血清Presepsin、GRP78水平在潰瘍性結腸炎診斷、病情嚴重程度評估中的價值*

張 峰,王瑞雪,朱 琳

濟南市中西醫結合醫院檢驗科,山東濟南 271199

潰瘍性結腸炎(UC)是一種復雜的炎癥性結腸疾病,其特征為遠端開始的黏膜炎癥,可向近端延伸至整個結腸[1]。目前,全球UC發病率和流行率持續增加,病因涉及環境、免疫系統、腸道微生物群和遺傳等因素[2],臨床表現為疲勞、帶血腹瀉、腹痛和大便失禁[3]。尋找UC疾病嚴重程度的預測指標對UC的治療具有重要意義。可溶性白細胞分化抗原14亞型(Presepsin)是CD14的可溶性N端片段,CD14是一種在先天免疫細胞表面表達的多功能糖蛋白[4]。有關文獻報道顯示,Presepsin高表達是老年重癥肺炎患者死亡的危險因素,且與病情嚴重程度呈正相關[5]。膿毒癥急診患者Presepsin表達水平較高,患者預后較差,Presepsin檢測對該疾病的診斷及預后評估有較高價值[6]。葡萄糖調節蛋白78(GRP78)是一種在內質網內表達的應激誘導分子伴侶,充當未折疊蛋白反應途徑的主要調節因子。GRP78在多發性骨髓瘤中高表達,是多發性骨髓瘤潛在的新型生物標志物和治療靶點[7]。在妊娠期糖尿病患者中GRP78呈高表達,GRP78在該疾病發生、發展過程中發揮重要作用[8]。然而,關于Presepsin和GRP78在UC患者血清中的水平及扮演的角色目前仍不清楚。基于此,本研究通過檢測UC患者及表觀健康的體檢者血清中Presepsin及GRP78的表達水平,分析其與UC患者病情嚴重程度的關系,并繪制受試者工作特征(ROC)曲線評價Presepsin、GRP78對UC的臨床診斷價值,以期為UC的臨床診斷和病情嚴重程度評估提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2019年3月至2021年3月于該院住院治療的100例UC患者納入研究作為研究組。納入標準:(1)符合UC的診斷標準[9];(2)患者本人及直系親屬了解本研究并簽署知情同意書;(3)首次確診并接受治療;(4)心、肝、腎功能正常。排除標準:(1)精神狀態異常,無法正常溝通交流;(2)合并惡性腫瘤者;(3)合并腸梗阻者;(4)臨床信息不完整;(5)妊娠或哺乳期女性;(6)存在感染性疾病;(7)存在自身免疫性疾病。采用Truelove-Witts評分標準[10],根據UC患者病情嚴重程度將研究組患者分為輕度組(32例)、中度組(38例)和重度組(30例)。另外,選取同期于該院體檢的90例表觀健康者作為對照組。收集并整理納入研究者年齡、性別、體重指數等資料。研究組:男51例、女49例,年齡24～60歲、平均(45.56±5.13)歲,體重指數(22.86±3.07)kg/m2。對照組:男48例、女42例,年齡20～68歲、平均(43.98±5.92)歲,體重指數(22.56±3.16)kg/m2。研究組與對照組年齡(t=0.744,P=0.458)、性別(χ2=0.103,P=0.748)、體重指數(t=0.663,P=0.508)比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。本研究經本院倫理委員會審批通過(審批號:2019-0216)。

1.2方法

1.2.1血清Presepsin、GRP78的檢測 研究組和對照組分別于入院后次日和體檢當日抽取清晨空腹靜脈血4 mL,室溫靜置10～20 min后,3 000 r/min,離心20 min,收集上清液待測。使用酶聯免疫吸附法檢測Presepsin及GRP78表達水平。Presepsin試劑盒(貨號:EKL60088)購自艾美捷科技有限公司,GRP78試劑盒(貨號:ml037942)購自上海酶聯生物科技有限公司,測定步驟均嚴格按照說明書進行,利用多功能酶標儀(賽默飛世爾科技有限公司)測定各標本在450 nm處的吸光度值,依據標準曲線計算血清Presepsin、GRP78水平。

1.2.2UC患者白細胞計數(WBC)、血小板計數(PLT)檢測 研究組和對照組分別于入院后次日和體檢當日抽取清晨空腹靜脈血3 mL,采用全自動血液細胞分析儀(上海聚慕醫療器械有限公司)檢測WBC、PLT。

2 結 果

2.1兩組血清Presepsin、GRP78水平比較 研究組血清Presepsin、GRP78水平均高于對照組(P<0.05),見表1。

表1 兩組血清Presepsin、GRP78水平比較

2.2UC患者血清Presepsin、GRP78水平與臨床資料的關系 分別以UC患者血清Presepsin、GRP78水平的平均值455.78 pg/mL、245.48 pg/mL為臨界值,分別將UC患者分為Presepsin高、低表達組和GRP78高、低表達組。Presepsin、GRP78表達水平與患者年齡、性別、體重指數、飲酒史無關(P>0.05),與PLT、WBC有關(P<0.05)。見表2、3。

表2 Presepsin表達水平與UC患者臨床資料的關系或n(%)或n/n]

表3 GRP78表達水平與UC患者臨床資料的關系或n(%)或n/n]

2.3不同病情嚴重程度的UC患者血清Presepsin、GRP78表達水平比較 隨著病情嚴重程度的增加,輕度組、中度組、重度組的UC患者血清Presepsin、GRP78表達水平均依次升高(P<0.05)。見表4。

