膀胱尿路上皮癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2表達水平及其預測術后復發的價值

張榮順，王慶偉，朱文

（1.河南省舞鋼市人民醫院 外一科，河南 平頂山 462500；2.鄭大一附院 泌尿外科，河南 鄭州 450052；3.鄭大一附院 泌三科，河南 鄭州 450052）

膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma,BUC）為臨床常見的一種惡性腫瘤，存在高復發率與多發性特點［1］。膀胱癌于實體惡性腫瘤中發病率處于第4 位，多見于男性，男女比例約為4∶1［2］。目前膀胱癌確切發病和復發分子機制尚未闡述明確，目前認為，其和患者整個膀胱黏膜的上皮基因組穩定性不佳有關［3］。生存素（survivin）為近幾年研究發現的一種調控腫瘤細胞信息通路，這一信號通路參與多個惡性腫瘤的發生與進展病理過程［4］。人類錯配修復基因2（human mismatch repair gene2,hMSH2）于生物進化中相對保守，可降低自發突變、修復DNA 堿基的錯配功能以及提高DNA 的復制穩定性，故hMSH2 基因多態性可影響腫瘤發生易感性，同時對于腫瘤的演化與進展存在預測價值［5-6］。本研究探討survivin、hMSH2、細胞周期蛋白D1（Cyclin D1）對于BUC患者術后復發的預測價值，以期為臨床早期方式予以數據支持，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取河南省舞鋼市人民醫院2020 年2 月至2022 年1 月收治的80 例接受手術治療的BUC 患者為研究對象，均簽署知情同意書。其中男43 例，女37 例；年齡56～74 歲，平均（65.28±4.35）歲。①納入標準：經過病理學診斷為BUC；手術前無放化療史；有完整臨床病例資料；研究方案經過學術委員會、倫理委員會審核批準。②排除標準：其他病理種類膀胱癌；伴有其他惡性腫瘤；無法完成術后隨訪；中途自愿退出；合并認知障礙或者精神障礙。

80 例接受手術治療的BUC 患者，均于術中留取癌組織（BUC 組）以及距離癌緣2.5 cm 的癌旁組織（對照組）。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色法 入組腫瘤組織石蠟標本制作為4 μm 連續切片，將切片脫蠟、水化，于3%濃度過氧化氫-微波-甲醇內于室溫下持續浸泡10 min，滅活過氧化氫酶活性；利用微波抗原持續修復20 min，pH 值為7.6，修復液為EDTA抗原修復液；經室溫冷卻之后滴加一抗，濕盒4℃冰箱內孵育一抗過夜；第2 d 經TBS 洗3 次標本，滴加生物素標記二抗，于室溫下孵育10 min；滴加辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素于室溫下孵育10 min；DAB 顯色2 min，后蘇木精予以復染2 min，予以脫水、透明與封片，于顯微鏡下進行觀察，為保障染色質量，每張切片用已知陽性組織作陽性對照（survivin、Cyclin D1、hMSH2），用PBS 代替一抗作為陰性對照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結果判定標準 由2 名病理科高年資醫生經盲法閱片，當結果不一致時經過協商判定結果，最終結果是以細胞核或者胞質呈棕黃或褐色為陽性，每張切片于高倍鏡下計數細胞，按照染色強度進行打分，即0 分無色、1 分淺黃色、2 分棕黃色、3 分棕褐色，染色強度需要和背景著色對比；在按照陽性細胞占百分比予以打分，即0 分陰性、1 分陽性細胞≤10%、2 分陽性細胞11%～50%、3 分陽性細胞51%～75%、4 分陽性細胞＞75%，染色強度和陽性細胞百分乘積≥2 分歸免疫反應陽性（+）。

1.3 觀察指標

①比較兩組survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平。②隨訪1 年，統計復發狀況，比較復發患者（22 例）和未復發患者（58 例）癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平。③比較不同病理學參數患者癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平。④分析癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平與病理學參數相關性。⑤分析癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平聯合預測BUC 患者術后復發價值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料以百分率（%）表示，行χ2檢驗；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic curve,ROC）曲線，獲取曲線下面積（area under curve,AUC）、置信區間、敏感度、特異度及cut-off 值；相關性采用Spearman分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組survivin、Cyclin D1、hMSH2 陽性表達率比較

與對照組相比，BUC 組survivin、Cyclin D1 陽性表達率較高，hMSH2 陽性表達率較低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組survivin、Cyclin D1、hMSH2 陽性表達率［n(%)］

2.2 復發和未復發患者癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平比較

與未復發患者相比，復發患者癌組織survivin、Cyclin D1 表達水平明顯升高，hMSH2 表達水平明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 復發和未復發患者癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達情況 ［n(%)］

