標準物質(zhì)替代測定法在中藥質(zhì)量評價中的應(yīng)用與發(fā)展

季加威　李錚　尉捷　秦雯　傅欣彤

摘 要：標準物質(zhì)替代測定法是采用一種或多種中藥對照品來實現(xiàn)對多個待測組分進行分析的方法，是近年來中藥質(zhì)量評價的新方法。本文就標準物質(zhì)替代測定法中一測多評法及雙標多測法的近年研究進展及其在中藥質(zhì)量評價中的應(yīng)用進行概述，為其在中藥色譜分析技術(shù)中的進一步研究和應(yīng)用提供思路與參考。

關(guān)鍵詞：標準物質(zhì)替代測定法；一測多評法；雙標多測法；中藥質(zhì)量評價

中圖分類號：R917

文獻標識碼：A 文章編號：1673－4513（2023）－01－44－04

引言

隨著時代的進步，中藥質(zhì)量評價分析對于定量研究的趨勢已由以往的單指標成分向多指標成分轉(zhuǎn)變，評價模式逐漸向多個有效成分、整體控制的模式發(fā)展。由于中藥成分復雜多樣，僅通過單一成分的檢測，不能對中藥的質(zhì)量進行全面控制與合理評價。中醫(yī)整體觀念認為，中藥得以發(fā)揮其最佳藥效是由其所含多類化學成分之間的綜合作用形成的，因此，隨著分離與檢測技術(shù)的發(fā)展，多指標質(zhì)量控制研究漸于中藥分析領(lǐng)域廣泛開展，目前學界也在中藥多指標成分的含量測定方面取得積極的進展；另外，為滿足多指標成分深入研究工作的基礎(chǔ)供應(yīng)需求，使用傳統(tǒng)外標法分析必將造成中藥實物標準物質(zhì)（對照品）的制備種類和數(shù)量激增，一定程度上影響了國家藥品標準的執(zhí)行。

近年來，更多的中藥質(zhì)量評價研究采用了標準物質(zhì)替代測定法，本文將對標準物質(zhì)替代測定法的原則及應(yīng)用進行綜述。

一、標準物質(zhì)替代測定法

（一）標準物質(zhì)

標準物質(zhì)（對照品）是國家藥品標準中定性與定量不可或缺的實物對照，在分析中起到計量作用，具有準確性、均勻性及穩(wěn)定性。

（二）標準物質(zhì)替代測定法

標準物質(zhì)替代測定法為使用1個內(nèi)參物，實現(xiàn)對多待測成分完成同時測定的方法，其核心原則為在確保定性、定量準確度和方法學耐用性的基礎(chǔ)上，降低標準物質(zhì)的使用成本。

（三）標準物質(zhì)替代測定法的分類

標準物質(zhì)替代測定法根據(jù)替代標準物質(zhì)使用的數(shù)量可分為一測多評法、雙標多測法和多替代標準物質(zhì)法3類。多替代標準物質(zhì)法是指使用多個對照品進行含量測定，由于互相之間的轉(zhuǎn)化問題較為復雜，目前應(yīng)用較少，本文對該方法不做論述。

一測多評法（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）最早是由王智民等于2006年提出的，此方法根據(jù)中藥各成分間存在一定的函數(shù)關(guān)系，通過使用一種價廉易得的對照品為內(nèi)參物，使用相對校正因子法計算得出其它多個難以獲得的物質(zhì)成分含量。一測多評法的提出迅速引起了學界的廣泛關(guān)注，經(jīng)多年多例的驗證成功案例支持，此方法漸漸成為符合中藥特點的新型質(zhì)量評價模式，為中藥整體質(zhì)量控制開發(fā)了新思路。

一測多評法雖能有效減少對照品使用數(shù)量，但其有時在定性上存在誤差偏大的問題，基于此，孫磊等提出了“雙標多測法”（two reference sub-stances for determination of multiple components，TRSDMC），此方法使用2個標準品，在定性上使用雙標線性校正法，而在定量上使用相對校正因子法。方法通過使用3個不同品牌的高效液相色譜儀以及30根不同品牌的C18色譜柱，以大黃、重樓、補骨脂為成功使用案例，論證了該法確有可實施性，分析結(jié)果表明，與一測多評法（相對保留時間法）相比，雙標線性校正法可顯著提高色譜峰在定性上的準確度以及待測成分在多品牌色譜柱上的適用程度。

