TRAIP在原發(fā)性肝細胞癌中表達及其在病理診斷和預后中的意義*

蔡小艷 馬登云 逯金海 馬穎才

1.青海紅十字醫(yī)院病理科 (青海 西寧, 810001) 2.青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科

原發(fā)性肝細胞癌(HCC)是全球最常見惡性腫瘤之一,也是全球癌癥相關(guān)死亡第3大原因[1]。由于早期無特異性癥狀、缺乏早期診斷標志物、根治性可切除HCC的比例較低,大多數(shù)HCC患者往往被診斷為晚期,且其預后較差,5年生存率僅為17%～53%[2]。目前,根治手術(shù)為HCC最有效治療方法,但僅在疾病早期階段有效,而大多數(shù)患者確診時已處于晚期,喪失了手術(shù)機會。有研究發(fā)現(xiàn),腫瘤復發(fā)及腫瘤轉(zhuǎn)移是HCC患者預后不良主要因素[3]。因此,迫切需要對HCC機制的新見解,以確定新的預后分子標志物和潛在有效治療靶點,從而提高患者存活率。泛素化是腫瘤重要相關(guān)生物學過程,近年來已有大量研究表明泛素化過程是介導腫瘤侵襲遷移的重要因素[4]。泛素化家族已被證實在乳腺癌、結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤中具有一定診斷、治療及預后價值,但在HCC中的價值有待進一步探索[5]。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子相互作用蛋白(TRAIP)是一種E3泛素蛋白連接酶,由N端環(huán)指基序和推定卷曲螺旋和亮氨酸拉鏈樣結(jié)構(gòu)域組成。據(jù)報道[6],TRAIP對DNA修復及紡錘體裝配檢查點控制至關(guān)重要,當細胞退出細胞周期或經(jīng)歷分化時,TRAIP表達下調(diào),且TRAIP與多種癌癥類型病程發(fā)展有關(guān)。然而,關(guān)于TRAIP在HCC中的作用知之甚少[7]。基于此,本研究旨在通過探討TRAIP在HCC中的表達情況,分析其在病理診斷和預后中的意義,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月至2019年2月醫(yī)院收治行手術(shù)切除并經(jīng)病理學確診的60例HCC患者為研究組,其中男37例,女23例,年齡31～75歲,平均(46.32±5.63)歲。另選取同期本院體檢健康者60例為對照組,其中男34例,女26例,年齡30～75歲,平均(45.85±5.82)歲。兩組研究對象一般資料比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 納入及排除標準 HCC患者納入標準：①符合HCC診斷標準[8]：乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染(HBV或HCV抗原陽性);影像學特征：多期CT或增強磁共振成像(MRI)檢查顯示肝臟占位在動脈期快速不均質(zhì)血管強化,而靜脈期或延遲期快速洗脫,結(jié)節(jié)≥1 cm;血清甲胎蛋白(AFP)≥400 μg/L持續(xù)1個月或≥200 μg/L持續(xù)2個月。②病理活檢初次確診為HCC者;③無治療禁忌證;④檢測前未使用化療藥物、靶向藥物;⑤臨床資料完整。健康者納入標準：①無其他系統(tǒng)癌癥病史;②無甲、乙、丙、丁、戊型肝炎。排除標準：①合并嚴重心、肺、腎功能障礙者;②伴有嚴重精神類疾病者;③活動性肝炎患者;④藥物或酒精肝損傷者。