2.3 不同病理學參數癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平比較

膀胱癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平與年齡、性別、原發腫瘤個數無關，差異無統計學意義（P＞0.05）。癌組織survivin、Cyclin D1表達水平比較：G2/3級高于G1級，T2～T4期 高于Tis～T1期，有淋巴結轉移高于無淋巴結轉移，差異有統計學意義（P＜0.05）；癌組織hMSH2 表達水平比較：G2/3級低于G1級，T2～T4期低于Tis～T1期，有淋巴結轉移低于無淋巴結轉移，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同病理學參數癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達情況 ［n(%)］

2.4 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平與病理學參數相關性分析

癌組織survivin 表達水平與腫瘤分級、腫瘤分期、淋巴結轉移、復發呈正相關（P＜0.05）；癌組織Cyclin D1 表達水平與腫瘤分級、腫瘤分期、淋巴結轉移、復發呈正相關（P＜0.05）；癌組織hMSH2 表達水平與腫瘤分級、腫瘤分期、淋巴結轉移、復發呈負相關（P＜0.05）。見表4。

表4 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平與病理學參數相關性分析

2.5 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平聯合預測BUC 患者術后復發價值分析

以術后復發BUC 患者為陽性樣本，以術后未復發BUC 患者為陰性樣本繪制ROC 曲線，結果顯示，癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平聯合預測BUC 患者術后復發的AUC 為0.886，最佳診斷敏感度、特異度分別為81.82%、94.83%。見表5。

表5 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平聯合預測BUC 患者術后復發價值分析

3 討論

BUC 為常見泌尿系統的惡性腫瘤之一。2015年國內膀胱癌新發病例超出8 萬，超出3 萬患者由于膀胱癌死亡［7］。因膀胱癌存在多發性以及癌旁黏膜具有癌前病變等特點，治療之后復發風險仍可達30%～50%，危及患者生命健康，加劇患者家庭的生活壓力［8］。因此早期預測BUC 患者術后復發風險，可為臨床早期制定防治措施以及改善預后具有重要意義。

本研究結果表現，BUC 組hMSH2 陽性表達率明顯低于對照組，且復發患者癌組織hMSH2 陽性表達率明顯下降，且G2/3級、T2～T4期、有淋巴結轉移患者癌組織hMSH2 陽性表達率明顯低于G1級、Tis～T1期、無淋巴結轉移，說明hMSH2 參與BUC 的發生與進展，動態監測其水平變化，有助于臨床評估病情程度。研究表明，基因異常參與惡性腫瘤的發生與發展，而基因異常表現方式主要為基因突變以及異常轉錄［9］。hMSH2 于基因突變與異常轉錄中發揮極為重要作用，其為人類錯配修復基因內最早被發現的一種修復異常基因轉錄因子，功能為當基因產生異常時能及時修復，一旦修復功能產生缺陷可增加抑癌基因的突變率與遺傳的不穩定性，從而促進腫瘤演化與進展［10］。survivin 為凋亡抑制蛋白家族的一個重要成員，在人類胚胎發育組織和多個腫瘤細胞中呈特異性表達，于正常機體中僅在睪丸、胸腺以及分泌期子宮等多個組織內表達［11］。本研究結果表明，BUC組survivin 陽性表達率較高，復發患者癌組織survivin 表達水平明顯升高，且G2/3級、T2～T4期、有淋巴結轉移患者癌組織survivin 表達水平顯著高于G1級、Tis～T1期、無淋巴結轉移患者，提示survivin 參與BUC 的發生與進展，可作為臨床診斷的指標之一。survivin 過度表達于細胞惡性早期便可出現，其過度表達打破細胞增殖與凋亡之間平衡，致使細胞惡變與腫瘤發生［12］，此外，survivin能保護生長因子，進而誘導腫瘤組織新生血管形成，為腫瘤的生長與侵襲提供有利組織微環境［13］。Cyclin D1 屬于原癌基因之一，和細胞周期素依賴激酶（CDK4）相結合產生Cyclin D1/CDK4 復合物，激活CDK4，利用調節底物Rb 蛋白磷酸化，分泌轉錄因子E2F，加快細胞G1/S 期的轉換，增加細胞增殖［14］。本研究顯示，BUC 組癌組織Cyclin D1 陽性表達率較高，復發患者癌組織survivin 表達水平明顯升高，且G2/3級、T2～T4期、有淋巴結轉移患者癌組織survivin 表達水平顯著高于G1級、Tis～T1期、無淋巴結轉移患者，說明Cyclin D1 表達水平可反映BUC 患者病情程度，有助于制定更具有針對性的治療方案。

此外，本研究經ROC 曲線分析顯示，癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平聯合預測BUC患者術后復發的敏感度、特異度較高（P＜0.05），說明癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達水平可作為臨床預測術后復發風險的指標，其原因為三者分別從基因異常、細胞增殖等方面對病情程度、復發風險予以評估，發揮協同效果，故預測價值較高。

綜上所述，BUC 患者癌組織survivin、Cyclin D1 水平呈高表達、hMSH2 水平呈低表達，聯合預測術后復發風險的敏感性與特異性較高，故臨床可通過動態監測三者表達水平來完善治療方案。