人參葉葡萄籽膠囊抗氧化活性研究

姜波，李云濤，郭建敏，任瑞濤，曲悅

哈爾濱怡康藥業(yè)有限公司（哈爾濱 150000）

衰老是生命過程中正常的生理現(xiàn)象，國內(nèi)外學(xué)者從細(xì)胞分子水平探索生物衰老機(jī)制，提出自由基的衰老學(xué)說[1-3]，已發(fā)現(xiàn)有100多種疾病與自由基脂質(zhì)過氧化損傷有關(guān)，如動脈粥樣硬化、心血管疾病、糖尿病、白內(nèi)障等常見老年病[4-5]。過量的自由基是引起體內(nèi)細(xì)胞、組織、器官的損傷，也是使機(jī)體生銹、導(dǎo)致衰老和疾病的根源[6-7]。利用外來抗氧化物的補(bǔ)充，幫助人體降低過多的自由基，免除不安全的自由基毒素對細(xì)胞、器官的破壞，預(yù)防衰老及消除疾病，成為現(xiàn)代社會的趨勢和時尚。

中醫(yī)對人體衰老的認(rèn)識源遠(yuǎn)流長，其中腎虛致衰之說為大多數(shù)學(xué)者公認(rèn)，腎虛致衰是腎元之陽氣和腎藏之精氣虧損，虛少，五臟氣血津液生化無源導(dǎo)致的諸多衰老病態(tài)和衰老過程[8-9]。

人參葉葡萄籽膠囊是哈爾濱怡康藥業(yè)生產(chǎn)的一款保健食品，以我國傳統(tǒng)中醫(yī)理論為組方指導(dǎo)，其中人參葉提取物具大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺之功，大豆提取物可補(bǔ)充人體腎經(jīng)循行的腰胯、下肢等部位的氣血不足，并能引人參葉功能下行，葡萄籽提取物可通透經(jīng)絡(luò)，生發(fā)人體生命潛能，改善人體疲勞、乏力、虛火燒爍等，再配以鮭魚籽補(bǔ)充人體陽氣運(yùn)行必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。此次試驗(yàn)利用動物試驗(yàn)對人參葉葡萄籽膠囊的抗氧化功效進(jìn)行驗(yàn)證，考證中醫(yī)原理組方的有效性及安全性。

1 材料與方法

1.1 樣品

人參葉葡萄籽膠囊（生產(chǎn)批號20210301，哈爾濱怡康藥業(yè)有限公司）。

1.2 試驗(yàn)動物

選用中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗(yàn)動物研究所繁殖的昆明種健康清潔級10月齡老齡雌性小鼠40只，按血清丙二醛水平隨機(jī)分成4組。

1.3 劑量

試驗(yàn)設(shè)人體推薦量的5，10和30倍為低、中和高劑量組。受試物用純化水配制。每日1次經(jīng)口給予，連續(xù)灌胃55 d后測各項指標(biāo)。同時設(shè)空白對照組。

1.4 儀器與試劑

755分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；ALC-110電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；RF-5310PC型熒光分光光度計（日本島津公司）；TG16臺式離心機(jī)（長沙英泰儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）；SOD試劑盒；MDA試劑盒；GSH-Px試劑盒；氯仿、甲醇等，均為分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 心肌脂褐質(zhì)的含量測定

取心肌，稱重。加入氯仿甲醇混合溶液，用勻漿器在45 ℃水浴中勻化制成勻漿。加入蒸餾水，離心后小心吸去水層，將下層氯仿甲醇溶液取出，向其中加入0.2 mL甲醇振蕩混勻，使之清澈透明，置紫外燈下照射30 s，測定熒光強(qiáng)度。按式（1）計算心肌脂褐質(zhì)含量（μg/g組織），若受試物組心肌脂褐質(zhì)含量明顯低于空白對照組，且有顯著性差異（P＜0.05），可判定該受試物有降低心肌脂褐質(zhì)含量的作用。

1.5.2 抗氧化酶活力測定

1.5.2.1 血清超氧化物歧化酶（SOD）活力測定

由小鼠眼內(nèi)眥靜脈叢取血0.5 mL，按3 000 r/min離心10 min后按表1操作。SOD活力（U/mL）按式（2）計算。

表1 血清超氧化物歧化酶（SOD）活力測定中試劑用量

1.5.2.2 全血中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力測定

由小鼠眼內(nèi)眥靜脈叢取血10 μL，加蒸餾水至1 mL，配成1∶99（V/V）的溶血液后按表2及表3操作。GSH-Px活力（U/mL）按式（3）計算

表2 酶促反應(yīng)中試劑用量

表3 顯色反應(yīng)中試劑用量

GSH-Px活力單位（U/mL全血）=[lg（A非酶管-A空白管）-lg（A樣品管-A空白管）]/（3 min×0.004 mL） （3）

1.5.3 數(shù)據(jù)處理

用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠體重的影響

由表4可見，老齡雌性小鼠給予人參葉葡萄籽膠囊前初始體重與給藥55 d后體重在各劑量組與空白對照組間相比較，無顯著性差異（P＞0.05），即人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠體重?zé)o不良影響。