1.3 觀察指標與方法 ①比較兩組研究對象血清TRAIP水平,取研究組患者化療后清晨空腹靜脈血4 ml,對照組患者取體檢外周靜脈血4 ml,離心后取上清液,得血清,放置冷凍箱保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測血清中TRAIP水平,試劑盒由上海擇業(yè)生物科技有限公司提供,操作步驟按照說明書進行。②HCC患者血清TRAIP表達與病理參數(shù)間的關(guān)系,病理參數(shù)包括性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤包膜、微血管侵犯、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(TNM)分期、分化程度等。③HCC患者TRAIP表達與其生存預后的關(guān)系。預后判定：60例HCC患者均按照常規(guī)流程治療,出院后隨訪3年統(tǒng)計患者預后情況,以患者疾病進展及死亡為預后不良。④HCC患者預后的單因素Cox比例回歸模型分析。⑤HCC患者預后的多因素Cox比例回歸模型分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象TRAIP表達水平比較 見表1和圖1。

圖1 研究組和對照組血清TRAIP表達水平散點圖

表1 兩組研究對象TRAIP表達水平比較

2.2 HCC患者TRAIP表達水平與病理參數(shù)間的關(guān)系 TRAIP表達水平與HCC患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤包膜無明顯相關(guān)性(P>0.05),但與微血管侵犯、TNM分期和分化程度相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 HCC患者TRAIP表達與HCC患者病理參數(shù)間的關(guān)系 [n(%)]

2.3 HCC患者TRAIP不同表達水平與其生存預后的關(guān)系 根據(jù)隨訪3年結(jié)果及TRAIP在血清的表達進行Kaplan-Meier單因素生存分析顯示,TRAIP高表達組預后生存時間低于TRAIP低表達組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3和圖2。

圖2 TRAIP表達與HCC患者生存時間的生存曲線

表3 HCC患者TRAIP不同表達水平生存時間比較月)

2.4 HCC患者預后的單因素Cox比例回歸模型分析 HCC患者性別、年齡、腫瘤包膜與患者預后不相關(guān)(P>0.05),腫瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表達與患者預后相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 HCC患者預后的單因素Cox比例回歸模型分析

2.5 HCC患者預后的多因素Cox比例回歸模型分析 以HCC患者預后情況為因變量,腫瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表達為自變量,根據(jù)表5進行賦值,將上述賦值納入Cox比例回歸模型中,發(fā)現(xiàn)腫瘤大小>4 cm、微血管有侵犯、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高、TRAIP呈高表達是HCC患者預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表5、6。

表5 賦值

3 討論

HCC是原發(fā)性肝癌最常見疾病類型之一,據(jù)報道,我國肝癌發(fā)病率占惡性腫瘤第2位,死亡數(shù)居第2位[9]。病毒感染(包括HBV和HCV)、肥胖、炎癥、纖維化和肝硬化是HCC的主要危險因素[10]。由于HCC具有高度異質(zhì)性、進展迅速、侵襲度高、易轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為及早期癥狀隱匿、現(xiàn)有篩查診斷方法敏感性與特異性不足,多數(shù)患者失去早期手術(shù)根治良機,手術(shù)切除率不足20%,術(shù)后5年內(nèi)有近70%患者復發(fā),且缺乏系統(tǒng)有效治療藥物,5年生存率僅為40%～50%,甚至更低[11]。術(shù)后高復發(fā)轉(zhuǎn)移率嚴重影響患者長期生存率,是導致HCC預后不良重要原因[12]。因此,深入研究HCC復發(fā)轉(zhuǎn)移機制及生物學特性,對于尋找更有效診斷和預后標志物、有效防治HCC復發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要意義。

