GPC-1和CA19-9在肝內膽管細胞癌組織中表達與預后的關系*

郭 丹 崔大鵬 韓 帥 李紫宣 馮志林 張迎春 連晶晶 劉 博

1.河北北方學院附屬第一醫院肝膽外科 (河北 張家口, 075000) 2.河北北方學院附屬第一醫院創傷急救外科 3.河北北方學院附屬第一醫院麻醉科 4.河北北方學院附屬第一醫院核醫學科 5.河北北方學院附屬第一醫院病理科

肝內膽管細胞癌(ICC)為臨床常見的一種原發性惡性腫瘤,近年來其發病率不斷上升,肝硬化、肝炎病毒感染及肝內膽管結石等均是影響其發生的危險因素[1,2]。在臨床中,ICC主要采用根治性手術方法進行治療,但患者術后復發、預后情況較差。糖鏈抗原19-9(CA19-9)表面的糖蛋白能夠傳遞信息,當正常細胞出現惡變時其水平較高[3],在臨床中已被作為腫瘤診斷、評估的重要標志物,但關于其對腫瘤患者預后的預測價值存在較多爭議[4,5]。磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC-1)為肝素結合生長因子共受體,附著于細胞膜表面,在多種腫瘤中均呈陽性表達,可影響腫瘤細胞的轉移及生長[6]。本研究分析GPC-1、CA19-9在ICC組織中的表達并探究其與患者臨床病理、預后的關系,為改善患者預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年7月至2018年12月本院收治的108例ICC患者手術切除的癌組織及癌旁組織蠟塊,均經病理科證實。108例患者中男67例,女41例;年齡42～75歲,平均(59.33±7.40)歲;TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期55例,Ⅲ～Ⅳ期53例;腫瘤直徑2～6 cm,平均(4.32±1.17)cm;中低分化41例,高分化67例。納入標準：①所有患者均行根治性手術治療;②經病理學檢測均確診為ICC患者;③所有患者病例資料詳細完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者;②存在嚴重腎功能疾病者;③為復發腫瘤者;④術前進行放化療或有遠處轉移的患者。本研究經倫理委員會批準(批號：2014-0602)。

1.2 試劑與儀器 GPC-1單克隆抗體(貨號：CSB-PA009703LA01HU)購置武漢華美生物工程有限公司;CA19-9抗體(貨號：FNab10532)購置武漢菲恩生物科技有限公司;山羊抗兔IgG抗體(貨號：GtxRb-003-E3EUR)購置武漢艾美捷科技有限公司;二氨基聯苯胺(DAB)酶底物顯色試劑盒購置福州邁新生物公司;石蠟切片機RM 2016、石蠟包埋機EG1150H均購置德國Leica;光學顯微鏡BX 45購置日本Olympus。

1.3 免疫組織化學法檢測GPC-1、CA19-9表達情況 將從病理科收集的石蠟包埋組織制成厚度為4 μm的切片,依次進行常規二甲苯脫蠟,乙醇、蒸餾水水化,枸櫞酸鹽緩沖液修復抗原,PBS沖洗后加入體積分數為3%的過氧化氫去離子水阻斷內源性過氧化物酶反應10 min,加入一抗并在4℃下孵育過夜,PBS沖洗后加入二抗室溫孵育30 min,DAB顯色,蘇木素復染,脫水、封片。PBS代替一抗作為陰性對照。上述操作嚴格按照試劑盒說明書進行。在高倍鏡(×400)下隨機選取3個視野觀察,結果判定采用兩級標準計分法,染色強度評分：無染色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計0分、1分、2分、3分。陽性細胞占比<26%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分。將上述兩項評分結果相乘進行判定：<3分為陰性,≥3分為陽性[7]。由2位高年資醫師進行雙盲法閱片。

1.4 隨訪 患者術后每6個月隨訪1次,隨訪開始時間為手術結束后,直至患者死亡或2021年12月,記錄隨訪期間復發、轉移等情況,以死亡為終點事件。

1.5 統計學方法 使用SPSS 20.0軟件進行統計分析,計數資料采用n(%)描述,行χ2檢驗。癌組織及癌旁組織GPC-1、CA19-9表達比較采用配對卡方檢驗。Spearman法分析癌組織中GPC-1和CA19-9表達的相關性;Kaplan-Meier曲線分析GPC-1及CA19-9表達與患者預后的關系。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中GPC-1、CA19-9表達情況 ICC癌組織GPC-1及CA19-9陽性表達率分別為70.37%(76/108)、75.00%(81/108),均明顯高于癌旁組織9.26%(10/108)、17.59%(19/108)(χ2=84.159,P<0.001;χ2=71.578,P<0.001)。