一測多評法與雙標多測法均為標準物質(zhì)替代測定法，但兩者在使用對照品數(shù)量上有差異，一測多評法使用1種對照品，以相對保留時間法定性、相對校正因子法定量；而雙標多測法是在一測多評法定性的基礎(chǔ)上增加1種對照品，同時使用雙標線性校正法更加精準的定位色譜峰、提高多種色譜柱的適用程度，此方法允許色譜條件存在一定范圍內(nèi)的波動。目前一測多評法的質(zhì)量控制模式已較為健全，而對于雙標多測法的研究與應(yīng)用還有待繼續(xù)深入，兩者均為標準物質(zhì)替代測定法的發(fā)展提供巨大助益。

標準物質(zhì)替代測定法在使用上一般選擇替代制備困難、價格昂貴或穩(wěn)定性差的待測成分，該待測成分最好選擇為結(jié)構(gòu)母核相似，僅取代基不同的同類成分且數(shù)量不宜過多。應(yīng)用標準物質(zhì)替代測定法需考察不少于15批不同來源的樣品，以確保方法具有適用性。

二、標準物質(zhì)替代測定法在中藥質(zhì)量評價中的應(yīng)用

（一）一測多評法在中藥質(zhì)量評價中的應(yīng)用

相較于傳統(tǒng)外標法，一測多評法（QAMS）在分析效率、經(jīng)濟、環(huán)境保護及操作要求上具有絕對的優(yōu)勢，吸引著越來越多的研究者們將QAMS投入到單味中藥飲片、配方顆粒、復方制劑的質(zhì)量控制研究當中。2008年，應(yīng)用QAMS于中藥復方制劑（冠脈康膠囊）的定量研究中；2010年，《中國藥典》收錄了應(yīng)用QAMS進行同時測定黃連中5個生物堿類成分含量的方法；2011年，中國中醫(yī)科學院中藥研究所的研究人員等制訂了QAMS的技術(shù)指南，為QAMS的后續(xù)開發(fā)研究提供了技術(shù)性指導意見；《中國藥典》2020年版重點引入了一測多評方法技術(shù)。一測多評法自提出以來已有相關(guān)研究千余篇，該方法已經(jīng)應(yīng)用于鐵皮石斛、防己、板藍根、柴胡等中藥飲片，活血丸、茵梔黃傳統(tǒng)湯劑、二至丸、健脾益腎顆粒等中成藥；淫羊藿、辛夷等中藥配方顆粒質(zhì)量評價研究。從中國知網(wǎng)收錄的中文學術(shù)論文數(shù)量來看，自2006年至2019年總體發(fā)表量呈上升趨勢，2019年后至今發(fā)表量趨于穩(wěn)定，可見QAMS在近些年受歡迎度以及影響力較高（圖1）。

研究發(fā)現(xiàn)，QAMS主要應(yīng)用于中藥復雜結(jié)構(gòu)中的同類成分（結(jié)構(gòu)母核相同）的分析評價，因其結(jié)構(gòu)相似，紫外吸收波長亦相近，在波長的選擇上使用最大吸收波長即可。目前多數(shù)研究均針對有相似母核的化合物且該方法被廣泛接受，例如羅定強等采用QAMS測定腎康栓中的大黃蒽醌類成分；徐文武等利用一測多評法同時測定紅參中11種人參皂苷的含量等。對于不同類結(jié)構(gòu)成分的一測多評研究相對較少，但目前也有研究者把標準物質(zhì)替代測定法的應(yīng)用范圍拓展，研究結(jié)構(gòu)母核不同的多類（一般選擇二到三類）成分同時測定。通過查閱文獻發(fā)現(xiàn)不同類結(jié)構(gòu)成分的一測多評研究多集中在苯丙素類、黃酮類、萜類化合物中，研究者為滿足不同結(jié)構(gòu)母核的成分需選用最大吸收波長的要求，此類研究大多采用二極管陣列檢測器，通過不同時間段以不同波長通道檢測各類成分的方法進行研究。如張伯鋒等運用一測多評法測定補心氣口服液中七種成分包含了三萜類、黃酮類、苯丙素類三類化學成分的含量；付洋等建立了同時測定蜘蛛香中包含苯丙素類、萜類兩類成分的一測多評方法；何兵等采用一測多評法測定款冬花中苯丙素類、黃酮類、倍半萜成分的含量。此外還有選取一個波長進行測定情況，如段麗等基于一測多評法測定補骨脂中包含苯丙素類、黃酮類兩類成分的含量；朱澤兵等采用一測多評法測定白鮮皮中包含生物堿類、萜類兩類成分的含量；張龍等基于一測多評法完成了淫羊藿中包括苯丙素類、黃酮類、生物堿三類成分含量的同時測定。在不同類型成分間開展的研究已取得了積極的進展，具體品種還需要試驗研究和驗證。

