急性腦梗死患者血清hs-CRP、CaM、miR-365的變化及臨床意義

徐熾天, 胡文霞, 陳生, 梁正玲

1.六安市人民醫(yī)院 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬六安醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,安徽六安 237006;2.上海市公共衛(wèi)生臨床中心,上海 200093

急性腦梗死(acute cerebral infarction,ACI)是臨床常見腦血管疾病,以中老年患者多見,發(fā)病率較高,嚴(yán)重者可危及患者生命安全[1]。ACI時(shí)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,分泌炎癥因子,這些炎癥因子可反映ACI病情變化。超敏C反應(yīng)蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)是一種炎癥敏感性指標(biāo),其含量升高是ACI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。鈣超載在ACI的發(fā)病中有著重要作用,鈣調(diào)蛋白(calmodulin,CaM)可調(diào)節(jié)鈣離子生理功能,與細(xì)胞死亡關(guān)系密切[3]。miR-365屬神經(jīng)特異表達(dá)的miRNA[4],有研究發(fā)現(xiàn),miRNA與腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[5],miR-365是ACI的危險(xiǎn)因素,在ACI患者血清中表達(dá)升高[6],但miR-365與ACI的預(yù)后關(guān)系尚不清楚。因此,本文對(duì)ACI患者血清hs-CRP、CaM、miR-365的變化及臨床意義進(jìn)行探討,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2020年2月—2022年2月收治的ACI患者100例(ACI組),男61例,女39例,年齡(62.51±3.62)歲,體質(zhì)指數(shù)(21.56±2.64)kg/m2;吸煙史35例,飲酒史43例,高血壓史37例,糖尿病史31例。另選擇同期體檢健康者50例為對(duì)照組,男30例,女20例,年齡(62.45±3.57)歲,體質(zhì)指數(shù)(21.48±2.61)kg/m2;吸煙史18例,飲酒史20例,高血壓史17例,糖尿病史15例。兩組一般資料比較差異無顯著性(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。ACI組根據(jù)神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度、預(yù)后分為輕中度組和重度組、預(yù)后不良組和預(yù)后良好組。ACI納入標(biāo)準(zhǔn):①參照《中國(guó)腦梗死中西醫(yī)結(jié)合診治指南(2017)》[7]診斷標(biāo)準(zhǔn),有短暫性腦缺血發(fā)作史,有偏癱、失語、吞咽困難等癥狀,查體有錐體束征,頭顱CT顯示低密度影;②發(fā)病前1個(gè)月內(nèi)無外科手術(shù)史,發(fā)病24 h內(nèi)入院;③患者或者家屬知曉并同意本研究。排除標(biāo)準(zhǔn):①腦部及其他惡性腫瘤;②嚴(yán)重精神類疾病、肝腎疾病;③近期存在感染、凝血功能障礙。

1.2 神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度的判定

采用美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院腦卒中量表[8]評(píng)分,對(duì)ACI患者神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估,≤15分為輕中度組,>15分為重度組。

1.3 血清hs-CRP和CaM的檢測(cè)

ACI患者入院后立即采靜脈血5 mL,以3 000 r/min離心10 min,取上清,-80 ℃保存待測(cè)。采用人hs-CRP ELISA試劑盒(上海初態(tài)生物科技有限公司)檢測(cè)血清hs-CRP,采用人CaM ELISA試劑盒(上海心語生物科技有限公司)檢測(cè)血清CaM,均根據(jù)試劑盒步驟說明操作。

1.4 血清miR-365的檢測(cè)

采用美國(guó)Invitrogen公司TRIzol reagent RNA提取試劑盒提取總RNA,實(shí)時(shí)qRT-PCR法檢測(cè)血清miR-365相對(duì)表達(dá)量。以U6為內(nèi)參,RNA催化合成采用cDNA PrimerScriptTMRT試劑盒,RNA擴(kuò)增采用SYBR Premix Ex TaqTMqRT-PCR試劑盒。引物miR-365正向:5′-UAAUGCCCCUAAAAAUCCUUAU-3′,反向:5′-AAGGAUUUUUAGGGGCAUUAUU-3′;U6正向:5′-GTCCTGGCAGATATACACTAAACAT-3′,反向:5′-CTCACGCTTGAATTCATGCGGCTT-3′。反應(yīng)條件95 ℃ 10 s預(yù)變性,95 ℃ 5 s變性,60 ℃ 20 s退火,72 ℃ 30 s延伸,進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-365相對(duì)表達(dá)量。

1.5 預(yù)后的評(píng)估

患者入院后給予氧氣吸入,保持呼吸道通暢,采取抗血小板、他汀類藥物等基礎(chǔ)治療。對(duì)ACI患者進(jìn)行3個(gè)月隨訪,采用改良Barthel指數(shù)[9]評(píng)估患者預(yù)后,60～100分為預(yù)后良好組,0～59分為預(yù)后不良組。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 各組hs-CRP、CaM、miR-365水平的比較

100例ACI患者中,輕中度神經(jīng)缺損55例(55.00%),重度神經(jīng)缺損45例(45.00%),預(yù)后良好59例(59.00%),預(yù)后不良41例(41.00%)。hs-CRP、CaM、miR-365水平ACI組高于對(duì)照組;重度組高于輕中度組;預(yù)后不良組高于預(yù)后良好組(P<0.05;表1)。

表1 各組hs-CRP、CaM、miR-365水平的比較

2.2 血清hs-CRP、CaM、miR-365水平與神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,血清hs-CRP、CaM、miR-365與神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(r分別為0.523、0.479、0.498,P分別為0.003、0.010、0.009)。

