不同分子分型乳腺癌血清CYFRA21-1、HCY和CA15-3的表達差異及與術后復發、轉移的關系*

張 維,龍松權,唐瑞駿

廣西壯族自治區桂林市中醫醫院:1.檢驗科;2.病理科,廣西桂林 541002

乳腺癌是全球最常見的癌癥之一,GLOBOCAN 2020年最新統計數據顯示,全球范圍內約有230萬乳腺癌新發病例,占新發癌癥病例的11.7%,乳腺癌已經超過肺癌,成為全球發病率最高的癌癥[1]。乳腺癌是一種具有高度異質性的腫瘤,根據激素受體表達情況的不同主要分為Luminal A型、Luminal B型、Her-2過表達型和Basal-like型4種分子亞型。有研究發現,不同分子分型乳腺癌患者的臨床病理特征及預后存在差異[2]。目前,臨床上乳腺癌治療選擇和預后評估主要基于不同的分子亞型,也推薦應用腫瘤標志物對乳腺癌的預后進行判斷。然而,不同分子分型的乳腺癌患者血清腫瘤標志物的表達水平是否存在差異仍不清楚。因此,本研究探討細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、同型半胱氨酸(HCY)和糖類抗原15-3(CA15-3)在不同分子亞型乳腺癌患者中的表達情況以及與術后復發、轉移的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年3月至2021年10月就診于本院的186例乳腺癌患者為研究對象,均為女性。186例患者年齡30～68歲,平均(50.98±8.64)歲;浸潤性導管癌149例,導管內原位癌31例,浸潤性小葉癌6例;TNM分期Ⅰ期31例,Ⅱ期77例,Ⅲ期73例,Ⅳ期5例。納入標準:(1)患者均接受乳腺癌根治術或改良根治術,經病理組織學檢查確診為乳腺癌;(2)術前未發生轉移,無其他惡性腫瘤病史;(3)所有患者均定期在本院復查B超、CT、MRI和乳腺X線片檢查等術后需查項目,復發、轉移患者均有明確的影像學診斷與病理診斷依據,且有完整的病歷資料。排除標準:(1)非原發性乳腺癌;(2)合并其他惡性腫瘤;(3)伴有其他嚴重內科疾病。本研究經本院醫學倫理委員會審核批準。所有患者均知情同意。

1.2儀器與試劑 Roche Cobas E602全自動電化學發光分析儀及配套CYFRA21-1檢測試劑盒(德國Roche公司);日立7600全自動生化分析儀及HCY檢測試劑盒(北京九強生物技術股份有限公司);鄭州安圖Autolumo 2000 Plus全自動化學發光分析儀及配套CA15-3檢測試劑盒;HE染色液(珠海貝索生物科技有限公司);免疫組化試劑盒(福州邁新生物技術開發有限公司)。

1.3方法

1.3.1血液標本采集檢測 所有研究對象均清晨空腹抽取靜脈血約5 mL置于無抗凝劑的離心管中,室溫靜置30 min后,4 000 r/min離心5 min,2 h內完成檢測;如不能及時檢測則分離血清置于-80 ℃冰箱保存備用。采用Roche Cobas E602全自動電化學發光分析儀檢測CYFRA21-1,采用日立7600全自動生化分析儀檢測HCY水平,采用鄭州安圖Autolumo 2000 Plus全自動化學發光分析儀檢測CA15-3水平,具體操作嚴格按照操作規程進行。正常參考值范圍:CYFRA21-1<3.3 ng/mL;HCY<15.00 μmol/L;CA15-3<25.0 U/mL。

1.3.2免疫組化染色 患者術中取組織標本,標本經中性甲醛固定,36 h內取材,石蠟包埋標本并制成2～4 μm厚的切片待用。組織學分級采用HE染色法,取組織石蠟切片常規HE染色。按照免疫組化試劑盒說明書進行操作,中性樹膠封固,ER、PR陽性物質位于細胞核內,Her-2陽性物質位于細胞膜呈棕黃色顆粒,判定標準:ER、PR<1%為陰性,≥1%為陽性;Her-2-～+為陰性,+++為陽性,++則進行熒光原位雜交法檢測驗證;Ki-67≥20%為高表達,<20%為低表達。

1.3.3分子分型及隨訪 參照《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范:2021年版》[3],將確立的研究對象術后病理標本作免疫組化染色,根據激素受體表達情況分型。根據《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范:2021年版》[3]建議,所有乳腺癌患者均進行定期隨訪,術后或結束化療后2年內每3個月隨訪一次,隨訪至2022年8月。