（二）雙標多測法在中藥質(zhì)量評價中的應(yīng)用

雙標多測法自2013年孫磊等提出以來每年均有一定的品種應(yīng)用研究。目前對中藥飲片如西洋參、補骨脂、澤瀉、大黃、重樓等，對中成藥如柏子養(yǎng)心丸、乳塊消片、大黃制劑等進行了研究。重慶市食品藥品檢驗研究院建立的川黃芩雙標多測方法已通過了專家審評，并被新版重慶市中藥材標準收入，但雙標多測法還存在著一些問題，如各藥材不同成分的穩(wěn)定性、不同品牌儀器、色譜柱的適用性等眾多混雜因素都可能對分析結(jié)果有影響，因而還需要根據(jù)具體研究情況具體分析，積累更多使用案例，不斷完善方法。

隨著中藥標準物質(zhì)替代測定法的發(fā)展，研究提供了一種將標準物質(zhì)數(shù)字化的新思路。這種思路建立在雙標線性校正法研究的基礎(chǔ)上，將標準物質(zhì)進行數(shù)字信息化，在降低實物標準物質(zhì)的制備和標定負擔的同時還能提供更加系統(tǒng)化、規(guī)范化、全面化的交互信息，從而構(gòu)建智能化檢索、大數(shù)據(jù)記錄存儲與共享的新模式。目前中檢院中藥所已開發(fā)了數(shù)字化標準物質(zhì)的雛形——DRS Origin軟件，此軟件憑借互聯(lián)網(wǎng)大數(shù)據(jù)共享模式，根據(jù)具體品種及指標成分直接給出最佳色譜柱以及分析方法，可以更好地應(yīng)用于以雙標多測法為指導的雙標線性校正法當中，有助于提高保留時間預測的準確性，為中藥定性分析以及包括特征圖譜特征峰定位方面提供科學參考。為解決對照品供需矛盾及操作要求繁瑣等問題，一些研究單位已將數(shù)字化標準物質(zhì)研究工作應(yīng)用在國家藥品抽驗、省級藥品抽驗以及藥品標準研究工作中，并發(fā)表了多篇學術(shù)論文給予支持，發(fā)展前景光明。

三、結(jié)語

為減輕對照品供應(yīng)負擔、有效彌補單一成分在質(zhì)量控制方面的不足，深入研究標準物質(zhì)替代測定法并指導應(yīng)用于中藥質(zhì)量的綜合評價具有重要意義，該方法已廣泛應(yīng)用于中藥飲片（西洋參、柴胡等）、配方顆粒（淫羊藿、辛夷等）、中成藥（活血丸、柏子養(yǎng)心丸）的質(zhì)量控制研究當中。

