水楊酸鈉增強氧化應激介導耳蝸螺旋神經節神經元損傷作用的實驗觀察

祝小婷, 黃佳琳, 林曉宇, 蘇紀平

水楊酸是阿司匹林的活性成分,具有解熱鎮痛、抗炎等多種功效,是目前全球應用最廣泛的非甾體類藥物之一。然而,在水楊酸類藥物使用過程中常伴隨著不少的副作用,尤以耳毒性最為常見,主要表現為耳鳴和聽力下降[1]。耳蝸螺旋神經節神經元(spiral ganglion neurons,SGN)是連接毛細胞與聽覺中樞的重要樞紐,已被證實是水楊酸鈉(sodium salicylate,SS)耳毒性的重要作用位點[2],但其具體作用機制仍未完全明了。氧化應激是耳聾的常見損傷機制,在噪聲性聾[3]、老年性聾[4]以及順鉑誘導的耳毒性聾[5]中均可觀察到氧化應激增強。有研究顯示SS對神經元的氧化應激損傷具有保護作用[6-7]。但亦有研究發現SS會增強氧化應激,誘導細胞凋亡[8]。本課題組既往研究發現,SS使SGN中過氧化物陰離子[活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)來源之一]水平升高[9],提示SS可能通過增強氧化應激導致SGN損傷。本研究旨在通過免疫熒光技術觀察SS對新生SD大鼠耳蝸SGN的影響,定位ROS產生的位置并量化其表達水平,為進一步研究SS致SGN損傷的機制提供參考。

1 材料與方法

1.1實驗動物及分組 選取新生2～3 d齡無特定病原體(specific pathogen free,SPF)級SD大鼠21只,雌雄不限,由廣西醫科大學實驗動物中心提供。耳蝸器官培養組6只,SGN原代培養組15只。其中耳蝸器官培養組隨機分為對照組和5 mM SS組,每組3只。SGN原代培養組隨機分為對照組、5 mM SS組、5 mM SS+N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)組、陽性對照過氧化氫(hydrogen peroxide,H2O2)組、H2O2+NAC組,每組3只。

1.2主要儀器及試劑 主要儀器:細胞恒溫培養箱(ThermoFisher公司),倒置顯微鏡及熒光顯微鏡(奧林巴斯公司)。……