一例蛋雞傳染性喉氣管炎病毒與大腸桿菌混合感染的診斷報告

沙那提·斯蘭拜　巴哈提

中圖分類號：S858.31? ? ? 文獻標識碼：C? ? ? 文章編號：1673-1085（2023）07-0078-03

雞傳染性喉氣管炎（AILT）是當前養雞場重點防范的主要呼吸道傳染病之一[1]，近年來在我國呈現出“老病新發”的流行趨勢，臨床中以“溫和型”和“非典型”癥狀為主，增加了防控的難度，也給我國養禽業造成了巨大的經濟損失。雞大腸桿菌病是危害我國養雞業的常見多發病，在潮濕、寒冷的冬、春季易發生，通風不良、營養不足、環境應激等不良因素易誘發[2]。2023年4月，塔城某蛋雞場發生了一起以呼吸道和消化道病變為主的疫病，通過綜合診斷確診為雞傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）與大腸桿菌混合感染，經敏感試驗篩選出合適藥物治療以及采取其他輔助措施，養殖場迅速控制了疫情。現將整個診治過程匯報如下，供基層獸醫工作者借鑒。

1 發病情況

2023年4月，塔城某蛋雞場飼養的7月齡蛋雞突然發病，初期個別雞單眼流淚，喘鳴，伸頸張口呼吸，精神萎靡，飲食減少，每天死亡6～10只；隨后擴展至整群發病，咳嗽加重，張口喘氣，產蛋量急驟減少，每天死亡增加至30只。

2 臨床癥狀

雞群精神沉郁，食欲減退；流涕，張口呼吸，咳嗽，可咳出帶血粘液；腹瀉，水樣糞便，白痢增多，迅速消瘦；產蛋率由90%降至60%，最后因呼吸困難、窒息、消瘦、衰竭至死亡。

3 病理變化

可見病死雞氣管含大量血色黏痰，有出血點，肝臟、脾臟、腎臟出血、腫大，心包膜增厚、附有纖維素性灰白色滲出物，腺胃粘膜水腫、出血點，腸道變薄、廣泛性出血。

4 實驗室診斷

病死雞剖檢后無菌采集喉頭、氣管、心臟、肝臟等組織病料樣品，低溫保存，迅速送往實驗室進行病原分離和PCR檢測。

4.1 病原分離培養、鑒定

細菌分離：采用無菌操作的方法將喉頭、肝臟病料劃線接種麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養24 h，結果在平板上長出很多露珠狀小菌落，菌落表面光滑、中間圓形隆起、邊緣整齊，符合大腸桿菌菌落特征。

染色鏡檢：挑取單個小菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢，可見革蘭氏陰性短小桿菌，單個或散在排列。分離菌鏡檢結果與大腸桿菌的形態學特征相符。

生化鑒定：取分離菌分別進行糖發酵試驗、甲基紅試驗和吲哚試驗等，觀察結果。分離菌生化鑒定結果如表1所示。

4.2 藥物敏感性試驗

采用常規的K-B紙片法測定分離菌株對11種常見藥物的敏感性，結果顯示分離菌株對阿奇霉素、氧氟沙星、頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考、環丙沙星較敏感，藥物敏感率為54.55%（6/11）；對阿米卡星、紅霉素、慶大霉素、四環素、強力霉素耐藥，藥物耐藥率為45.45%（5/11），耐藥性相對較嚴重。

4.3 RT-PCR檢測

對上述采集的病料按照病毒基因組RNA/DNA提取試劑盒說明書抽提DNA，按照李海利等[3]建立的雞傳染性喉氣管炎病毒PCR檢測方法，設計一對雞傳染性喉氣管炎病毒特異性引物并送生物公司合成，并按照文中優化的PCR反應條件進行PCR擴增，成功擴增出一條690 bp的目的基因片段，片段大小與預期結果一致。表明臨床病料樣品中存在LITV核酸，存在雞傳染性喉氣管炎病毒感染。

5 綜合診斷結果

通過臨床診斷、剖解變化和實驗室診斷，綜合判定雞場飼養的蛋雞發生傳染性喉氣管炎病毒與大腸桿菌混合感染。

6 討論與分析

對臨床混合感染的病例，應借助實驗室診斷方法快速確診，為疫病治療爭取時間。雞傳染性喉氣管炎是屬于老病新發的傳染病，近年來隨著雞傳染性喉氣管炎弱毒疫苗的推廣應用，在臨床中主要呈現出“溫和型”和“非典型”的臨床癥狀，雖然不能確定這兩種臨床癥狀的出現與ILTV弱毒疫苗的毒力返強有關[4]，但大大增加了AILT臨床診斷與防治的難度。為避免誤診，還需通過分子生物學方法和血清學方法進行準確診斷[5]。病毒分離鑒定方法在臨床是一種常用的實驗室診斷手段，雖然技術成熟可靠，但需要采購SPF雞胚，存在操作復雜、試驗周期長等缺點，無法滿足臨床快速確診的需要；ELISA等血清學方法操作簡單、但無法進行潛伏感染期的早期診斷；PCR等分子生物學方法具有操作簡單、檢測快速、成本低廉、特異性和敏感性高的優點，能夠檢測早期感染或潛伏感染期時極低含量的病毒核酸，特別適合于臨床中ILTV感染的快速診斷。因此，本次病例參考他人建立的PCR方法進行了臨床應用，提高了診斷結果的準確性。

