雞馬立克氏病疫苗雞胚免疫技術(shù)的應(yīng)用

馮陽(yáng)　關(guān)秀春　葛忠凱　周忠號(hào)　丁樹(shù)龍

摘 要：雞胚免疫技術(shù)特指在孵化后期對(duì)雞胚進(jìn)行免疫接種，使得雛雞一出生便獲得主動(dòng)免疫的技術(shù)。作為一種腫瘤性疾病，雞馬立克氏病（Mareks disease，MD）可引起雞淋巴增生、各種器官和肌膚發(fā)生腫瘤病灶等。近年來(lái)，隨著雞養(yǎng)殖行業(yè)規(guī)模化、集約化的發(fā)展，雞群飼養(yǎng)密度的不斷增加，雞馬立克氏病的發(fā)生概率逐年攀升。此外，該病廣泛流行于全世界，傳染性強(qiáng)，危害大，與亞洲雞瘟和傳染性法氏囊病被列為阻礙養(yǎng)雞行業(yè)發(fā)展的三大疾病，嚴(yán)重影響著我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展。目前，對(duì)雞馬立克氏病尚無(wú)有效的治療藥物，主要依靠疫苗接種防治此病，故實(shí)現(xiàn)雞馬立克氏病的有效免疫具有重要意義。本文詳細(xì)介紹雞馬立克氏病的特點(diǎn)及綜合防控措施，系統(tǒng)剖析雞胚免疫技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)及其在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用情況，旨在為相關(guān)從業(yè)人員提供參考。

關(guān)鍵詞：雞；馬立克氏病；免疫

中圖分類號(hào)：S858.31? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-1085（2023）07-0070-05

雞馬立克氏病是一種傳染性極強(qiáng)的淋巴組織增生性腫瘤病，對(duì)禽類健康危害較大，發(fā)病癥狀多樣，急性型MD（神經(jīng)或腫瘤）控制不好會(huì)愈發(fā)嚴(yán)重，發(fā)病率、死亡率極高，給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，對(duì)雞馬立克氏病沒(méi)有針對(duì)性的治療藥物，依靠疫苗接種能有效控制此病，因此雞馬立克氏病成為第一個(gè)可以通過(guò)疫苗預(yù)防的致癌性疾病。同傳統(tǒng)的雛雞免疫接種相比，采用雞馬立克氏病疫苗單獨(dú)或聯(lián)合胚胎免疫接種17～18日齡的雞胚，能夠填補(bǔ)免疫空白期，免疫效果要好于雛雞免疫，是控制雞馬立克氏病早期感染的有效方法之一。這種方法被國(guó)內(nèi)外廣泛認(rèn)可，成為防治馬立克氏病的新途徑。本文就雞馬立克氏病的概述、綜合防控措施、雞胚免疫技術(shù)及應(yīng)用進(jìn)行闡述，旨在降低馬立克氏病的發(fā)病率，保證養(yǎng)雞企業(yè)及養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。

1 雞馬立克氏病概述

MD是由雞馬立克氏病病毒（Mareks disease virus，MDV）感染引發(fā)的一種傳染性高的T細(xì)胞增生性腫瘤性疾病，MDV會(huì)不斷攻擊T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞[1]，造成免疫抑制和T細(xì)胞淋巴瘤，進(jìn)而引起機(jī)體繼發(fā)感染多種疾病。本病主要感染雞，普通火雞、山雞、鵪鶉、越雉等禽類雖可感染，但罕見(jiàn)發(fā)病。不同品種的雞均可感染，但易感性、感染率有差異，我國(guó)地方品種雞易感性較高，來(lái)航雞的易感性較其他品種的雞低，肉雞發(fā)病率高于蛋雞。雞的易感性不受日齡限制，但日齡越大，易感性越低，臨床多發(fā)生于5～8周齡的雞，發(fā)病高峰多見(jiàn)于12～30周齡的雞；另外，感染日齡不同，雞發(fā)病程度也有很大不同，2周齡的感染雞發(fā)病率較高，成年雞感染后一般只帶毒、排毒而不發(fā)病，因此控制或預(yù)防早期感染對(duì)防止雞馬立克氏病的發(fā)生至關(guān)重要。

