PPAR-γ甲基化、VEGF在乳腺增生患者中的表達水平及意義*

楊東光,李艷平,李海云

1.涿州市醫院普外科,河北涿州 072750;2.涿州市中醫醫院婦產科,河北涿州 072750

乳腺增生是一種女性常見病、多發病,有調查結果顯示,70%～80%的女性存在不同程度的乳腺增生,主要表現為單側或雙側乳房脹痛,或在月經前表現為彌漫性結節脹痛[1]。部分患者疼痛感可能隨年齡增長而減輕,但有少數患者可能出現腋下或背部散射疼痛。乳腺增生患者是誘發乳腺癌的高危人群,其發生乳腺癌的風險是健康人群的2～4倍,尤其是乳腺影像報告與數據系統(BI-RADS)分級Ⅳ級及以上患者乳腺惡變風險更高[2]。其中抑癌基因甲基化異常是導致乳腺癌發生的重要機制,對惡性腫瘤的篩查具有重要意義。過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(PPAR-γ)是一種由配體激活的核轉錄因子,活化后對脂肪細胞相關基因的表達、細胞周期、炎癥反應等有調控作用,同時其介導的抗腫瘤機制已在結腸癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤研究中得到驗證[3-4]。乳腺增生、乳腺癌的發生均離不開血管生成,血管內皮生長因子相(VEGF)是一種特異性作用于血管內皮細胞的因子,可刺激血管內皮細胞分裂,促進新生血管生成,增加血管通透性[5],但其表達水平是否與乳腺增生進展為乳腺癌有關尚未明確。本研究通過對比不同BI-RADS分級乳腺增生患者及乳腺癌患者PPAR-γ甲基化水平及VEGF水平,分析二者在乳腺病變進展過程中的變化,旨在為乳腺癌的防治提供指導。現將具體結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2022年3月在涿州市醫院就診的158例良性乳腺增生患者作為觀察組,同期確診的158例早期乳腺癌患者作為惡性對照組,同期158例體檢健康者作為健康對照組。所有受試者對本研究知情,并簽署同意書。納入標準:(1)觀察組符合《乳腺增生癥診治專家共識》[6]中相關診斷標準,惡性對照組符合《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2019年版)》[7]中相關診斷標準,健康對照組經檢查顯示無乳腺病變;(2)觀察組、惡性對照組均為初次確診,未采取治療措施;(3)女性;(4)年齡>18歲。排除標準:(1)嚴重心、肺、肝、腎等功能障礙;(2)既往婦科疾病史;(3)乳房整容史;(4)妊娠或哺乳期女性。3組基礎資料比較差異無統計學意義(P>0.05),見表1。

表1 3組一般資料比較或n(%)]

1.2方法 3組均抽取清晨空腹外周靜脈血4 mL,常溫靜置30 min后,3 000 r/min離心10 min,離心半徑為10 cm,于-80 ℃冰箱中保存。采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法測定PPAR-γ基因甲基化情況,甲基化特異引物和非甲基化引物由大連寶生物有限公司提供。采用邁瑞MR-96A全自動酶標儀及配套試劑盒測定血清VEGF水平(參考范圍為0～160 ng/L),試劑盒由羅氏診斷產品有限公司提供。

1.3觀察指標 (1)比較3組PPAR-γ甲基化水平及VEGF水平。(2)比較觀察組不同BI-RADS分級患者PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平。(3)分析PPAR-γ甲基化水平及VEGF水平與BI-RADS分級的相關性。(4)比較觀察組BI-RADS Ⅳ級乳腺增生患者與惡性對照組患者資料。(5)相關因素的多重共線性檢驗。(6)分析BI-RADS Ⅳ級進展為早期乳腺癌的影響因素。

2 結 果

2.13組PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平比較 觀察組PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平高于健康對照組(P<0.05),但低于惡性對照組(P<0.05)。見表2。

2.2觀察組不同BI-RADS分級患者PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平比較 觀察組158例患者BI-RADS Ⅱ級49例,Ⅲ級51例,Ⅳ級58例。觀察組隨著BI-RADS分級增加,PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平呈升高趨勢,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表2 3組PPAR-γ甲基化水平、VEGF表達比較

表3 觀察組不同BI-RADS分級患者PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平比較

2.3PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平與BI-RADS分級的相關性 經Spearman相關系數分析,PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平與BI-RADS分級均呈正相關(r=0.836、0.763,均P<0.001)。

2.4觀察組BI-RADS Ⅳ級乳腺增生患者與惡性對照組患者資料比較 惡性對照組體重指數、初產年齡、絕經及乳房周期性疼痛比例高于觀察組BI-RADS Ⅳ級乳腺增生患者,每天體育鍛煉時間、月經規律及定期體檢比例低于觀察組BI-RADS Ⅳ級乳腺增生患者,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 觀察組BI-RADS Ⅳ級乳腺增生患者與惡性對照組患者資料比較或n(%)]

續表4 觀察組BI-RADS Ⅳ級乳腺增生患者與惡性對照組患者資料比較或n(%)]

2.5相關因素的多重共線性檢驗 將PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平、體重指數、初產年齡、絕經、乳房周期性疼痛、每天體育鍛煉時間、月經規律、定期體檢進行多重共線性檢驗,發現因素容差在0.333～0.670,VIF在1.492～3.002(VIF<5),多重共線可能性低。見表5。

