濾膜法、多管發(fā)酵法檢驗生活飲用水中微生物的比較

劉素玉

（廣饒縣疾病預(yù)防控制中心，山東東營 257300）

生活飲用水是人們?nèi)粘；顒又胁豢扇鄙俚奈镔|(zhì)，合格的水質(zhì)量是保障居民日常生活的基礎(chǔ)。大腸菌群超標(biāo)是常見的生活飲用水質(zhì)量問題，當(dāng)生活飲用水中的大腸埃希菌、耐熱大腸菌群等超標(biāo)時，使用人群容易爆發(fā)水源性腸道傳染病，給家庭、社會醫(yī)療增加負擔(dān)[1]。在生活飲用水日常監(jiān)測工作中，通常需要經(jīng)過微生物檢驗來了解水中大腸菌群的含量，以便采取措施來改善飲用水質(zhì)量，而不同微生物檢驗方法的檢驗效果存在差異。本研究觀察比較了濾膜法、多管發(fā)酵法兩種方法對生活飲用水中大腸菌群的檢驗效果。

1 材料和方法

1.1 材料與設(shè)備

試管、微孔濾膜（廣東環(huán)凱生物科技有限公司，規(guī)格：直徑47 mm，孔徑0.45 μm）、顯微鏡（重慶市奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司，愈械注準(zhǔn)20192220096，型號規(guī)格B203）、無齒鑷子、無油隔膜真空泵（四川福茂元生物科技有限公司，規(guī)格型號VP-10L）、培養(yǎng)皿（90 mm×90 mm）、恒溫培養(yǎng)箱（松下冷鏈大連有限公司，遼械注準(zhǔn)20182220097，規(guī)格MIR-180）、臺式蒸汽壓力滅菌器（騰氏常州醫(yī)療設(shè)備有限公司，蘇械注準(zhǔn)20182570922，規(guī)格型號2540EKA）。

1.2 水樣采集

依據(jù)工作的要求，選取本地區(qū)20個監(jiān)測點，開展供水工程的水質(zhì)采樣監(jiān)測。在枯水期采集水樣200份（出廠水水樣100份，末梢水水樣100份），豐水期采集水樣200份（出廠水水樣100份，末梢水水樣100份），對所有水樣開展研究。

1.3 檢測方法

檢測依據(jù)為《中華人民共和國水污染防治法》《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測方法 微生物指標(biāo)》（GB/T 5750.12——2006），檢測結(jié)果判定依據(jù)《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749——2022）。

1.3.1 濾膜法檢驗

將蒸餾水裝入燒杯內(nèi)，使用酒精燈對微孔濾膜加熱滅菌，沸騰水浴15 min/次，取出換水繼續(xù)煮沸滅菌，共3次。用鑷子夾出濾膜，以粗糙面向上置于無菌濾床上。取待檢測水樣100 mL注入，進行抽濾，抽氣5 s，使細菌被截留。用鑷子將濾膜轉(zhuǎn)移到紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，裝入恒溫箱，37 ℃條件培養(yǎng)1 d。將濾膜置于顯微鏡下計數(shù)和鑒定大腸菌群數(shù)。

1.3.2 多管發(fā)酵法檢驗

培養(yǎng)液制備：蒸餾水1 000 mL+蛋白胨25 g+氯化鈉15 g+乳糖15 g，加熱牛肉膏10 g使其充分溶解，調(diào)節(jié)pH值為7.1～7.5，加1.5%溴甲酚紫乙醇溶液2 mL，混合均勻，裝入試管內(nèi)后高溫（110～120 ℃）高壓滅菌20 min，取出貯存?zhèn)溆谩?/p>

準(zhǔn)備15個試管，分成3份，每份5管。第1份5個管內(nèi)裝有培養(yǎng)液5 mL，分別加水樣10 mL。第2份5個管內(nèi)裝有培養(yǎng)液10 mL，分別加水樣1 mL。3份5個管內(nèi)裝有10 mL培養(yǎng)液，加入1∶10稀釋的水樣。將所有裝有樣本的試管置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1 d。取出試管進行觀察，無產(chǎn)酸產(chǎn)氣說明陰性；有產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況則轉(zhuǎn)種植于伊紅美藍瓊脂板上，放入恒溫箱37 ℃培養(yǎng)1 d。取出，肉眼觀察菌落形態(tài)，取染色顏色較深區(qū)域的中心部位菌落，使用顯微鏡計數(shù)及鑒定大腸菌群數(shù)。

