五根湯口服液穩(wěn)定性試驗研究

劉光斌 張宇博 王艷 趙麗萍 張玉葉 毛和平

摘要：目的：對五根湯口服液的加速穩(wěn)定性及長期穩(wěn)定性進(jìn)行考察。方法：根據(jù)加速穩(wěn)定性及長期穩(wěn)定性實驗方法，檢測五根湯口服液的性狀、PH 值、相對密度。采用 TLC 法對其主要成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根進(jìn)行鑒別。40℃±2℃，相對濕度為75%±5%的條件下放置6個月，溫度為25℃±2℃，相對濕度為60%±5%的條件下放置24個月期內(nèi)外觀性狀，測定、PH 值、相對密度、微生物及其主要活性成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根的變化；采用高效液相色譜法檢測口服液中葛根素的含量變化。結(jié)果：密封貯存24個月期內(nèi)五根湯口服液的外觀性狀、PH 值、相對密度、微生物等變化均在合格范圍內(nèi)， 其主要活性成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根穩(wěn)定，口服液中葛根素的含量幾乎無變化。結(jié)論：五根湯口服液直接接觸藥品的包裝材料能夠保證制劑在有效期內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞：五根湯口服液;穩(wěn)定性; TLC；HPLC

中圖分類號：R286.0??????????????????????????? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

五根湯口服液是我院根據(jù)內(nèi)蒙古老中醫(yī)李鳳林先生治療小兒發(fā)燒的處方優(yōu)化后通過一定工藝提取濃縮制備而成的院內(nèi)中藥制劑。處方由葛根，板藍(lán)根，蘆根，山豆根，白茅根等八味藥材組成，具有解表清里，解肌和營，調(diào)和氣血，清熱解毒，并有抗病毒、抑制細(xì)菌和消炎作用[1-3]。主要治療傷風(fēng)感冒、流行性感冒、扁桃體炎、猩紅熱等疾病所導(dǎo)致的發(fā)熱，還可治療不明原因發(fā)熱等癥。為了保證藥品在貯藏及使用期間的質(zhì)量控制，根據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)制劑注冊管理辦法》中關(guān)于申報資料的相關(guān)要求，以及《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性指導(dǎo)原則》（《中國藥典》2020年版四部通則9001）中口服液穩(wěn)定性考察的有關(guān)內(nèi)容，對五根湯口服液的初步穩(wěn)定性進(jìn)行了試驗研究。內(nèi)容包括制劑外觀性狀、鑒別、檢查、相對密度、pH 值、含量測定、衛(wèi)生學(xué)檢查等指標(biāo)、通過加速試驗6個月和長期試驗24個月，為確定五根湯口服液的有效期及儲存條件提供依據(jù)。

1檢測與方法

1.1儀器

LC-2010AHT 型高效液相色譜儀（日本島津），島津 LC solution 工作站；AUW220D電子分析天平（日本島津）；TU-1221紫外-可見分光光度儀（北京普析通用）；數(shù)碼超聲波清洗機（廣東固特超聲股份有限公司）； BHS-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海馳唐電子有限公司）； HX-TLC-3H型薄層顯色加熱板（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；ZF-20A型暗箱四用紫外分析儀[驥輝分析儀器（上海）有限公司]；SLD-I 型薄層顯色噴霧泵（天津市思利達(dá)科技有限公司）；PHS-3E 型 pH 計（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；雙槽展開缸（10 cm×10 cm，上海信宜儀器廠）；LRH-80F型細(xì)菌培養(yǎng)箱（上海量壹科學(xué)儀器有限公司）；MJX-80S 霉菌培養(yǎng)箱（上海旌派儀器有限公司）；硅膠G 薄層板（青島海洋化工有限公司）。

