血清miR-1246、HE4、YKL-40對漿液性卵巢癌級別的診斷價值及與預后的關系*

錢世慶,楊海萍,余 俊,楊玉坤

1.安徽省廬江縣人民醫院,安徽合肥 231500;2.六安市人民醫院,安徽六安 237000;3.合肥諾森醫學檢驗中心,安徽合肥 230000

漿液性卵巢癌是臨床常見的卵巢癌病理類型之一,其中高級別的漿液性卵巢癌具有惡性程度高、侵襲性強、預后較差等特點。據統計,即使此類患者接受積極治療,半年內期復發率仍高達25%左右,且5年生存率僅為31%[1-2]。因此,及早明確漿液性卵巢癌級別,尋找潛在的生物標志物,制訂針對性的治療方案以提高療效具有重要意義。微小RNA(miRNA)miR-1246屬于腫瘤促進因子,在結直腸癌、宮頸鱗癌等多種惡性腫瘤中呈高表達[3]。人附睪蛋白4(HE4)是一種分泌性糖蛋白,參與腫瘤發生、發展、遷移及侵襲過程[4]。甲殼質酶蛋白-40(YKL-40)屬于外殼質酶家族,與多種細胞的分化、增殖、細胞外組織重塑及血管形成等生物學行為聯系緊密,在惡性腫瘤組織中存在特異性表達[5]。但關于三者對漿液性卵巢癌級別的診斷價值及與預后的關系的研究報道較少,故本課題組對此進行了探討,旨在為臨床診斷提供參考,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將安徽省廬江縣人民醫院2019年1月至2020年7月收治的漿液性卵巢癌患者87例納入研究。納入研究的患者年齡40～72歲、平均(57.31±5.02)歲,體重指數(BMI)17～29 kg/m2、平均(24.88±1.16)kg/m2;FIGO分期:Ⅰ～Ⅱ期45例,Ⅲ～Ⅳ期42例;其中有吸煙史18例,有飲酒史27例。根據病理檢查確定的漿液性卵巢癌級別將納入研究的患者分為低級別組(30例)與高級別組(57例)。兩組年齡、BMI、吸煙史、飲酒史比較,差異均無統計學意義(P>0.05);兩組FIGO分期比較,差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2納入及排除標準 納入標準:(1)經病理檢查確診為漿液性卵巢癌;(2)初診患者;(3)參與本研究前未接受任何抗腫瘤治療;(4)患者及家屬均知情同意并自愿簽訂知情同意書。排除標準:(1)合并內分泌疾病;(2)心、肝、腎、肺等重要器官功能異常;(3)伴有其他部位良/惡性腫瘤;(4)并發全身急慢性感染;(5)合并結締組織疾病;(6)妊娠期、哺乳期女性。

1.3方法

1.3.1標本采集 所有納入研究者于入院當日清晨采集空腹靜脈血4 mL,置入不加抗凝劑的離心管(購自鑫聯城潤生物技術有限公司),在室溫條件下靜置1 h,以3 000 r/min離心10 min,取上清液,于-80 ℃冰箱保存備用。

1.3.2血清miR-1246水平檢測 采用RNA提取試劑盒(購自賽默飛公司)提取總RNA,行逆轉錄后采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qPCR)檢測,檢測儀器為賽默飛公司的Applied Biosystems PCR儀,以U6為內參,采用2-ΔΔCt法計算miR-1246的相對表達水平。

1.3.3血清HE-4、YKL-40水平檢測 采用酶聯免疫吸附雙抗體夾心法檢測血清HE-4、YKL-40水平,試劑盒購自瑞典康乃格公司,酶標儀購自Molecular Devices公司,所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.4隨訪 對納入研究的患者進行2年隨訪。

2 結 果

2.1兩組血清miR-1246、HE4、YKL-40水平比較 高級別組血清miR-1246、HE4、YKL-40水平均高于低級別組(P<0.05),見表2。

表2 兩組血清miR-1246、HE4、YKL-40水平比較

2.2血清miR-1246、HE4、YKL-40與漿液性卵巢癌級別的關系 血清miR-1246、HE4、YKL-40均與漿液性卵巢癌級別呈正相關(r=0.625、0.714、0.703,P<0.05)。

2.3血清miR-1246、HE4、YKL-40單獨及聯合診斷漿液性卵巢癌級別的價值 以高級別組作為陽性樣本,低級別組作為陰性樣本,繪制ROC曲線,結果顯示,血清miR-1246、HE4、YKL-40診斷漿液性卵巢癌級別的曲線下面積(AUC)分別為0.830(95%CI:0.735～0.902)、0.812(95%CI:0.714～0.888)、0.833(95%CI:0.738～0.905)。3項指標聯合診斷漿液性卵巢癌級別的AUC為0.938(95%CI:0.865～0.979),約登指數為0.775,靈敏度為84.21%,特異度為93.33%,優于各血清指標單獨診斷,見表3、圖1。

注:A為3項指標單獨診斷的ROC曲線;B為3項指標聯合診斷的ROC曲線。

表3 血清miR-1246、HE4、YKL-40診斷漿液性卵巢癌級別價值

2.4不同血清miR-1246、HE4、YKL-40水平患者2年生存率 隨訪2年,失訪4例。83例漿液性卵巢癌患者2年生存率為67.46%(56/83),見圖2。生存曲線分析顯示,血清miR-1246、HE4、YKL-40高水平患者2年生存率分別為53.49%(23/43)、52.50%(21/40)、56.60%(30/53),均低于低水平患者的82.50%(33/40)、81.40%(35/43)、86.67%(26/30),差異有統計學意義(P<0.05),見圖3。