2.2 癌組織中GPC-1、CA19-9表達相關性分析 見表1。

2.3 GPC-1、CA19-9表達與ICC病理特征關系 見表2。

表2 GPC-1、CA19-9表達與ICC臨床病理特征的關系 (n,%)

2.4 GPC-1、CA19-9表達與ICC患者預后的關系 ICC患者總生存率為44.44%(48/108),GPC-1陽性表達患者生存率為28.95%(22/76),陰性表達患者生存率為81.25%(26/32)(Log RanK=21.768,P<0.001);CA19-9陽性表達患者生存率為34.57%(28/81),陰性表達患者生存率為74.07%(20/27)(Log RanK=12.796,P<0.001),見圖1。ICC患者復發率為56.48%(61/108),GPC-1陽性表達患者復發率為72.37%(55/76),陰性表達患者復發率為18.75%(6/32)(Log RanK=24.087,P<0.001);CA19-9陽性表達患者復發率為66.67%(54/81),陰性表達患者復發率為25.93%(7/27)(Log RanK=11.870,P=0.001),見圖2。

圖1 不同GPC-1、CA19-9表達ICC患者生存曲線

圖2 不同GPC-1、CA19-9表達ICC患者復發情況分析

3 討論

GPC-1為硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族中的一員,是由糖、蛋白質和脂質等組成的復雜復合物,可附著于細胞膜表面[8]。國外研究顯示,GPC-1絲氨酸殘基與硫酸乙酰肝素鏈相連,然后由硫酸乙酰肝素鏈通過與各種細胞因子結合而發揮其對細胞的調控作用[9,10]。倪文等[11]、陸飛等[12]研究顯示,GPC-1作為細胞膜共受體,正常機體中無表達或表達量非常低,在多種腫瘤細胞中呈陽性表達,在癌變過程中起著關鍵作用,且與腫瘤的轉移及增殖有關。Duan等[13]研究指出,GPC-1可作為預測胰腺癌生存期的重要因素。但是還有學者研究認為,GPC-1在不同腫瘤類型中表達的差異很大,其在胰腺癌、乳腺癌以及肝癌等腫瘤中呈現異常高表達,而在肺癌、子宮內膜癌等腫瘤中表達量很低,認為其在不同腫瘤類型中的作用可能是不同的[14,15]。本研究結果顯示,ICC癌組織中GPC-1陽性表達率明顯高于癌旁組織,且GPC-1表達與ICC患者腫瘤大小、包膜浸潤、淋巴結轉移、TNM分期及分化程度有關,但與年齡、性別、肝硬化等無關,提示其可能與ICC的發生有關。通過對患者預后情況分析發現,GPC-1陽性表達患者生存率顯著低于陰性表達患者生存率,復發率高于陰性表達患者,因此,臨床應用時應對GPC-1陽性表達患者實施針對性干預,以緩解其預后。

CA19-9屬于低聚糖蛋白,是由膽道導管細胞、胰腺細胞等產生的連體Lewis血型抗原蛋白,在機體健康狀態下CA19-9僅有少量存在,當機體細胞出現癌變時將會有大量CA19-9釋放,造成機體CA19-9異常升高[16]。有學者認為,CA19-9在胰腺及膽管等消化道腫瘤中的水平明顯升高,為臨床診斷消化道腫瘤的常用血清腫瘤標志物[17,18]。吳慧娟等[18]研究顯示,CA19-9對ICC具有較高的診斷價值。但是關于CA19-9在ICC組織中的表達情況與患者生存期的關系目前尚未見報告,因此本研究通過檢測ICC患者組織中CA19-9表達情況發現,與癌旁組織相比,ICC癌組織中CA19-9陽性表達率明顯升高,并且其表達與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結轉移及分化程度有關,提示CA19-9可能與ICC的發生有關;其中淋巴結轉移是ICC的主要轉移方式,而TNM分期是評估ICC疾病嚴重程度的關鍵,此結果更加說明CA19-9異常表達對ICC疾病的發生、發展及預后具有極大的影響。本研究發現,CA19-9陽性表達患者生存率顯著低于陰性表達患者生存率,復發率高于陰性表達患者,進一步提示CA19-9表達異常可影響患者預后。本研究還發現癌組織中GPC-1與CA19-9存在顯著正相關性,表明GPC-1與CA19-9共同參與ICC的發生,影響ICC患者病情及預后。