預計在后續(xù)的科研工作中，行業(yè)內(nèi)也會繼續(xù)對一測多評法和雙標多測法開展更多的研究，應(yīng)用于更多中藥品種的質(zhì)量分析與控制，中國藥典也會繼續(xù)擴大收錄中藥的相關(guān)品種；同時，也會更多結(jié)合使用DRS Origin軟件，加快更新數(shù)據(jù)庫，提高數(shù)據(jù)規(guī)范化要求，并配合以雙標線性校正法輔助應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制研究及相關(guān)標準修訂工作。行業(yè)工作者可以了解這些趨勢，更新思維模式，學習、總結(jié)、開發(fā)、利用好相關(guān)技術(shù)手段，深入研究標準物質(zhì)替代測定法在中藥分析技術(shù)中的應(yīng)用，從而更好地解決中藥對照品供需矛盾，更全面的保證中藥質(zhì)量，更綜合的評價中藥質(zhì)量。

參考文獻：

[1]何兵，田吉，楊世艷. 一種新的校正方式單點校正在桑葉一測多評中的應(yīng)用[J]. 藥物分析雜志， 2021， 41（7）： 1133-1147.

[2]秦衛(wèi)紅，王響群，秦迎春. HPLC法同時測定中藥多種有效成分含量的應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)藥指南， 2013， 11（5）： 439-440.

[3]陳楊，徐光臨，徐德生，等. 一測多評法在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用及關(guān)鍵問題[J]. 環(huán)球中醫(yī)藥， 2017， 10（5）： 635-640.

[4]嚴紅. HPLC法同時測定中藥多種有效成分含量的應(yīng)用[J]. 天津藥學， 2010， 22（1）： 67-70.

[5]王清君，孫磊，劉峰，等. 標準物質(zhì)的發(fā)展和挑戰(zhàn)與數(shù)字化新形式[J]. 中國藥學雜志， 2016， 51（18）： 1537-1544.

[6]馬雙成. 中藥標準物質(zhì)在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用[C]//“新成果·新進展·新突破”中華中醫(yī)藥學會2013年學術(shù)年會、第三次中華中醫(yī)藥科技成果論壇論文集， 2013： 90-94.

[7]孫彩林，孫磊，王趙，等. 基于DRS origin的替代標準物質(zhì)法研究——以超高效液相色譜測定乳香中11-羰基-β-乳香酸和11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量為例[J]. 中國藥學雜志， 2019， 54（17）： 1411-1417.

[8]孫磊，金紅宇，馬雙成，等. 中藥標準物質(zhì)替代測定法技術(shù)指導原則[J]. 中國藥學雜志， 2015， 50（4）： 284-286.

[9]王智民，高慧敏，付雪濤，等. “一測多評”法中藥質(zhì)量評價模式方法學研究[J]. 中國中藥雜志， 2006（23）： 1925-1928.

[10]王晶晶，梁娟娟，陳兩綿，等. 一測多評法結(jié)合UPLC-Q-TOF/MS評價天舒膠囊中主要苯酞類成分[J]. 中國實驗方劑學雜志， 2015， 21（22）： 86-93.

Application and Development of Substitution Assay of Reference Materials

in Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicines

JI Jiawei1， LI Zheng2， YU Jie1， QIN Wen1， FU Xintong2

（1.School of Biomedicine， Beijing City University， Beijing 100094， China;

2.Beijing Institute of Drug Control， Beijing 102206， China）

Abstract： ?The substitution assay of reference materials is a method of using one or more traditional Chinese medicines reference substances to realize the analysis of multiple components to be tested， which is a new method for quality evaluation of traditional Chinese medicines in recent years. This paper summarizes the recent research progress of the one-test-multi-evaluation method and the double-standard multi-measurement method in the alternative determination of reference materials and their application in the quality evaluation of traditional Chinese medicines， so as to provide ideas and references for their further research and application in traditional Chinese medicine chromatographic analysis technology.

Keywords：substitution assay of reference materials; one test and multiple evaluations; double standard multi-measurement method; quality evaluation of traditional Chinese medicines

（責任編輯：田榮榮）

收稿日期：2022年03月18日

作者簡介：季加威（1988-），女，浙江溫州人，碩士，主要研究方向：中藥質(zhì)量評價。

通訊作者：秦 雯（1977-），女，云南大理人，副教授，碩士，主要研究方向：中藥學人才培養(yǎng)，中藥化學、中藥質(zhì)量控制、評價與檢測。

基金項目：北京市中醫(yī)管理局北京中藥炮制技術(shù)特色研究（RHS-BJZC-J16005）。