典型MD主要侵害神經(jīng)系統(tǒng)，死亡率較低。常見(jiàn)的急性型MD主要侵害雞內(nèi)臟器官等，淋巴細(xì)胞增生產(chǎn)生淋巴瘤，一般發(fā)病率在10%～15%，流行時(shí)高達(dá)70%，死亡率會(huì)迅速增加。臨床上，發(fā)病雞表現(xiàn)出食欲不振、呼吸困難、抑郁，腿、翅膀和脖子發(fā)生癱瘓，最后嚴(yán)重者死亡。病理剖檢可見(jiàn)內(nèi)臟器官、肌肉、皮膚上有單個(gè)或多個(gè)大小不等的灰白色或黃色瘤樣結(jié)節(jié)性病灶；此外，還觀察到脾臟、肝臟、腎臟和坐骨神經(jīng)腫大。本病具有高度接觸傳染性，一旦養(yǎng)殖場(chǎng)雞群發(fā)病，患病雞和帶毒雞是主要傳染源，其次是病雞和帶毒雞的分泌物、排泄物及其污染的飼料、飲水等，這些都可能成為污染源。

雞馬立克氏病的病毒（MDV）是一種細(xì)胞結(jié)合性皰疹病毒，主要存在于細(xì)胞核，少量存在于細(xì)胞外間隙或細(xì)胞漿中[2]。MDV以無(wú)囊膜的裸病毒和有囊膜的完全病毒兩種形式存在，裸病毒對(duì)外界抵抗力差，有囊膜的病毒則具有較強(qiáng)的適應(yīng)力和抵抗力。MDV分為弱毒、強(qiáng)毒、超強(qiáng)毒和特超強(qiáng)毒4種不同毒力的致病毒株，其引起雞的腫瘤率以及死亡率逐漸增強(qiáng)。研究顯示，石夢(mèng)雅[3]對(duì)2017～2019年間廣西地區(qū)的養(yǎng)殖場(chǎng)MDV進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查和基因序列分析，結(jié)果顯示，所分離的毒株主要以中國(guó)強(qiáng)毒分離株為主，有中國(guó)超強(qiáng)或特超強(qiáng)毒株。MDV毒株毒力的增強(qiáng)，是導(dǎo)致臨床免疫失敗的原因之一。

2? 雞馬立克氏病的綜合防控措施

在國(guó)內(nèi)，當(dāng)前對(duì)雞馬立克氏病沒(méi)有針對(duì)性的治療藥物，采用疫苗接種已成為預(yù)防該病最有效的方式。目前，已知國(guó)內(nèi)廣泛使用的馬立克氏病活疫苗主要包括雞馬立克氏病CA126細(xì)胞活疫苗、CA126+SB1雙價(jià)細(xì)胞活疫苗、Rismavac液氮苗、Rismavac+CA126雙價(jià)細(xì)胞活疫苗以及馬立克氏病-傳染性法氏囊病二聯(lián)多價(jià)活疫苗等[4]。近幾年通過(guò)廣泛的疫苗接種，雞馬立克氏病很少發(fā)生，整體控制較好。

為避免雞馬立克氏病在養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)發(fā)生，除接種疫苗外，做好雞群的生物安全防控工作和加強(qiáng)綜合防疫措施十分重要。對(duì)外，避免“引進(jìn)”患病雞或帶毒雞，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)；對(duì)內(nèi)，一旦發(fā)現(xiàn)病雞，應(yīng)及時(shí)做好隔離、診斷、撲殺工作以及凈化雞群，對(duì)可能污染的環(huán)境及物品進(jìn)行消毒與無(wú)害化處理，做好區(qū)域防疫管理，以防雞馬立克氏病原擴(kuò)散。同時(shí)，關(guān)注雞群的營(yíng)養(yǎng)需求、定時(shí)對(duì)環(huán)境和用具消毒以及采取其他嚴(yán)格的管理措施。