2.6BI-RADS Ⅳ級乳腺增生進展為乳腺癌的多因素Logistic回歸分析 以是否發生乳腺病變情況為因變量(賦值:BI-RADS Ⅳ級乳腺增生=0,乳腺癌=1),以PPAR-γ甲基化水平(具體值)、VEGF水平(具體值)、體重指數(具體值)、初產年齡(否=0,是=1)、絕經(否=0,是=1)、乳房周期性疼痛(否=0,是=1)、每天體育鍛煉時間(<1 h=1,≥1 h=2)、月經規律(否=0,是=1)、定期體檢(否=0,是=1)為自變量;多因素Logistic分析結果顯示,校正體重指數、初產年齡、絕經、乳房周期性疼痛、每天體育鍛煉時間、月經規律、定期體檢因素后,PPAR-γ甲基化水平及VEGF高水平仍會增加BI-RADS Ⅳ級乳腺增生進展為乳腺癌的風險(P<0.05)。見表6。

表5 相關因素的多重共線性檢驗

表6 BI-RADS Ⅳ級乳腺增生進展為乳腺癌的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

乳腺增生多發于30～40歲女性,主要以乳腺組織中乳小葉結構、乳腺導管及結締組織異常生長為病理變化。近年來隨著人們健康意識的增強及醫學影像學檢測技術的多樣化發展,乳腺增生檢出率呈增加趨勢。生理性乳腺增生不需要特殊治療亦可痊愈,但部分病理性乳腺增生隨著病情進展則存在癌變風險,嚴重影響患者身體健康。目前關于乳腺癌發病的危險因素已得到臨床重視[8],但區域化差異及個體化差異明顯,故如何通過生化檢測指標客觀判斷乳腺增生患者病情惡變風險具有重要意義。

表達遺傳學改變是多種疾病發生的重要機制之一。PPAR-γ可通過配體依賴途徑對下游基因的轉錄產生影響,多表達于巨噬細胞、脾臟、結腸、脂肪細胞等。KOSAKA等[9]研究指出,PPARγ低表達與該基因啟動子甲基化有關。PPAR-γ作為抗腫瘤靶點亦在多項研究中得到證實[10-11]。本研究結果顯示,觀察組PPAR-γ甲基化水平高于健康對照組,但低于惡性對照組,差異均有統計學意義(P<0.05),這與韋美德等[12]研究結果相符,表明PPAR-γ甲基化在乳腺病變進展過程中具有重要作用。本研究中,通過對比觀察組不同BI-RADS分級患者檢出情況并進行相關性分析發現,觀察組PPAR-γ甲基化水平與BI-RADS分級均呈正相關(r=0.836、0.763,均P<0.001)。分析其可能原因:PPAR-γ甲基化會激活環氧化酶-2(COX-2)蛋白,促進其表達增加,促進血管生長,同時會作用于乳腺組織中的上皮/基質細胞和細胞外基質,調節原癌基因c-myc、細胞周期蛋白D1、金屬基質蛋白酶(MMP)-2和MMP-9等表達,抑制細胞凋亡,增加腫瘤易感性[13-15]。這與既往研究中BI-RADS分級越高惡性病變風險越高的結論相符[16]。由此推測,PPAR-γ甲基化參與乳腺增生的進展過程,可能與其惡變的生理、病理過程有關,或可為臨床評估此類患者惡變風險提供參考。

VEGF在乳腺組織細胞中釋放后與VEGF受體結合,刺激內皮細胞增殖、生長、遷移[17-18]。王晶晶等[19]研究結果顯示,乳腺增生患者血清VEGF呈高表達,經有效治療后其表達水平降低。郭智慧等[20]對不同群體血清VEGF水平進行檢測,發現其在健康群體、乳腺良性病變、乳腺惡性病變中依次升高。本研究中,乳腺增生患者血清VEGF水平高于健康體檢者但低于早期乳腺癌患者,與上述研究相似。乳腺良惡性病變均需充足的VEGF為其提供養分,而乳腺癌由于出現細胞無限增殖,組織內新生血管更多,VEGF呈顯著高表達,并且VEGF與BI-RADS分級呈正相關,表明隨著乳腺增生的進展,患者內皮細胞增殖越活躍,新生血管逐漸增多。但乳腺增生最終進展至乳腺癌是多因素作用的結果,本研究在校正體重指數、初產年齡、絕經、乳房周期性疼痛、每天體育鍛煉時間、月經規律、定期體檢等混雜因素后,結果發現PPAR-γ甲基化水平及VEGF高表達仍會增加BI-RADS Ⅳ級乳腺增生進展為乳腺癌的風險。因此,針對乳腺增生患者,尤其是BI-RADS Ⅳ級患者應在日常危險因素篩查的基礎上加強PPAR-γ甲基化水平、VEGF水平檢測,對高度可疑乳腺惡變的患者及時進行病理檢查,以達到早確診、早治療的目的。

本研究的局限性在于不同乳腺增生患者進展為乳腺癌所需時間差異較大,有的甚至需要約十年,故本研究僅分析了PPAR-γ基因甲基化、VEGF與BI-RADS Ⅳ級乳腺增生進展為乳腺癌的關系,而通過前瞻性研究分析PPAR-γ基因甲基化及VEGF水平預測乳腺增生進展為乳腺癌是否具有可行性仍需進一步驗證。

綜上所述,PPAR-γ基因甲基化主要與細胞凋亡受到抑制、新血管生長等有關,VEGF是刺激新血管生成的重要因子,二者均參與乳腺增生、乳腺癌的發生發展過程。