年來(lái)隨人口老齡化加劇其發(fā)生率逐漸增加,已成為中老年人群殘疾的主要原因,給家庭及社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)[1-2]。早期及時(shí)準(zhǔn)確評(píng)估CIS病情,予以針對(duì)性治療措施減輕腦損傷,對(duì)提高療效、改善預(yù)后至關(guān)重要。近年研究指出,血生化指標(biāo)在診斷、評(píng)估病情、預(yù)測(cè)預(yù)后中具有重要作用,通過(guò)檢測(cè)相關(guān)血清指標(biāo)變化不僅能評(píng)估病情,還可對(duì)預(yù)后進(jìn)行預(yù)測(cè)[3]。微小RNA(miRNA)為一類(lèi)非編碼小分子核糖核酸,可通過(guò)調(diào)控基因表達(dá)參與CIS的發(fā)生發(fā)展,miR-125a-3p被指出可參與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成,并與斑塊性質(zhì)有關(guān),可作為心腦血管疾病的預(yù)警指標(biāo)[4]。抗磷脂抗體(aPLs)屬于異質(zhì)性抗體,近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其與CIS有一定關(guān)系,有望作為CIS不良預(yù)后的預(yù)測(cè)因子[5]。但臨床關(guān)于miR-125a-3p、aPLs與CIS神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后的相關(guān)性研究較少。基于此,本課題組研究了miR-125a-3p、aPLs與CIS神經(jīng)功能缺損程度的相關(guān)性,并分析各指標(biāo)評(píng)估患者預(yù)后的臨床意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。選取2018年1月至2021年12月本院收治的297例CIS患者為觀察組,同期200例體檢健康者為對(duì)照組。觀察組男187例,女110例;年齡48～77歲,平均(62.41±5.98)歲;體重指數(shù)18.4～27.9 kg/m2,平均(23.54±1.52)kg/m2。對(duì)照組男119例,女81例;年齡45～73歲,平均(60.29±5.27)歲;體重指數(shù)18.4～27.9 kg/m2,平均(23.54±1.52)kg/m2。兩組性別、年齡、體重指數(shù)比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn):觀察組均符合CIS診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];均為首次患病。排除標(biāo)準(zhǔn):既往腦部創(chuàng)傷史、手術(shù)史;合并代謝性疾病、自身免疫性疾病;存在精神異常、認(rèn)知障礙;存在重要臟器功能障礙;存在血液系統(tǒng)疾病;嚴(yán)重感染性疾病;伴惡性腫瘤。所有受試者及家屬知曉本研究,已簽署同意書(shū)。

1.2方法

1.2.1資料收集 收集患者入院時(shí)一般資料,包括年齡、性別、吸煙史、體重指數(shù)、飲酒史、基礎(chǔ)疾病(糖尿病、高血壓、冠心病)、美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。SBP、DBP采用標(biāo)準(zhǔn)水銀柱血壓測(cè)量?jī)x測(cè)定,TC、TG、LDL-C、HDL-C采用全自動(dòng)生化分析儀(貝克曼庫(kù)爾特,IMMAGE800)測(cè)定。

1.2.2外周血aPLs、miR-125a-3p檢測(cè) 觀察組在入院時(shí)(治療前)、對(duì)照組在體檢時(shí)收集外周靜脈血約6 mL,離心(轉(zhuǎn)速3 000 r/min、時(shí)間10 min、離心半徑10 cm),分離血清,均分為2份,其中一份血清采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定抗心磷脂抗體(IgG-aCL)、抗磷脂酰絲氨酸抗體(IgG-aPS)、抗β2糖蛋白-1抗體(IgG-β)水平,試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物公司,若IgG-aCL≥11 GPS或IgG-aCL>20 GPL或IgG-β>20 SGU則判定aPLs為陽(yáng)性;另一份血清采用RNA提取試劑盒(北京索萊寶公司)提取總RNA,以逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)Promega公司)實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)測(cè)定血清miR-125a-3p水平,PCR試劑盒購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司。采用2-ΔΔCt計(jì)算miR-125a-3p的相對(duì)表達(dá)水平。miR-125a-3p的正向引物為5′-ATCTGACACAGGTGAGGTTCTTG-3′,反向引物為5′-TATGGTTTGACGACTGTGTGAT-3′,內(nèi)參U6的正向引物為5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′,反向引物為5′-TATGGTTTGACGACTGTGTGTGAT-3′。