表4 不同病情嚴重程度的UC患者血清Presepsin、GRP78水平比較

2.4UC患者血清Presepsin與GRP78水平的相關性分析 Pearson相關分析顯示,UC患者血清Presepsin與GRP78水平呈正相關(r=0.291,P<0.05),見圖1。

圖1 UC患者血清Presepsin與GRP78水平的相關性分析

2.5Logistic回歸分析UC發生的影響因素 以是否發生UC為因變量(1=發生,0=未發生),以年齡(連續變量)、性別(1=男,0=女)、體重指數(連續變量)、飲酒史(1=有,0=無)、PLT(1=異常,0=正常)、WBC(1=異常,0=正常)、Presepsin(連續變量)及GRP78(連續變量)為自變量,進行多因素Logistic分析。結果顯示,PLT、WBC、Presepsin、GRP78均是UC發生的獨立影響因素(P<0.05),見表5。

表5 Logistic回歸分析發生UC的影響因素

2.6血清Presepsin、GRP78水平對UC患者的診斷效能 經ROC曲線分析可知,Presepsin、GRP78單獨診斷UC患者的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.834、0.842,靈敏度分別為67.00%、69.00%,特異度分別為92.22%、94.44%,約登指數分別為0.592 2、0.634 4;Presepsin、GRP78聯合診斷UC患者的AUC為0.924,靈敏度為77.00%,特異度為96.67%,約登指數為0.736 7。兩者聯合診斷的效能優于血清Presepsin、GRP78各自單獨診斷(Z=3.921、3.048,P<0.05)。見表6、圖2。

圖2 血清Presepsin、GRP78水平對UC患者的診斷效能

表6 血清Presepsin、GRP78水平對UC患者的診斷效能

3 討 論

UC是一種胃腸道慢性炎癥性疾病,可通過遺傳、環境、微生物群和黏膜免疫失調相關的多因素機制影響結腸和直腸。在我國UC的發病率逐年升高,給患者家庭帶來了較大的經濟負擔,若不能及時發現并治療,UC有轉化成結腸癌的風險[11]。目前,UC的發病機制尚不清楚,臨床表現程度輕重不同,早期檢出率較低。因此,尋找潛在的UC血清學指標,對減輕患者痛苦、改善患者預后尤為重要。

Presepsin相對分子質量約為13×103,是分化標記蛋白CD14的可溶性N端片段,是識別病原體相關分子模式并啟動先天免疫反應的Toll樣受體。研究發現,Presepsin水平可預測急性腎衰竭嚴重程度[12]。血清Presepsin可參與急性胰腺炎的病理生理過程,與急性胰腺炎的病情密切相關[13]。在急性膽管炎中,血漿Presepsin與其感染程度、病情嚴重程度呈正相關[14]。在敗血癥中,患者Presepsin水平與細菌感染的嚴重程度呈正相關[15]。本研究結果顯示,與表觀健康的體檢者相比,UC患者血清Presepsin水平明顯升高,并且Presepsin水平隨著病情嚴重程度的增加而升高,這提示Presepsin表達增加與UC的病理發展程度有關。并且,Presepsin水平與患者體內PLT、WBC有關。推測其可能原因:Presepsin作為CD14的可溶性N端片段,通過影響細胞免疫炎癥反應進而在UC發生、發展中發揮作用。

GRP78是細胞內的一種分子伴侶。劉晨等[16]研究發現,GRP78在急性心肌梗死患者中高表達。在胃癌組織中,GRP78表達水平與淋巴結轉移、臨床分期及預后有關[17]。有研究表明,增強GRP78的活性可以緩解氧化應激誘導的細胞損傷和細胞死亡,GRP78在保護細胞免受氧化應激方面起著至關重要的作用[18]。GRP78的表達水平與人肺腺癌細胞[19]、人肺癌細胞[20]的凋亡率呈正相關。本研究結果顯示,與對照組相比,UC患者血清GRP78水平明顯升高,輕度組、中度組、重度組的UC患者血清GRP78水平依次升高,且GRP78水平與PLT、WBC有關,提示GRP78在UC的進程中發揮一定的促進作用,有利于對UC患者的病情評估。另外,沈雁等[21]研究顯示,UC小鼠的結腸組織中GRP78呈高表達,與本研究結果相一致。

本研究結果顯示,UC患者血清Presepsin與GRP78呈正相關,這提示Presepsin與GRP78之間的聯系十分緊密,并且PLT、WBC、Presepsin、GRP78均是UC發生的影響獨立因素。本研究探究了血清Presepsin、GRP78對UC的診斷價值,結果發現,血清Presepsin診斷UC的AUC值為0.834,當血清Presepsin濃度大于435.58 pg/mL時,可增加患有UC的風險,而血清GRP78診斷UC的AUC值為0.842,當血清GRP78濃度大于236.94 pg/mL時,也可增加患有UC的風險,這提示Presepsin、GRP78對UC均有一定的診斷效能。Presepsin、GRP78兩者診斷UC患者的AUC為0.924,其靈敏度、特異度及約登指數分別為77.00%、96.67%、0.736 7,優于各自單獨診斷。可見,臨床上對血清Presepsin、GRP78水平進行檢測時,血清Presepsin、GRP78兩者聯合檢測對UC的診斷價值更高,能夠彌補單項血清Presepsin或單項血清GRP78檢測的不足,在UC的臨床診斷中具有較高的應用價值。

綜上所述,UC患者血清Presepsin、GRP78水平均上調,并且均隨著UC病情嚴重程度的增加而增加,兩者聯合檢測對UC的診斷價值優于Presepsin、GRP78各自單獨檢測,兩者有望成為UC臨床診斷的血清學指標。