圖2 漿液性卵巢癌患者生存曲線

圖3 不同血清miR-1246、HE4、YKL-40水平患者2年生存曲線

3 討 論

miRNA在生物轉錄后基因表達的負向調節方面發揮至關重要的作用,可經由下游信號通路及調節靶基因等途徑產生抑癌基因或促癌基因的作用[6-7]。既往研究均指出,miRNA失調與卵巢癌發生、發展聯系緊密[8-9]。其中,miR-1246在多種腫瘤中發現其呈高表達,被認為有促癌基因的作用[10]。楚麗等[11]報道顯示,miR-1246能夠加快肺上皮祖細胞增殖、分化,促進非小細胞肺癌進展。在此基礎上,本研究發現,高級別組血清miR-1246水平高于低級別組,與漿液性卵巢癌級別呈正相關,可見miR-1246在漿液性卵巢癌發展過程中具有重要促進作用。分析原因,主要在于腫瘤細胞可選擇性分泌富含miR-1246的外泌體,而這些外泌體會被周圍巨噬細胞吞噬,促使巨噬細胞轉化為與腫瘤相關的巨噬細胞,從而改變腫瘤細胞內部微環境,加快腫瘤細胞增殖、分化、侵襲及轉移,提高腫瘤惡性程度[12]。同時,一項體外實驗證實,miR-1246可以顯著提高SKOV3卵巢癌細胞增殖、遷移和侵襲能力,抑制腫瘤細胞凋亡,促進卵巢癌進展[13]。本研究還發現,血清miR-1246高水平患者2年生存率低于低水平患者,提示miR-1246表達異常升高還會對漿液性卵巢癌患者生存預后產生影響,可作為靶向治療的靶點,以延長生存期,改善預后。

HE4屬于抑蛋白酶家族,最早是在人附睪上皮細胞中被發現,大量臨床實踐證實,HE4是一種生殖相關、附睪特異性的蛋白[14-15]。既往研究表明,HE4在正常卵巢組織中不表達或處于低表達狀態,在卵巢癌組織中呈高表達趨勢,可作為臨床診斷卵巢癌的生物學標志物[16-17]。本研究結果顯示,高級別漿液性卵巢癌患者血清HE4水平明顯高于低級別漿液性卵巢癌患者,說明HE4不僅參與卵巢癌發生過程,還能促進卵巢癌發展。結合LIU等[18]報道考慮為HE4具有調節腫瘤細胞增殖、分化、轉移及凋亡作用,異常高表達能顯著提高腫瘤細胞侵襲能力,抑制腫瘤細胞凋亡,從而增加腫瘤組織惡性程度,加快卵巢癌病情進展。本研究結果表明,血清HE4與漿液性卵巢癌級別呈正相關,可為臨床準確評估病理級別提供有效參考依據。同時,本研究還發現,HE4顯著升高表達會明顯降低漿液性卵巢癌患者2年生存率,提示臨床可將其作為生存預后判斷的重要輔助指標。

YKL-40是哺乳動物18糖蛋白家族中的成員之一,相關報道證實,其在炎癥、細胞外基質重塑、腫瘤血管形成、惡性腫瘤細胞增殖浸潤等多種生理病理過程中具有重要作用[19]。楊華等[20]、HAO等[21]研究報道證實,YKL-40在子宮內膜癌、膀胱癌中呈高表達。本研究在此基礎上發現,高級別組血清YKL-40水平高于低級別組,與漿液性卵巢癌級別呈正相關,可見血清YKL-40可作為臨床評估漿液性卵巢癌級別的血清學指標。究其原因,主要是由于YKL-40具有腫瘤生長因子作用,可有效促進腫瘤新生血管形成,加快腫瘤細胞浸潤、侵襲,從而發揮加速腫瘤病情進展的作用,同時,中性粒細胞、巨噬細胞等間質細胞也會不同程度表達YKL-40,隨著卵巢惡性腫瘤組織浸潤、侵襲及轉移的范圍更為廣泛,其腫瘤間質成分還會增加,導致YKL-40被過多表達,進一步促進卵巢癌發展[22-23]。本研究結果還表明,血清YKL-40高水平患者2年生存率低于低水平患者,可見YKL-40高表達會提高漿液性卵巢癌死亡風險,提示臨床可通過監測其血清水平變化為評估生存預后提供有效信息。

此外,本研究發現,血清miR-1246、HE4、YKL-40單獨診斷漿液性卵巢癌級別的價值欠佳,難以單獨應用于臨床診斷中。為此,本研究探討了血清miR-1246、HE4、YKL-40聯合診斷的價值,結果發現聯合診斷的效能優于三者單獨診斷,可以為臨床及早準確評估漿液性卵巢癌級別提供新思路及可靠的數據支持。

綜上可知,血清miR-1246、HE4、YKL-40與漿液性卵巢癌級別呈正相關,聯合診斷價值較高,而且與生存預后聯系緊密,可為臨床診治提供有效信息。本研究的不足之處:受臨床資料收集和時間限制,僅隨訪并統計了患者2年的生存情況,今后應延長隨訪時間,以得出更全面可靠的結論。