2 結 果

2.1不同分子分型患者檢測指標比較 根據激素受體表達情況,186例患者中Luminal A型65例(34.95%),Luminal B型70例(37.63%),Her-2過表達型26例(13.98%),Basal-like型25例(13.44%)。不同分子分型乳腺癌患者CYFRA21-1和HCY水平比較,差異無統計學意義(P>0.05),而CA15-3水平比較,差異有統計學意義(P<0.05),其中Her-2過表達型患者CA15-3水平明顯高于其他3種分型,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同分子分型乳腺癌患者各檢測指標水平比較或M(P25,P75)]

2.2不同分子分型乳腺癌患者的臨床病理參數及復發、轉移情況 所有患者術后均進行化療,確定無復發、轉移145例,有復發、轉移41例。不同分子分型患者間年齡、腫瘤最大徑、有無淋巴結轉移及Ki-67表達分布比較,差異均無統計學意義(P>0.05),見表2。4種分子分型的復發、轉移率比較,差異有統計學意義(P<0.05),其中Her-2過表達型復發、轉移率最高(38.46%),Luminal A型與Her-2過表達型的復發、轉移率差異有統計學意義(P<0.05),見表3。

表2 不同分子分型乳腺癌患者的臨床病理參數(n)

表3 各分子分型患者復發、轉移率比較

2.3術后復發、轉移影響因素分析 隨訪期間,186例乳腺癌患者中無病生存率為77.96%。按是否復發、轉移分組比較各項指標,結果顯示,復發、轉移組更容易發生淋巴結轉移、CA15-3水平更高,差異均有統計學意義(P<0.05),見表4。以預后狀態(復發、轉移=1,未復發、轉移=0)為因變量,以患者年齡(≥50歲=1,<50歲=0)、腫瘤最大徑(≥2.0 cm=1,<2.0 cm=0)、淋巴結轉移(是=1,否=0)、Ki-67表達(≥20%=1,<20%=0)、CYFRA21-1(≥3.3 ng/mL=1,<3.3 ng/mL=0)、CA15-3(≥25.0 U/mL=1,<25.0 U/mL=0)為協變量,進行Cox回歸分析。結果顯示,淋巴結轉移和CA15-3≥25.0 U/mL是乳腺癌患者術后復發、轉移的獨立危險因素(P<0.05),見表5。

表4 復發、轉移組和未復發、轉移組各項指標比較或n或M(P25,P75)]

表5 乳腺癌患者復發、轉移的Cox回歸分析

3 討 論

基于激素受體表達情況的不同,乳腺癌存在不同的分子亞型,不同亞型之間有不同的臨床表現和病理特征[4-5]。乳腺癌分子分型的提出使乳腺癌的個體化治療實現了由宏觀到微觀的轉變,使乳腺癌治療進入精準治療時代[6]。本研究對納入的186例乳腺癌患者進行分子分型,結果顯示管腔型乳腺癌比例高于其他亞型乳腺癌,其中Luminal A型65例(34.95%)、Luminal B型70例(37.63%)、Her-2過表達型26例(13.98%)、Basal-like型25例(13.44%),與劉鐘芬等[7]報道的結果相接近。CA15-3是乳腺上皮細胞分泌的一種糖蛋白抗原,是目前公認的對乳腺癌有較高特異度的腫瘤標志物[8]。本研究對乳腺癌4種分子分型間腫瘤標志物的分析結果顯示,Her-2過表達型乳腺癌患者CA15-3水平明顯高于其他分型,提示臨床乳腺癌患者血清高水平CA15-3可能為Her-2過表達型的重要標志物,術前檢測CA15-3有助于預測乳腺癌的分子分型和預后,為后期精準個體化治療提供依據。

本研究中對乳腺癌患者的臨床病理參數分析顯示,年齡、腫瘤最大徑、淋巴結轉移及Ki-67表達在乳腺癌不同分子分型間的分布差異無統計學意義(P>0.05),與成祥君等[9]報道的結果一致。然而,亦有學者研究報道不同分子分型乳腺癌患者絕經狀態、腫瘤最大徑及組織學分級比較,差異有統計學意義(P<0.05)[10]。分析其原因可能是本次研究為單中心回顧性分析,入組病例數較少,混雜因素較多,從而造成各研究之間存在差異,需要后期聯合多中心、大樣本量進一步研究。4種分子分型的復發、轉移率比較中,Her-2過表達型復發、轉移率最高(38.46%),表明Her-2陽性乳腺癌患者侵襲性較高,更容易發生淋巴結轉移,預后較差。因此,臨床上對于Her-2過表達型乳腺癌患者應更加重視,加強隨訪、提高復查頻率。通過多因素Cox回歸分析發現,乳腺癌患者預后與淋巴結轉移情況及血清CA15-3水平密切相關。乳腺癌患者血清CA15-3水平越高,越容易發生復發、轉移,預后越差[11]。

總之,不同分子分型的乳腺癌具有異質性,患者血清腫瘤標志物表達不同;分子分型結合血清腫瘤標志物以及相關危險因素分析可為乳腺癌精準個體化治療提供臨床依據。