凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞源腸炎沙門氏菌致病性的影響

夏立業(yè)

摘 要：為了研究凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞源腸炎沙門氏菌致病性的影響，本試驗(yàn)選取80只7日齡雛雞隨機(jī)分為4組，每組20只。A組（對(duì)照組）和C組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組（B組和D組）在基礎(chǔ)飼糧中添加2×108 cfu/kg凝結(jié)芽孢桿菌。連續(xù)飼喂7 d后，第 8天進(jìn)行腸炎沙門氏菌攻毒，分別給C組和D組雛雞灌服0.5 mL 6.25×107 cfu/只的腸炎沙門氏菌，而A組和B組灌服0.5 mL無(wú)菌PBS，感染后觀察一周。試驗(yàn)開始后記錄雛雞不同時(shí)間點(diǎn)的體重變化，同時(shí)在各時(shí)間點(diǎn)采集盲腸內(nèi)容物，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示，攻毒后C組和D組雛雞的體重均出現(xiàn)下降情況，但D組雛雞體重下降幅度較小，但同一時(shí)間點(diǎn)，四組雛雞之間體重?zé)o顯著差異（P>0.05）。在不同時(shí)間點(diǎn)，A組和B組雛雞盲腸內(nèi)容物中均未分離到腸炎沙門氏菌，而C組和D組雛雞在感染后第1天開始即可分離出腸炎沙門氏菌，隨著感染天數(shù)增加菌落數(shù)呈減少趨勢(shì)，且D組的載菌量均顯著低于C組的載菌量（P<0.05）。綜上所述，凝結(jié)芽孢桿菌能夠緩解腸炎沙門氏菌感染引起的雛雞體重下降，并有效減少盲腸中腸炎沙門氏菌的載菌量。

關(guān)鍵詞：凝結(jié)芽孢桿菌；腸炎沙門氏菌；蛋雞源；雛雞；致病性

中圖分類號(hào)：S816.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1673-1085（2023）05-0050-04

沙門氏菌感染是食物和水傳播疾病的主要病因之一，也是世界范圍內(nèi)引起人類和動(dòng)物公共衛(wèi)生危害的主要原因。在20世紀(jì)早期，白痢沙門氏菌和傷寒沙門氏菌在美國(guó)和歐洲的家禽中流行，增加雛雞死亡率，造成重大經(jīng)濟(jì)損失，因此，人們開始廣泛開展防治這幾類沙門氏菌感染的研究。然而，隨著這些病原菌被控制或消滅，腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis）變得更加普遍。自20世紀(jì)70年代末以來(lái)，腸炎沙門氏菌成為世界許多地區(qū)日益嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題[1]。

在飼料中添加益生菌可以減少致病菌在宿主腸道的定植從而有效控制食源性感染。凝結(jié)芽孢桿菌是經(jīng)美國(guó)食品及藥物管理局批準(zhǔn)的一種“普遍認(rèn)為安全”的桿菌類乳酸菌。研究證實(shí)，飼糧添加凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能有很好的改善作用[2]。然而關(guān)于凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)腸炎沙門氏菌對(duì)雛雞的致病性影響尚不清楚。本試驗(yàn)分析飼喂凝結(jié)芽孢桿菌腸炎沙門氏菌感染后雛雞體重變化和盲腸內(nèi)載菌量變化的影響，以期為腸炎沙門氏菌的防治提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

腸炎沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（No. 21482）購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。凝結(jié)芽孢桿菌（BC-3）分離自遼寧省某蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)采集的蛋雞糞便，并由本單位保存。雛雞通過(guò)購(gòu)置種蛋利用孵蛋器孵化后分別籠飼至7或12日齡用于動(dòng)物試驗(yàn)。

1.2 腸炎沙門氏菌對(duì)雛雞毒力的測(cè)定

將腸炎沙門氏菌于營(yíng)養(yǎng)肉湯中復(fù)蘇，連續(xù)傳代三次，用無(wú)菌PBS將菌液梯度稀釋后測(cè)定其濃度，然后稀釋成107～109 cfu/mL三個(gè)連續(xù)的稀釋度。雛雞飼喂至12日齡，隨機(jī)分為4組，每組20只，在禁食、禁水3 h后，按照1 mL/只口服接種不同濃度的腸炎沙門氏菌懸液，對(duì)照組接種相同劑量的無(wú)菌PBS，連續(xù)觀察7 d，進(jìn)行半數(shù)致死量（LD50）的測(cè)定[3]。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選取7日齡雛雞80只，隨機(jī)分為4組，每組20只。A組（對(duì)照組）和C組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組（B組和D組）在基礎(chǔ)飼糧中添加2×108 cfu/kg凝結(jié)芽孢桿菌。連續(xù)飼喂7 d后，第 8天進(jìn)行腸炎沙門氏菌攻毒，分別給C組和D組雛雞灌服0.5 mL腸炎沙門氏菌，劑量為L(zhǎng)D50的四分之一，而A組和B組灌服0.5 mL無(wú)菌PBS，觀察一周。