3 雞胚免疫技術(shù)

3.1 雞胚免疫技術(shù)介紹

雞胚免疫技術(shù)是指對(duì)具備組織學(xué)基礎(chǔ)的雞胚進(jìn)行疫苗免疫，一般是指在孵化末期對(duì)雞胚進(jìn)行免疫，使其在出殼時(shí)或出殼后數(shù)日內(nèi)獲取特異性主動(dòng)免疫力的一種手段。這種免疫接種技術(shù)因能避免雛雞早期感染特定傳染病受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)雞胚期母源抗體變化，對(duì)18胚齡雞胚進(jìn)行疫苗接種正好可以避開(kāi)母源抗體的峰值，減少母源抗體對(duì)后期免疫效果的干擾； 經(jīng)過(guò)多年研究，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)在雞胚孵化的中后期，18胚齡時(shí)，雞胚的免疫器官胸腺、法氏囊、脾臟基本發(fā)育成熟，可以在外界抗原刺激下建立主動(dòng)免疫。這些就為雞胚免疫提供了理論基礎(chǔ)。目前，雞胚免疫只適合肉雞接種，臨床上雞胚免疫接種的最佳胚齡是18胚齡的雞胚，最適的接種途徑為羊膜腔接種。

傳統(tǒng)雛雞免疫方式是在育雛期進(jìn)行接種，雛雞可能由于早期感染、母源抗體等多種原因，導(dǎo)致免疫失敗，存在一定時(shí)間的免疫空白期。而雞胚免疫使雛雞一出生就獲得特異性抵抗力，填補(bǔ)了免疫空白期，并且有免疫效果顯著的優(yōu)點(diǎn)。馬巍陵等[5]研究表明，雞胚免疫與雛雞免疫相比，提高了血清中抗體滴度，提高了與抗病毒能力相關(guān)的細(xì)胞因子IFN-γ水平及與誘導(dǎo)活化免疫細(xì)胞相關(guān)的IL-4水平，確實(shí)有效提高了MD疫苗的免疫效果，使MD發(fā)病率更低。相比于傳統(tǒng)的雛雞免疫接種技術(shù)（喂食、飲水、氣霧、滴鼻、注射等），雞胚免疫接種具有填補(bǔ)免疫空白期、批量化、節(jié)省人力和物力的優(yōu)點(diǎn)。

雞胚免疫接種技術(shù)已經(jīng)在30多個(gè)國(guó)家得到廣泛應(yīng)用，在美國(guó)已有80%肉雞采用雞胚免疫方式預(yù)防馬立克氏病，因技術(shù)普及較晚，我國(guó)只有部分大型養(yǎng)殖企業(yè)采用雞胚免疫馬立克氏病疫苗，占比相對(duì)較少。隨著科技快速發(fā)展，國(guó)內(nèi)外均已研發(fā)出用于雞胚接種的大型自動(dòng)化設(shè)備，目前，意大利TKA公司生產(chǎn)的臺(tái)式半自動(dòng)雞胚接種機(jī)與全自動(dòng)接種收獲設(shè)備，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證與人工接種和收獲相比具有較大優(yōu)勢(shì)，在國(guó)外受歡迎程度較高，能較好滿足大型養(yǎng)殖企業(yè)的免疫需求，國(guó)外的凱榮、賽諾菲巴斯德等以及國(guó)內(nèi)的溫氏集團(tuán)、新希望集團(tuán)、立華牧業(yè)等大型養(yǎng)殖企業(yè)已采用雞胚免疫技術(shù)的機(jī)械化操作，可實(shí)現(xiàn)高通量接種，大大減少了人力、物力的耗費(fèi)；但是自動(dòng)化雞胚接種設(shè)備價(jià)格昂貴，大部分的養(yǎng)殖場(chǎng)無(wú)法承擔(dān)高昂成本，仍采用人工雞胚免疫方式。