1.4 觀察比較指標(biāo)

①比較濾膜法、多管發(fā)酵法對枯水期水樣的大腸菌群檢出情況。②比較濾膜法、多管發(fā)酵法對豐水期水樣的大腸菌群檢出情況。③比較濾膜法、多管發(fā)酵法對出廠水的大腸菌群檢出情況。④比較濾膜法、多管發(fā)酵法對末梢水的大腸菌群檢出情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析SPSS 25.0，計數(shù)資料用%表示，行χ2檢驗，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯水期大腸菌群檢出情況對比

如表1所示，多管發(fā)酵法對枯水期的大腸菌群總檢出率（23.50%）高于濾膜法（16.00%）（P＜0.05）。

2.2 豐水期大腸菌群檢出情況對比

如表2所示，多管發(fā)酵法對豐水期的大腸菌群總檢出率（15.00%）高于濾膜法（9.00%）（P＜0.05）。

表2 濾膜法檢驗、多管發(fā)酵法對豐水期的大腸菌群檢出情況比較[n（%）]

2.3 出廠水大腸菌群檢出情況對比

如表3所示，多管發(fā)酵法對出廠水的大腸菌群總檢出率（13.50%）高于濾膜法（8.50%）（P＜0.05）。

表3 濾膜法檢驗、多管發(fā)酵法對出廠水的大腸菌群檢出情況比較[n（%）]

2.4 末梢水大腸菌群檢出情況對比

如表4所示，多管發(fā)酵法對末梢水的大腸菌群總檢出率（24.50%）高于濾膜法（16.50%）（P＜0.05）。

表4 濾膜法檢驗、多管發(fā)酵法對末梢水的大腸菌群檢出情況比較[n（%）]

3 結(jié)論與討論

當(dāng)前，居民的飲用水主要來源是地表水、淡水湖泊、泉眼、地下水等，通常水源有大量動植物繁衍，加上水產(chǎn)養(yǎng)殖、各類垃圾排泄物的影響，水的質(zhì)量難以保證[2]。生活飲用水質(zhì)量會直接影響居民的生活及其身體健康，長期飲用微生物超標(biāo)的飲用水，容易發(fā)生介水傳染病，隨著水污染越來越嚴重，居民飲用水的安全系數(shù)不斷降低[3]。目前，為使水質(zhì)符合生活飲用水質(zhì)量相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，一般都會對水進行常規(guī)過濾、消毒等處理，但水質(zhì)不合格情況仍時有發(fā)生，需要進行監(jiān)測[4]。

多管發(fā)酵法、濾膜法檢驗是常用的生活飲用水檢驗方法，均不需要昂貴的設(shè)備，人員經(jīng)過基本的技術(shù)培訓(xùn)便可以操作，易于在基層中推廣普及。其中多管發(fā)酵法是將待檢測水樣稀釋后，分別接種到培養(yǎng)液中培養(yǎng)，再通過觀察、計數(shù)細菌生長情況判斷水質(zhì)，其優(yōu)勢是不受濁度的影響，但檢測操作煩瑣、耗費時間長[5]。濾膜法檢驗是將待測水樣注入已滅菌的微孔濾膜上，抽濾使微生物被截留在濾膜上，再進行培養(yǎng)、鑒定，該方法操作簡單、檢查快速，可以去除樣品中其他雜質(zhì)的干擾[6]。本研究結(jié)果顯示，多管發(fā)酵法、濾膜法檢驗均可以檢驗出飲用水中的大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、雜菌，其中多管發(fā)酵法對枯水期、豐水期、出廠水、末梢水的大腸菌群總檢出率均高于濾膜法檢驗（P＜0.05）。因此，在生活飲用水豐水期、枯水期、出廠水、末梢水的監(jiān)測中，使用多管發(fā)酵法檢驗對大腸菌群、雜菌等微生物的檢出率更高、更加準(zhǔn)確，可作為優(yōu)先選擇的水監(jiān)測方法。