1.2試劑與樣品

葛根素對照品（中國食品藥品檢定院，110752-201816）；葛根對照藥材（中國食品藥品檢定研究院121551-201404）；紅花對照藥材（中國食品藥品檢定研究院120907-201412）。板藍(lán)根對照藥材（中國食品藥品檢定研究院121177-201608）。苦參堿對照品（中國食品藥品檢定研究院110805-200508）。大黃對照藥材（中國食品藥品檢定研究院120984-201202）。五根湯口服液中試樣品三批（20190225、2020190226、20190228）為酒鋼醫(yī)院制備；中試樣品試制規(guī)模均為10個處方量的生產(chǎn)規(guī)模，批量符合穩(wěn)定性試驗的要求，樣品具有代表性，包裝形式與規(guī)格：采用10ml 端肩管制口服液瓶包裝，10mL/瓶×6支/盒。樣品包裝形式與擬上市包裝一致。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3藥材

試驗用原藥材及輔料來源見表1所列。

表1試驗用原藥材及輔料來源

按照中華人民共和國藥典2020版一部標(biāo)準(zhǔn)對表1中所有中藥飲片及輔料進(jìn)行檢驗，結(jié)果均合格后方可制備制劑。

1.4觀察指標(biāo)[4-10]

1.4.1? 考察項目

參照《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則》（《中國藥典》2020年版四部通則9001）對口服液穩(wěn)定性重點考察項目要求，結(jié)合五根湯口服液穩(wěn)定性的要求，重點考察五根湯口服液的外觀性狀、pH 值、鑒別項、微生物限度、相對密度以及主要成分的含量測定。

1.4.2 定性與定量

（1）性狀：棕紅色至棕褐色的液體；氣微香；味甜，微苦。（2）定性測定：用 TLC 法對主要活性成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根的鑒別，在TLC 譜圖中，樣品溶

液和對照藥材、對照品溶液在相同位置顯相同顏色的斑點。（3）定量測定：采用高效液相色譜法測定口服液中葛根素的含量，本品每1mL含葛根以葛根素計，不得少于0.80（mg·mL-1）。（4）微生物限度：細(xì)菌小于100個/g；霉菌小于10個/g；不得檢出大腸桿菌及活螨。（5）相對密度不小于1.00；pH 值要求在4～6。

1.4.3 穩(wěn)定性試驗

依據(jù)《中國藥典》2020年版四部通則0181口服液劑項下：“除另有規(guī)定外，口服液應(yīng)密封，置陰涼處貯存，口服液應(yīng)澄清。在貯存期間不得有發(fā)霉、酸敗、異物、變色、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)現(xiàn)象，允許有少量搖支即易散的沉淀”。基于此規(guī)定，對五根湯口服液進(jìn)行以下的穩(wěn)定性試驗項目。

（1）高溫試驗

試驗方法：分別隨機抽取本品三個批號各20支，除去外包裝，置60℃溫度下留樣儲存10 d 。在第0 d、第5 d 和第10 d 分別取樣，按五根湯口服液穩(wěn)定性考察項目進(jìn)行觀察與檢測。所得結(jié)果與第0 d 的考察項目結(jié)果進(jìn)行比較，考察五根湯口服液樣品在高溫試驗條件下的穩(wěn)定性。外觀性狀、pH 值、鑒別項、微生物限度、相對密度以及主要成分的含量測定結(jié)果見表2所列。

（2）高溫試驗小結(jié)

五根湯口服液在高溫60℃條件下留樣考察10 d，與第0 d 的觀察及試驗結(jié)果相比較，樣品外觀性狀沒有明顯變化，未發(fā)現(xiàn)口服液出現(xiàn)發(fā)霉、酸敗、異物、變色、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)現(xiàn)象，各項試驗考察指標(biāo)基本無變化，樣品穩(wěn)定性較好，說明五根湯口服液在60℃條件下是比較穩(wěn)定的。

1.4.4 強光照射試驗

（1）試驗方法：分別隨機抽取本品三個批號各20支，除去內(nèi)包裝，置強光照射試驗箱中，于照度為4500Lx±500Lx （25℃）的條件下留樣放置10 d，在第0 d、第5 d 和第10 d 分別取樣，按五根湯口服液穩(wěn)定性考察項目進(jìn)行觀察與檢測。所得結(jié)果與第0 d 的考察項目結(jié)果進(jìn)行比較，考察五根湯口服液樣品在強光照射試驗條件下的穩(wěn)定性。外觀性狀、pH 值、鑒別項、微生物限度、相對密度以及主要成分的含量測定結(jié)果見表3所列。