1.4 雛雞體重變化

分別在飼喂試驗(yàn)開始后的第0、5、10和14天稱量雛雞重量，統(tǒng)計(jì)每組雛雞的平均體重，繪制體重增長(zhǎng)曲線。

1.5 雛雞盲腸內(nèi)容物中腸炎沙門氏菌計(jì)數(shù)

在腸炎沙門氏菌感染后的第1、3、5、7天，分別從每組隨機(jī)選取3只雛雞屠宰，無(wú)菌取出一部分盲腸內(nèi)容物稱重，置于1 mL滅菌PBS中，將樣品充分震蕩混勻后進(jìn)行連續(xù)的10倍稀釋，分別取103～107 cfu/mL五個(gè)稀釋度的樣品涂布瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)過(guò)夜，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，再統(tǒng)計(jì)每克內(nèi)容物中的腸炎沙門氏菌數(shù)[4]。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件中GLM模型進(jìn)行方差分析，同時(shí)以Duncan氏法做多重比較，P<0.05表示差異顯著，P≥0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 腸炎沙門氏菌對(duì)雛雞的毒力測(cè)定結(jié)果

將連續(xù)梯度稀釋后的腸炎沙門氏菌感染雛雞后，連續(xù)7 d觀察雛雞精神狀態(tài)、臨床變化以及發(fā)病和死亡情況（見表1）。LD50根據(jù)改良Karber法計(jì)算，logLD50 = Xk-i （∑P-0.5），其中，Xk為各組中最大攻毒劑量的對(duì)數(shù)；i為相鄰兩對(duì)數(shù)劑量的差值；∑P為攻毒各組死亡率之和，經(jīng)計(jì)算腸炎沙門氏菌對(duì)雛雞的LD50為2.5×108 cfu/mL，按照LD50的四分之一劑量開展后續(xù)的雛雞感染試驗(yàn)。

2.2 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)腸炎沙門氏菌感染雛雞體重的影響

飼喂試驗(yàn)開始后第0、5、10 和14 天分別稱量每組雛雞的體重，計(jì)算平均體重后，繪制各組雛雞的體重變化曲線。結(jié)果如圖1所示，在試驗(yàn)開始后的幾天時(shí)間，各組雛雞體重均呈上升趨勢(shì)。第8天開始感染試驗(yàn)，從第10天的體重結(jié)果可知，對(duì)照組（A組）和凝結(jié)芽孢桿菌飼喂組（B組）雛雞體重仍呈上升趨勢(shì)，但不如感染前明顯，這可能是由于A組和B組雛雞灌服無(wú)菌PBS對(duì)雞產(chǎn)生一定的應(yīng)激作用；感染后，腸炎沙門氏菌感染組（C組）和凝結(jié)芽孢桿菌保護(hù)組（D組）雛雞的體重均出現(xiàn)下降情況，其中D組雛雞體重下降幅度較小，但同一時(shí)間點(diǎn)，四組雛雞之間體重?zé)o顯著差異（P>0.05）。上述結(jié)果表明凝結(jié)芽孢桿菌可以減輕腸炎沙門氏菌對(duì)雛雞體重的影響，能夠?qū)﹄r雞起到較好的保護(hù)作用。

2.3 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)腸炎沙門氏菌感染雛雞盲腸中載菌量的影響

腸炎沙門氏菌感染第1、3、5、7天分別取雛雞盲腸內(nèi)容物稱重后稀釋涂板，計(jì)算每克內(nèi)容物中腸炎沙門氏菌數(shù)。如圖2所示，A組和B組雛雞盲腸內(nèi)容物中未分離到腸炎沙門氏菌，而C組和D組雛雞在感染后第1天開始即可分離出腸炎沙門氏菌，隨著感染天數(shù)增加菌落數(shù)呈減少趨勢(shì)。而在試驗(yàn)過(guò)程中的不同檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，D組的載菌量均顯著低于C組的載菌量（P<0.05），表明飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌能有效減少腸炎沙門氏菌在雛雞盲腸中的定植。