大腸桿菌病是養雞生產中的常見病，屬于條件性致病菌，其發生與飼養環境衛生較差、溫度驟變、寒冷、潮濕、擁擠、飼料霉變等誘發因素密切相關，臨床上常見與其他病毒或細菌繼發感染、混合感染和并發感染的現象，會加重病情，在臨床中一定要做到早發現、早診斷、早治療，這對大腸桿菌的防控非常重要。

筆者認為對大腸桿菌病的防控應堅持防大于治的理念，通過改善環境衛生、定期消毒、保持通風、避免擁擠、避免刺激、嚴禁飼喂霉變飼料等措施來避免該病的發生。臨床中一旦暴發大腸桿菌病，應快速確診，根據藥敏試驗結果篩選出適合本場的藥物。在當前養殖生產中，抗菌性藥物的長期濫用必然導致耐藥性不斷增強。袁敬知等[6]研究發現大腸桿菌的耐藥性最強，四環素耐藥率最高，達到100%。李娟等[7]發現分離的雞源大腸桿菌總體耐藥情況比較嚴重，對頭孢氨芐、泰樂霉素的耐藥率達到65%以上。而本病例中的分離菌株在11種常見藥物中對6種敏感，藥物敏感率達54.55%；對5種藥物耐藥，藥物耐藥率為45.45%，結果顯示分離菌株的耐藥性較嚴重，這必定與該養殖場平時大量濫用抗菌性藥物有關。所以，對病例中大腸桿菌病的治療應進行藥物敏感性試驗篩選出敏感藥物，輪換用藥，避免產生耐藥性。

推測兩種可能的發病情況：一種可能是蛋雞先感染了AILT，導致蛋雞免疫力降低，加上棚舍環境差，大腸桿菌迅速繁殖，從而發生大腸桿菌混合感染，導致發病率和死亡率增加；另一種可能是蛋雞在通風條件差、環境簡陋的棚舍中飼養，先感染了大腸桿菌，導致蛋雞體質下降，后又因受外界環境應激和管理粗放等影響，繼發感染雞傳染性喉氣管炎。本病例雖然無法確定是ILTV還是大腸桿菌在蛋雞發病過程中起到了主導和決定性作用，但無論是哪一種可能，都與蛋雞的機體免疫力下降有關。此次發病可能與該養殖場的養殖環境較差有關，現場查看發病蛋雞群所在的飼養大棚簡陋、通風條件較差，棚舍內氨氣味、腥臭味較濃；其次，新疆塔城四月的天氣早晚溫差大，相差約14 ℃，且棚舍保暖性差，以上原因導致雞群發生混合感染。因此，建議通過加強飼養管理和改善養殖環境增強雞群的免疫力，減少不良應激的影響，避免和降低疫病的發生。

參考文獻：

[1]? 崔秀麗.雞傳染性喉氣管炎的流行病學、臨床癥狀、鑒別診斷和防控措施[J].現代畜牧科技，2022，86（2）：115-116.

[2]? 李賦.雞大腸桿菌病的流行病學及中西藥防治[J].中國動物保健，2022，24（10）：69-70.

[3]李海利，易秀玲，郎利敏，等.雞傳染性喉氣管炎病毒PCR檢測方式的建立和應用[J].現代畜牧獸醫，2016，328（3）：1-7.

[4]? 忻效福，丁勇. 雞傳染性喉氣管炎老病新發防控[J].養殖與飼料，2017（2）：70-71.

[5]? 冷秋仙，王群義，劉紅祥，等. 雞傳染性喉氣管炎流行新特點及防控措施[J].家禽科學，2016（2）：44-45.

[6]? 袁敬知，楊莉瑤，陳思宇，等.活禽產業鏈中大腸桿菌耐藥性及耐藥基因調查[J].中國畜牧獸醫，2021，48（7）：2661-2670.

[7]? ?李娟，劉秋晨，翟宏旭，等.雞源大腸桿菌分離鑒定、耐藥分析及與乳桿菌體外競爭研究[J].黑龍江畜牧獸醫，2019，579（15）：101-104.