3.2 雞胚免疫接種的優(yōu)勢(shì)及缺點(diǎn)

3.2.1 雞胚免疫接種的優(yōu)勢(shì) 首先，雞胚免疫能有效填補(bǔ)免疫空白期，使雛雞在一出生或出生后很短的一段時(shí)間內(nèi)獲得主動(dòng)免疫，極大填補(bǔ)了傳統(tǒng)免疫給雛雞帶來(lái)的空白期，降低病毒感染的概率[6]；其次，雞胚免疫效果均一。雞胚的組織細(xì)胞分化程度低，對(duì)病毒具有較高的易感性，病毒繁殖量高，能夠激發(fā)自主免疫。給雞接種弱毒疫苗，疫苗病毒進(jìn)入機(jī)體自我復(fù)制、迅速繁殖，不斷刺激雞群體內(nèi)的淋巴細(xì)胞與白細(xì)胞等免疫細(xì)胞產(chǎn)生特異性免疫活性物質(zhì)，從而建立一個(gè)自主免疫過(guò)程。多項(xiàng)試驗(yàn)研究表明，在雞胚免疫后，免疫接種組在疫苗保護(hù)效力方面、抗體水平差異方面、試驗(yàn)攻毒保護(hù)率方面均高于未接種的對(duì)照組，這說(shuō)明在雞胚免疫后，出生的雛雞體內(nèi)已獲得抗體[7-8]。

3.2.2 雞胚免疫接種的缺點(diǎn) 首先，若接種的雞胚質(zhì)量較差或操作方法不當(dāng)，致使部分細(xì)菌、衣原體或病毒能夠從感染的母雞傳染給雞胚；其次，雞胚免疫局限性較大。目前，受限于國(guó)內(nèi)外技術(shù)發(fā)展瓶頸，雞胚疫苗在市場(chǎng)中的種類較少，可防控的疾病有限；最后，因不同品種品系間的差異、宿主遺傳性和馬立克氏疫苗保護(hù)效力等方面的差異，免疫失敗的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在世界范圍內(nèi)已獲得免疫的雞群中，雞馬立克氏病仍有10%左右的發(fā)病率。對(duì)于亞型眾多、變異較快的病毒，一種疫苗很難保證在疫期“從頭到尾”的保護(hù)雞群，由此可見(jiàn)，不能單純靠疫苗免疫來(lái)保障雞群的健康[6，9]。

3.3 雞胚免疫技術(shù)的應(yīng)用

目前，雞胚的免疫接種技術(shù)隨著長(zhǎng)期廣泛的應(yīng)用而得到不斷發(fā)展，并日益成熟，除疫苗領(lǐng)域外，雞胚免疫也被嘗試用于疾病防控、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充等多個(gè)領(lǐng)域。

3.3.1 疫苗領(lǐng)域 目前，市場(chǎng)上安全可行的雞胚免疫疫苗是法氏囊、馬立克氏病疫苗，接種后不影響雞胚的孵化率和出雛率，而且可以使雛雞同時(shí)獲得這2種疾病的免疫力，降低發(fā)病概率。有專家認(rèn)為雞胚免疫疫苗是否合格的一個(gè)重要決定因素就是疫苗毒株對(duì)雞胚的毒力。古飛霞等[8]曾嘗試將多種商品化新城疫（ND）弱毒疫苗分別接種不同品種的18胚齡雞胚，發(fā)現(xiàn)商品化ND疫苗對(duì)18胚齡雞胚均有較強(qiáng)的致病性，顯著降低了雞胚的孵化率和健雛率，不能用于雞胚免疫。但接種構(gòu)建的重組疫苗會(huì)降低對(duì)雞胚的致病性，增強(qiáng)保護(hù)效果。Dilaveris 等[10]將新城疫疫苗 NDW與可表達(dá)細(xì)胞因子IFN-γ的質(zhì)粒共同接種18胚齡SPF雞胚后，可顯著降低 NDW 對(duì)雞胚的致病性。