3 討論

由于腸炎沙門氏菌可以在家禽的腸道中定植，家禽及其產(chǎn)品通常被認(rèn)為是該致病菌感染的主要來(lái)源之一。凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)酸和膽鹽有很高的耐受性，能適應(yīng)并定植宿主胃腸道，并通過(guò)產(chǎn)生乳酸而抑制致病菌的增殖，從而維護(hù)腸道健康，提升畜禽生產(chǎn)效益[5]。因此，本試驗(yàn)探究了在飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)腸炎沙門氏菌致病性的影響。從結(jié)果可知，凝結(jié)芽孢桿菌可以緩解雛雞由于腸炎沙門氏菌感染造成的體重?fù)p失。雞的盲腸是腸炎沙門氏菌的主要定植部位，雞可以成為無(wú)癥狀的病原菌攜帶者。因此，盲腸和腸道內(nèi)容物被認(rèn)為是肉雞生長(zhǎng)期間和加工廠腸炎沙門氏菌污染的主要來(lái)源，盲腸的載菌量也是衡量機(jī)體抵抗腸炎沙門氏菌入侵能力最重要的器官。劉聰?shù)萚6]研究發(fā)現(xiàn)添加凝結(jié)芽孢桿菌可顯著降低感染沙門氏菌蛋雞的盲腸沙門氏菌拷貝數(shù)，并抑制沙門氏菌的定植，這與我們的試驗(yàn)結(jié)果相似。

4 小結(jié)

在本試驗(yàn)中，飼喂凝結(jié)芽孢桿菌能夠緩解腸炎沙門氏菌感染引起的雛雞體重下降并有效減少盲腸中腸炎沙門氏菌的載菌量，上述結(jié)果為凝結(jié)芽孢桿菌在腸炎沙門氏菌防控中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王莎莎，劉麗英，吳桂賢，等.腸炎沙門氏菌接種對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)的影響[J].家禽科學(xué)，2015（12）：12-17.

[2] 朱凡，肖明霞，王乙茹，等.飼用凝結(jié)芽孢桿菌和丁酸梭菌對(duì)高溫養(yǎng)殖肉雞生長(zhǎng)性能的影響.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)），2022，07（06）：957-962.

[3] 崔璐璐，鞠孜敬，楊溢，等.丁酸梭菌影響腸炎沙門氏菌對(duì)SPF小鼠致病性的作用[J].微生物學(xué)報(bào)，2020，60（04）：769-779.

[4] 陳鋮. 腸炎沙門氏菌不同感染途徑對(duì)雛雞的致病性及其對(duì)藥物敏感性試驗(yàn)[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2016.

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[6] 劉聰，黃世猛，趙麗紅，等. 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)感染腸炎沙門氏菌蛋雞腸道形態(tài)、抗氧化能力及沙門氏菌定植的影響[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，24（01）：69-75.

Effects of Bacillus coagulans on the Pathogenicity of Salmonella enteritidis from Laying Hens

XIA Liye

（People's Government of Aqi Town in the suburb of Jiamusi City， Jiamusi? 154012， China）

Abstract：? In order to study the effect of Bacillus coagulans on the pathogenicity of Salmonella enteritidis from laying hens， 80 chicks aged 7 days were selected and divided into 4 groups with 20 chicks per group. Chicks in group A （control group） and group C were fed a basal diet， while chicks in group B and group D were fed the basal diet supplemented with 2×108 cfu/kg Bacillus coagulans. After feeding One week， chicks in group C and group D were given 0.5 mL 6.25×107 cfu of Salmonella enteritidis， while chicks in group A and group B were given 0.5 mL of sterile PBS on d 8. The experiment last for one week after infection. The weight changes of the chicks were recorded at different time points. The chicks were killed at different time points after infection， and the cecal contents were collected for colony counting. The results showed that the weight of chickens in group C and group D decreased after challenge， but the weight of chickens in group D decreased slightly. However， there was no significant difference among the four groups at the same time （P>0.05）. At different time points， no Salmonella enteritidis was isolated from cecal contents of group A and group B， but Salmonella enteritidis was isolated from the first day after infection in group C and group D. The number of colonies in group D was significantly lower than that in Group C （P<0.05）. In conclusion， Bacillus coagulans could alleviate the weight loss caused by Salmonella enteritidis infection and effectively reduce the Salmonella enteritidis load in the cecum of chicks.

Keywords：? Bacillus coagulans; Salmonella enteritidis; Laying hens origin; Chicks; Pathogenicity