2.3 hs-CRP、CaM、miR-365對(duì)ACI預(yù)后的預(yù)測(cè)效能

hs-CRP、CaM、miR-365聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI預(yù)后的診斷效能高于單獨(dú)預(yù)測(cè)(P<0.05;表2和圖1)。

圖1 hs-CRP、CaM、miR-365預(yù)測(cè)ACI預(yù)后的ROC曲線

表2 hs-CRP、CaM、miR-365對(duì)ACI預(yù)后的預(yù)測(cè)效能

3 討 論

ACI男性發(fā)病略高于女性,癥狀多變,對(duì)ACI病情、預(yù)后評(píng)估是ACI治療的重要程序,對(duì)改善其預(yù)后具有重要意義。影像學(xué)檢查可直接觀察ACI病灶,但需移動(dòng)患者,可能會(huì)延誤最佳治療時(shí)機(jī),影響恢復(fù)。hs-CRP是提示機(jī)體發(fā)生心血管危險(xiǎn)事件較敏感的指標(biāo)之一。本研究中,ACI患者h(yuǎn)s-CRP水平顯著高于健康體檢者,且與神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度呈正相關(guān),預(yù)后不良患者h(yuǎn)s-CRP水平較高,hs-CRP預(yù)測(cè)預(yù)后的靈敏度、特異度較高,提示hs-CRP可反映ACI病情變化和神經(jīng)損傷程度,也可預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后。高水平hs-CRP能加劇中性粒細(xì)胞對(duì)腦組織神經(jīng)元浸潤(rùn)使其凋亡,導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙,李崇祎等[10]研究顯示,hs-CRP在ACI患者血清中的含量高低與神經(jīng)功能預(yù)后有關(guān),是ACI患者神經(jīng)功能損傷的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,與本研究結(jié)果相符。因此hs-CRP不僅能反映ACI患者機(jī)體炎癥情況,還能評(píng)估患者神經(jīng)功能損傷程度,高水平hs-CRP提示預(yù)后不良,對(duì)ACI患者預(yù)后具有預(yù)測(cè)價(jià)值,可作為ACI患者早期病情判斷和預(yù)后的一個(gè)客觀指標(biāo)。

ACI的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,鈣超載是神經(jīng)細(xì)胞缺血缺氧后繼發(fā)性損傷的重要環(huán)節(jié)。CaM又稱鈣調(diào)素,屬多功能蛋白質(zhì),能與鈣離子結(jié)合,本身無活性,對(duì)鈣具有絕對(duì)依賴性,參與細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,是動(dòng)態(tài)鈣離子傳感器,對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)定具有重要作用。本研究中,ACI患者CaM水平顯著高于健康體檢者,且與神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度呈正相關(guān),預(yù)后不良患者CaM水平較高,CaM預(yù)測(cè)預(yù)后的靈敏度、特異度較高,提示CaM與ACI患者腦缺血后鈣超載有關(guān),可反映病情變化和神經(jīng)損傷程度,也可預(yù)測(cè)預(yù)后。ACI患者鈣離子與CaM結(jié)合后可激活下游一系列信號(hào)通路,加重腦組織損傷,而CaM拮抗劑可能是治療腦血管疾病的有效藥。ACI應(yīng)激可增加谷氨酸受體表達(dá),促進(jìn)鈣離子內(nèi)流,激活多種信號(hào)通路,導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡,鈣超載是ACI病情加重的重要危險(xiǎn)因素,鈣超載和鈣離子平衡紊亂可引起CaM含量增加。李楠等[11]研究顯示,CaM與ACI患者神經(jīng)功能損傷程度呈正相關(guān),可用于評(píng)估ACI嚴(yán)重程度;沈青[12]研究顯示,CaM在ACI患者中水平升高,預(yù)后較差患者水平高于預(yù)后良好患者,CaM水平能預(yù)測(cè)ACI嚴(yán)重程度和預(yù)后,與本研究結(jié)果一致。

微小RNA在心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,miR-365在不同腫瘤中存在異常表達(dá),與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后存在密切聯(lián)系。MO等[13]在腦缺血大鼠研究中發(fā)現(xiàn),miR-365在腦缺血組織中表達(dá)較高,注射miR-365拮抗劑能增加星形膠質(zhì)細(xì)胞新生成熟神經(jīng)元的數(shù)量,減少神經(jīng)功能缺損,提示miR-365異常升高與腦缺血有關(guān)。本研究中,ACI患者miR-365含量顯著高于健康體檢者,且與神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度呈正相關(guān),預(yù)后不良患者miR-365水平較高,miR-365預(yù)測(cè)預(yù)后的靈敏度、特異度較高,提示miR-365可反映病情變化和神經(jīng)損傷程度,也可預(yù)測(cè)預(yù)后。張?jiān)S平等[14]研究顯示,miR-365與梗死面積、神經(jīng)缺損程度有關(guān),是影響ACI發(fā)生的危險(xiǎn)因素,對(duì)其預(yù)后具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值,與本研究結(jié)果相符。

本研究發(fā)現(xiàn),hs-CRP、CaM、miR-365聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI預(yù)后的診斷效能高于單獨(dú)預(yù)測(cè),但本研究存在一定局限性,未對(duì)ACI不同時(shí)間點(diǎn)的hs-CRP、hs-CRP、miR-365進(jìn)行檢測(cè),需臨床進(jìn)一步深入研究。綜上所述,血清hs-CRP、CaM、miR-365在ACI患者中高表達(dá),對(duì)ACI患者預(yù)后具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。