泛素化是一種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)細胞命運保守翻譯后蛋白質(zhì)修飾,涉及增殖、分化、凋亡及炎癥等多種生物學功能,TRAIP異位表達可抑制TNF介導的NF-κB活化[13]。已有研究表明,泛素化過程是介導腫瘤侵襲遷移的重要因素[14]。泛素化修飾動態(tài)不可逆,E3泛素連接酶及去泛素化酶對維持泛素化平衡起關(guān)鍵作用。TRAIP是一種環(huán)狀E3泛素連接酶,又稱TRAF相互作用蛋白,是腫瘤壞死因子(TNF)誘導核因子(NF)-κB活化的負調(diào)節(jié)因子,其抑制功能主要通過TRNF2和TRAF1直接相互作用介導[15]。除此之外,TRAIP還參與DNA損傷反應、細胞分裂和致癌作用等許多細胞功能[16]。DNA損傷若不能得到及時修復可能會誘發(fā)免疫缺陷、癌癥等重大疾病。最初,TRAIP被認為是基底細胞癌和乳腺癌的腫瘤抑制因子。有報道稱,TRAIP在肝癌中表現(xiàn)為致癌基因,可通過驅(qū)動肝癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進腫瘤發(fā)生[17]。本研究結(jié)果顯示,研究組TRAIP水平顯著高于對照組,提示TRAIP可能與HCC發(fā)生有關(guān)。分析可能是癌基因所誘導的腫瘤細胞轉(zhuǎn)化的主要防御屏障,凋亡異常與腫瘤發(fā)生密切相關(guān),而TRAIP介導的泛素化推定底物可通過參與細胞周期進程和細胞周期分化的控制,調(diào)節(jié)細胞增殖和凋亡。研究表明,TRAIP在肝癌患者中上調(diào)并在肝癌的發(fā)生發(fā)展中可促進肝癌的惡性行為[18]。本研究顯示,TRAIP表達水平與HCC患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤包膜和AFP無明顯相關(guān)性,但與微血管侵犯、TNM分期和分化程度密切相關(guān),表明TRAIP表達可能是促進HCC惡性發(fā)生發(fā)展的有利因素,其中TNM分期Ⅲ～Ⅳ期HCC患者TRAIP高表達量顯著高于Ⅰ～Ⅱ期,分化程度高HCC患者TRAIP高表達量顯著高于分化程度中、低患者,表明TRAIP促進HCC侵襲。TRAIP高表達能激活NF-κB,而NF-κB激活誘導各種基因表達,并且還抑制細胞死亡,促進細胞凋亡,從而增加HCC惡性程度。

國外有研究表明,TRAIP缺乏能誘導小鼠胚胎發(fā)育中增殖缺陷及細胞凋亡[19]。此外,有研究表明,TRAIP高表達與肝癌患者預后呈負相關(guān)[20]。本研究中采用Kaplan-Meier法分析TRAIP表達水平與HCC患者生存預后關(guān)系發(fā)現(xiàn),TRAIP水平高表達組生存率顯著低于TRAIP水平低表達組,結(jié)果表明TRAIP呈高表達HCC患者預后生存時間較短。癌細胞能夠加速細胞進程,減少細胞凋亡。泛素化是腫瘤重要相關(guān)生物學過程,E3泛素連接酶呈高表達水平時,對細胞凋亡起抑制作用,進而促進腫瘤發(fā)生發(fā)展,降低HCC患者生存率。也有研究指出,TRAIP能通過腫瘤抑制因子調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生及發(fā)展,其高水平可能會促進腫瘤發(fā)展進程[21]。本研究經(jīng)Cox比例回歸模型單因素分析發(fā)現(xiàn),腫瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表達與HCC患者預后相關(guān),提示上述因素可能影響患者預后。本研究分析發(fā)現(xiàn),腫瘤大小>4 cm、微血管有侵犯、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高、TRAIP呈高表達是HCC患者預后的獨立危險因素,表明上述HCC患者更易預后不良。故在治療過程中,應對上述特征HCC患者加強監(jiān)測,及時采取相應治療措施,以提高患者預后生存率。

綜上所述,TRAIP在HCC中表達顯著上調(diào),其表達水平與患者臨床TNM分期、生存情況密切相關(guān),能促進HCC遷移及侵襲,TRAIP高表達是HCC患者預后不良的危險因素,是預測HCC患者預后新靶點,同時也是HCC發(fā)生發(fā)展的影響因素,有望成為HCC潛在治療新靶點。但本研究納入HCC樣本量較少,未來應擴大樣本量進一步驗證TRAIP表達對HCC病理診斷及預后的影響。