1.2.3觀察組病情評(píng)估、治療及預(yù)后評(píng)估 神經(jīng)功能缺損程度以NIHSS評(píng)分[7]評(píng)估,總分0～42分,輕度為<4分,中度為4～15分,重度為>15分;治療參照《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》[6]予以靜脈溶栓、吸氧、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、維持水電解質(zhì)平衡等對(duì)癥治療。觀察組治療后隨訪(fǎng)3個(gè)月,以Rankin修訂量表評(píng)分(mRS)[8]評(píng)估預(yù)后情況,mRS≤2分為預(yù)后良好,>2分為預(yù)后不良。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較兩組miR-125a-3p水平及aPLs陽(yáng)性率。(2)比較不同神經(jīng)功能缺損程度患者miR-125a-3p水平及aPLs陽(yáng)性率。(3)比較不同預(yù)后患者一般資料、miR-125a-3p水平、aPLs陽(yáng)性率。

2 結(jié) 果

2.1兩組miR-125a-3p水平及aPLs陽(yáng)性率 觀察組血清miR-125a-3p水平、aPLs陽(yáng)性率較對(duì)照組高(P<0.05),見(jiàn)表1。

2.2不同神經(jīng)功能缺損程度患者miR-125a-3p水平及aPLs陽(yáng)性率 結(jié)果顯示,隨著神經(jīng)功能缺損程度增加,miR-125a-3p水平、aPLs陽(yáng)性率逐漸增加(P<0.05),見(jiàn)表2。

表1 兩組miR-125a-3p水平及aPLs陽(yáng)性率比較或n(%)]

2.3不同預(yù)后患者一般資料及miR-125a-3p水平、aPLs陽(yáng)性率 不同預(yù)后患者年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙史、飲酒史、基礎(chǔ)疾病、LDL-C、HDL-C、SBP、DBP比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),預(yù)后不良患者TC、TG、NIHSS評(píng)分、miR-125a-3p、aPLs陽(yáng)性率較預(yù)后良好患者高(P<0.05),見(jiàn)表3。

表2 不同神經(jīng)功能缺損程度患者miR-125a-3p水平及aPLs陽(yáng)性率或n(%)]

2.4CIS患者預(yù)后不良危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析 以單因素分析中有差異的變量作為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,將TC、TG、NIHSS評(píng)分控制后,miR-125a-3p水平高、aPLs陽(yáng)性為預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素(P<0.05),見(jiàn)表4。

表3 不同預(yù)后患者一般資料及miR-125a-3p水平、aPLs陽(yáng)性率或n/n或n(%)]

表4 CIS患者預(yù)后不良危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析

2.5miR-125a-3p、aPLs對(duì)CIS患者不良預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值 繪制miR-125a-3p、aPLs預(yù)測(cè)CIS患者不良預(yù)后的ROC曲線(xiàn),結(jié)果顯示,miR-125a-3p、aPLs預(yù)測(cè)不良預(yù)后的AUC分別為0.781、0.736,應(yīng)用SPSS軟件的聯(lián)合應(yīng)用ROC曲線(xiàn)理論模式,構(gòu)建各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)的ROC曲線(xiàn)模型,結(jié)果顯示,聯(lián)合預(yù)測(cè)AUC最大,為0.859。見(jiàn)表5、圖1。

表5 miR-125a-3p、aPLs單獨(dú)及聯(lián)合對(duì)CIS患者不良預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

圖1 miR-125a-3p、aPLs單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)CIS患者預(yù)后不良的ROC曲線(xiàn)

3 討 論

CIS為我國(guó)致死、致殘的主要原因,其發(fā)生呈逐年遞增趨勢(shì),調(diào)查指出我國(guó)每年新發(fā)患者超過(guò)兩百萬(wàn),給社會(huì)及家庭帶來(lái)嚴(yán)重疾病負(fù)擔(dān)[9]。因此,如何預(yù)防CIS發(fā)生、提高治療效果、改善預(yù)后為當(dāng)前醫(yī)學(xué)面臨的重大挑戰(zhàn)。