STEEL 等[11]將表達(dá)新城疫和禽流感免疫源性的重組疫苗接種于18胚齡雞胚，對(duì)NDV和H5N1保護(hù)效果分別達(dá)到了90%、80%。只要疫苗合適，雞胚接種免疫完全可行。黨海斌等[12]將柔嫩艾美耳球蟲(chóng)和堆形艾美耳球蟲(chóng)接種18胚齡雞胚，結(jié)果顯示球蟲(chóng)疫苗單一或混合接種都能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫保護(hù)率。另外，未來(lái)隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展，含有佐劑的滅活病毒疫苗、亞單位疫苗、重組疫苗、DNA疫苗及非病毒雞胚免疫疫苗等有望成為雞胚接種試驗(yàn)的重要工具[13]。尤其是抵抗多數(shù)或全部疫病的多價(jià)雞胚接種疫苗以及對(duì)雞胚安全的重組或亞單位疫苗可能會(huì)用于家禽生產(chǎn)，將大大提高免疫效率。

3.3.2 其他領(lǐng)域 雞胚免疫可以促進(jìn)雛雞免疫系統(tǒng)的發(fā)育和成熟。李福生等[14]研究發(fā)現(xiàn)，用新城疫F系和I系疫苗氣室接種8胚齡雞胚，發(fā)現(xiàn)雞胚不致死且能促進(jìn)雞胚免疫器官的發(fā)育成熟。國(guó)外學(xué)者[15]通過(guò)在雞胚中接種空腸彎曲桿菌外膜囊泡，結(jié)果發(fā)現(xiàn)接種后的雞群對(duì)胃腸炎有一定的抵抗效果。此外，對(duì)14胚齡雞胚羊膜腔注射葡萄糖、果糖或核糖等糖類化合物，可以給雞胚增加營(yíng)養(yǎng)，顯著促進(jìn)雞胚的后期發(fā)育，并且有助于提高體液免疫和細(xì)胞免疫功能和效率[16]。另外，隨著雞胚接種技術(shù)的發(fā)展，也會(huì)擴(kuò)散應(yīng)用到其他領(lǐng)域，如采用雞胚接種技術(shù)還可以注射細(xì)胞素、可溶性佐劑和競(jìng)爭(zhēng)性排斥的微生態(tài)制劑等，可以有效調(diào)節(jié)雞體的免疫力，促進(jìn)雛雞腸道發(fā)育，大大提高其生長(zhǎng)性能。

4 小結(jié)

雞馬立克氏病危害嚴(yán)重、傳播能力強(qiáng)，給我國(guó)雞養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的損失。雞胚免疫技術(shù)作為當(dāng)前熱門(mén)的預(yù)防雞馬立克氏病的一種有效技術(shù)手段，優(yōu)勢(shì)明顯且在各個(gè)領(lǐng)域得以廣泛應(yīng)用，但不能單純靠疫苗免疫來(lái)保障雞群的健康。養(yǎng)雞行業(yè)的從業(yè)者們應(yīng)加強(qiáng)疾病的防控，以預(yù)防為主、治療為輔有效確保雞群的健康，進(jìn)而推動(dòng)我國(guó)家禽產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]? Yang Y，Dong M，Hao X，et al.Revisiting cellular immune response to oncogenic Marek's disease virus： the rising of avian T-cell immunity[J]. Cellular and molecular life sciences.2020，77（16）：3103-3116.

[2]? ?韓東寧，王延新，咸勤未.雞馬立克氏病研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2022，18（08）：61-62.

[3]? 石夢(mèng)雅.2017-2019馬立克氏病病毒分子流行病學(xué)及分離株GX18NNM4的致病性研究[D].南寧：廣西大學(xué)，2020.

[4]? 李晨光，劉江濤.預(yù)防雞馬立克氏病的幾種疫苗介紹[J].現(xiàn)代畜牧科技，2015（06）：1.