（2）強光試驗小結(jié)：五根湯口服液在照度為4500 Lx±500 Lx強光條件下留樣考察10 d，與第0 d 的觀察及試驗結(jié)果相比較，樣品的外觀性狀沒有發(fā)生明顯變化，未發(fā)現(xiàn)口服液出現(xiàn)發(fā)霉、酸敗、異物、變色、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)現(xiàn)象，各項試驗考察指標(biāo)基本無變化，樣品穩(wěn)定性較好，說明五根湯口服液在強光試驗條件下是比較穩(wěn)定的。

1.4.5 加速試驗

（1）試驗方法：將本品三批（批號：20190225、

2020190226、20190228）模擬市售包裝，在溫度40℃±2℃，相對濕度75%±5%條件下留樣放置6個月，試驗期間分別在第1個月、2個月、3個月、6個月末分別取樣一次，按五根湯口服液穩(wěn)定性考察項目進(jìn)行觀察與檢測。所得結(jié)果與第0月的考察項目結(jié)果進(jìn)行比較，考察五根湯口服液樣品在加速試驗條件下的穩(wěn)定性。外觀性狀、pH 值、鑒別項、微生物限（2）加速試驗小結(jié)：本品的加速試驗結(jié)果表明，五根湯口服液在模擬市售包裝保護(hù)的情況下，在加速試驗（40℃±2℃、RH 75%±5%）條件下放置6個月，與0月數(shù)據(jù)比較，樣品的各項穩(wěn)定性考察項目無明顯變化。加速試驗是通過加快模擬市售包裝中藥品的化學(xué)或物理變化速度來考察藥品穩(wěn)定性。試驗結(jié)果表明，五根湯口服液在加速試驗條件下穩(wěn)定性良好。

1.4.6 長期試驗

（1）試驗方法將本品三批（批號：20190225、

2020190226、20190228）模擬上市包裝樣品模擬市售包裝，在溫度25℃±2℃，相對濕度60%±10%條件下進(jìn)行試驗，取樣時間點在第一年3個月末、6個月末、9個月末、12個月末分別取樣一次，第二年6個月末、12個月末分別取樣一次。按五根湯口服液穩(wěn)定性重點考察項目（外觀性狀、pH 值、薄層色譜鑒別項、微生物限度、相對密度和主要成分含量測定）檢測。結(jié)果與0月的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，觀察五根湯口服液樣品在長期試驗條件下的穩(wěn)定性，試驗結(jié)果見表5所列。

（2）長期試驗小結(jié)在長期實驗（25℃±2℃，相對濕度60%±10%）條件下放置24個月，五根湯口服液3批樣品的觀性狀、pH 值、相對密度、薄層色譜鑒別、微生物限度和含量測定等各項考察指標(biāo)沒有顯著性變化，說明本品在溫度25℃±2℃，相對濕度60%±10%條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定。

3討論

根據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)制劑注冊管理辦法》對醫(yī)院中藥制劑申報資料的要求，以及《原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則》（《中國藥典》2020年版四部通則9001）中制劑穩(wěn)定性考察的有關(guān)內(nèi)容，對五根湯口服液的初步穩(wěn)定性進(jìn)行了試驗研究。本品經(jīng)高溫試驗條件下（60℃）10 d、強光試驗（4500 Lx±500 Lx）條件下照射10 d，各項觀察指標(biāo)基本穩(wěn)定。加速試驗（40℃±2℃、RH 75%±5%）6個月的考察結(jié)果表明，五根湯口服液3批樣品在模擬上市包裝條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定，表明五根湯口服液在設(shè)定的試驗條件下穩(wěn)定性良好。長期試驗（25℃±2℃，相對濕度60%±10%）24個月的考察結(jié)果表明五根湯口服液3批樣品在模擬上市包裝條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定，說明五根湯口服液直接接觸藥品的包裝材料能夠保證制劑在有效期內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定，相容性好，對制劑質(zhì)量穩(wěn)定性無顯著影響。根據(jù)穩(wěn)定性試驗結(jié)果，本品的有效期初步確定為24個月。貯存條件確定為：密封保存。

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