研究指出,CIS發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,內(nèi)皮功能紊亂、炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化在其病理生理過(guò)程中具有重要作用[10]。miRNA為由核苷酸組成的一類(lèi)內(nèi)源性單鏈非編碼RNA分子,可影響靶基因表達(dá),參與CIS復(fù)雜病理生理過(guò)程啟動(dòng),并參與CIS的發(fā)展[11]。GORUR等[12]學(xué)者指出,miRNA可參與斑塊內(nèi)細(xì)胞凋亡、影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及破裂,并在神經(jīng)元破壞、局部炎癥等方面具有重要作用。XU等[13]同樣指出,miRNA可能參與內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、炎性介質(zhì)釋放,促使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成、破裂,參與腦卒中的發(fā)展。以上研究均表明miRNA在腦卒中的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。此外,WU等[14]學(xué)者指出,miRNA表達(dá)與腦卒中患者神經(jīng)功能具有一定關(guān)系,能作為評(píng)估其神經(jīng)缺陷程度生物學(xué)指標(biāo)。miR-125a-3p定位在染色體19q13,戴海龍等[15]學(xué)者指出,miR-125a-3p在冠心病患者中高表達(dá),可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程。為此,推測(cè)其在腦卒中的發(fā)病中同樣有一定作用。基于此,本研究通過(guò)測(cè)定CIS患者及健康體檢者miR-125a-3p水平發(fā)現(xiàn),CIS患者miR-125a-3p水平明顯升高,可見(jiàn)miR-125a-3p表達(dá)提高可能加重動(dòng)脈粥樣硬化,促進(jìn)病情進(jìn)展,參與CIS的發(fā)生。究其原因在于CIS屬于一種慢性炎癥,巨噬細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化的形成、發(fā)展中具有重要作用,其通過(guò)在斑塊部位聚集,釋放相關(guān)細(xì)胞因子溶解粥樣斑塊纖維帽,從而使斑塊破裂,從而參與CIS的發(fā)生,而miR-125a-3p在M1型巨噬細(xì)胞中呈高表達(dá)狀態(tài),有學(xué)者指出miR-125a-3p可能作用于M1型巨噬細(xì)胞,使其在斑塊中發(fā)揮作用,從而加劇斑塊不穩(wěn)定性[16-17]。可見(jiàn)miR-125a-3p與CIS病情進(jìn)展密切相關(guān),檢測(cè)其水平有助于臨床評(píng)估患者在治療過(guò)程中的病情,臨床應(yīng)密切關(guān)注miR-125a-3p水平的變化。

近年來(lái),aPLs與CIS的關(guān)系逐漸受到人們廣泛關(guān)注,有研究發(fā)現(xiàn)aPLs與CIS密切相關(guān)[18]。研究指出,調(diào)整其他傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素后aPLs陽(yáng)性者發(fā)生CIS風(fēng)險(xiǎn)較aPLs陰性者明顯上升[19]。一項(xiàng)基礎(chǔ)研究指出,aPLs可損傷血腦屏障進(jìn)入大腦,產(chǎn)生神經(jīng)元毒性,加重神經(jīng)功能損傷,aPLs的情況可反映臨床治療過(guò)程中患者病情的變化,aPLs陽(yáng)性者可能預(yù)后效果更差[20]。本研究發(fā)現(xiàn),CIS患者aPLs陽(yáng)性率明顯升高,表明aPLs可能與CIS的發(fā)生有關(guān),且神經(jīng)損傷越重,陽(yáng)性表達(dá)率越高。結(jié)合既往研究分析原因如下:(1)aPLs可加重血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,導(dǎo)致前列環(huán)素與血栓素間平衡被破壞,導(dǎo)致血管收縮及水栓形成,同時(shí)aPLs還可激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng),促使小動(dòng)脈收縮,血管外周阻力增加,導(dǎo)致腦血流量降低,從而引發(fā)CIS;(2)aPLs可引起脂代謝紊亂,導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化,誘發(fā)血栓形成;(3)aPLs還可通過(guò)影響抗凝-纖溶系統(tǒng)促使血栓形成,參與CIS的發(fā)生[21-22]。可見(jiàn)aPLs可從多方面參與CIS的發(fā)生及進(jìn)展,臨床應(yīng)密切關(guān)注aPLs陽(yáng)性的患者。

CIS患者在經(jīng)規(guī)范治療后仍可能遺留不同程度的神經(jīng)缺損癥狀,影響患者生活質(zhì)量,因此,找尋能預(yù)測(cè)CIS患者預(yù)后情況的相關(guān)指標(biāo),及時(shí)對(duì)其情況進(jìn)行評(píng)估并采取針對(duì)性干預(yù)措施,對(duì)CIS患者預(yù)后改善有一定幫助。本研究經(jīng)多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),miR-125a-3p水平高、aPLs陽(yáng)性為預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素,可見(jiàn)miR-125a-3p、aPLs對(duì)CIS患者預(yù)后不良具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。為此,本研究采用ROC曲線(xiàn)評(píng)價(jià)miR-125a-3p、aPLs對(duì)CIS患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值,結(jié)果顯示,miR-125a-3p、aPLs單獨(dú)預(yù)測(cè)的AUC分別為0.781、0.736,表明上述指標(biāo)均具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值,將二者聯(lián)合預(yù)測(cè)AUC達(dá)0.859,可有效提高預(yù)測(cè)價(jià)值,為臨床預(yù)后評(píng)估提供參考。因此,對(duì)于aPLs為陽(yáng)性且miR-125a-3p呈高表達(dá)CIS患者,臨床需高度重視,密切關(guān)注病情變化情況,從而降低不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述,CIS患者miR-125a-3p水平、aPLs陽(yáng)性率明顯升高,且與神經(jīng)功能缺損程度密切相關(guān),miR-125a-3p、aPLs在CIS患者預(yù)后評(píng)估方面具有較好價(jià)值,可為臨床預(yù)后評(píng)估提供參考。