[5]? 馬巍陵，藺輝星，陳雷，等.雞馬立克氏病疫苗雞胚免疫技術(shù)的應(yīng)用[J]. 農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2018，38（07）：8-9+12.

[6]? 申之義.雞胚免疫接種的研究近況和展望[J].內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，1992（04）：17-19.

[7]? 劉思當(dāng).雞馬立克氏病的免疫形態(tài)學(xué)研究[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1989（01）：55-58．

[8]? 古飛霞，辛朝安.雞馬立克氏病雞胚免疫接種的研究[J].中國(guó)獸醫(yī)科技，1990（03）：6-9．

[9] 樊三玲，李麗，羅青平，等.雞胚免疫疫苗的研究現(xiàn)狀及展望[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，57（S2）：154-157.

[10] Dilaveris D，Chen C，Kaiser P，et al.The safety and immunogenicity of an in ovo vaccine against Newcastle disease virus differ between two lines of chicken[J].Vaccine，2007，25（19）： 3792-3799.

[11] Steel J，Burmakina S，Thomas C，et al.A combination in-ovo vaccine for avian influenza virus and Newcastle disease virus[J].Vaccine，2008， 26（04）：522-531．

[12] 黨海斌，蔡建平，于三科，等.雞胚接種柔嫩艾美耳? 球蟲(chóng)和堆形艾美耳球蟲(chóng)活卵囊的免疫保護(hù)試驗(yàn)[J].畜牧與獸醫(yī)，2006（05）：4-7．

[13] Sharrna J M，Ricks C A，周雪媚.雞胚接種技術(shù)前景展望[J].中國(guó)家禽，2003（07）：2-3.

[14] 李福生，劉榮秀，周鴻濤，等.雞胚早期接種新城疫疫苗的免疫應(yīng)答—Ⅰ雞胚接種新城疫疫苗，胚-雛血液中淋巴樣細(xì)胞的動(dòng)態(tài)和免疫保護(hù)力[J].中國(guó)畜禽傳染病，1990（04）：20-21+19.

[15] Renata G，Maciej K，Agnieszka W，et al.Evaluation of a protective effect of in ovo delivered Campylobacter jejuni OMVs[J].Applied microbiology and biotechnology，2016，100（20）：8855-8864.

[16] Bhanja S K， Goel A， Pandey N， et al. In ovo carbohydrate supplementation modulates growth and immunity-related genes in broiler chickens[J].Journal of animal physiology and animal nutrition，2015，99（1）： 163-173.

Application of Chicken Embryo Immunization Technique for Chicken Malik's Disease Vaccine

FENG Yang， GUAN Xiuchun， GE Zhongkai， ZHOU Zhonghao， DING Shulong

（Qingdao Yebio Engineering Co.， Qingdao? 266108，Shandong ，China）

Abstract：? Embryo immunization technology refers to the immunization of chicken embryos at the late stage of hatching so that the chicks are actively immunized from birth. Chicken Marek's disease （MD） is a neoplastic disease that can cause lymphatic hyperplasia， tumor lesions in various organs and skin， etc. in chickens. In recent years， with the development of the chicken breeding industry on a large scale and intensification， and the increasing density of chicken rearing， the probability of chicken MD has been rising year by year. In addition， the disease is widely prevalent in the world， highly contagious and harmful， and Newcastle disease and infectious bursal disease are listed as the three major epidemics affecting the healthy development of the chicken industry， seriously affecting the healthy development of China's chicken breeding industry. At present， there is no effective treatment drug for chicken MD， mainly relying on vaccination to prevent and control the disease， so it is important to achieve effective immunization of chicken MD.Here，this research introduced the disease characteristics and preventive measures of chicken MD. then， the research introduced the advantages and limitation of in－ovo vaccination and its application， aiming to provide reference imformations for relevant practitioners.

Keywords：? Marek's disease; Breeding industry; Immunity