表4 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠體重的影響（±SD）

表4 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠體重的影響（±SD）

組別動物數(shù)/只初始體重試驗(yàn)后體重體重/gP值體重/gP值空白對照組1046.8±1.447.4±1.6 0.1 g/(kg·Bw) 1046.3±1.3 0.419 47.3±1.4 0.837 0.2 g/(kg·Bw) 1047.0±1.0 0.776 47.6±1.6 0.847 0.6 g/(kg·Bw) 1047.0±1.1 0.734 47.5±1.5 0.932

2.2 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠心肌脂褐質(zhì)的影響

由表5可見，經(jīng)口給予老齡雌性小鼠人參葉葡萄籽膠囊55 d后，其心肌脂褐質(zhì)在0.2 g/（kg·Bw）組、0.6 g/（kg·Bw）組與空白對照組相比較，有顯著性差異（P＜0.05），即人參葉葡萄籽膠囊在0.2 g/（kg·Bw）組和0.6 g/（kg·Bw）組均能降低老齡雌性小鼠心肌脂褐質(zhì)含量。

表5 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠心肌脂褐質(zhì)的影響（±SD）

表5 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠心肌脂褐質(zhì)的影響（±SD）

組別動物數(shù)/只心肌脂褐素/(μg·g-1) P值空白對照組100.64±0.04 0.1 g/(kg·Bw) 100.61±0.030.105 0.2 g/(kg·Bw) 100.60±0.04*0.046 0.6 g/(kg·Bw) 100.59±0.04*0.029注: *代表與空白對照組相比較有顯著性差異。

2.3 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠血清SOD活力的影響

由表6可見，經(jīng)口給予老齡雌性小鼠人參葉葡萄籽膠囊55 d后，各劑量組血清SOD活力與空白對照組相比較，無顯著性差異（P＞0.05），即人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠的血清SOD活力無影響。

表6 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠血清SOD活力的影響（±SD）

組別動物數(shù)/只 血清SOD活力/(U·mL-1) P值空白對照組10274.0±19.1 0.1 g/(kg·Bw) 10278.6±23.90.640 0.2 g/(kg·Bw) 10277.1±19.50.724 0.6 g/(kg·Bw) 10279.0±16.00.534

2.4 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠全血中谷胱甘肽過氧化物酶活力的影響

由表7可見，經(jīng)口給予老齡雌性小鼠人參葉葡萄籽膠囊55 d后，其全血中谷胱甘肽過氧化物酶活力在0.2 g/（kg·Bw）組、0.6 g/（kg·Bw）組與空白對照組相比較，有顯著性差異（P＜0.05），即人參葉葡萄籽膠囊在0.2 g/（kg·Bw）組和0.6 g/（kg·Bw）組均能提高老齡雌性小鼠全血中谷胱甘肽過氧化物酶活力。

表7 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠全血中谷胱甘肽過氧化物酶活力的影響（±SD）

表7 人參葉葡萄籽膠囊對老齡雌性小鼠全血中谷胱甘肽過氧化物酶活力的影響（±SD）

組別動物數(shù)/只 GSH-PX/(U·mL-1全血) P值空白對照組1050.3±1.1 0.1 g/(kg·Bw) 1051.2±2.40.070 0.2 g/(kg·Bw) 1053.2±2.8*0.007 0.6 g/(kg·Bw) 1054.5±4.3*0.008注: *代表與空白對照組相比較有顯著性差異。

3 結(jié)論

綜上，經(jīng)口給予老齡雌性小鼠人參葉葡萄籽膠囊55 d后，與空白對照組相比較，產(chǎn)品可在0.2 g/（kg·Bw）和0.6 g/（kg·Bw）組降低心肌脂褐質(zhì)含量，提高全血中谷胱甘肽過氧化物酶活力，且對小鼠體重增長無不良影響。人參葉葡萄籽膠囊以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)組方，研究驗(yàn)證了人參葉葡萄籽膠囊的抗氧化功能，并為類似產(chǎn)品的開發(fā)提供參考依據(jù)。