過敏性鼻炎患者IgE、miR-487b和EOS水平分析及其與VAS評分的相關性*

馬熒雪,繆陶林,莊強爾

無錫市兒童醫院耳鼻咽喉科,江蘇無錫 214000

過敏性鼻炎(AR)是易感機體接觸過敏原后受到免疫球蛋白IgE介導并造成Ⅰ型變態反應的表現之一,該過程由多種免疫細胞和細胞因子參與[1-2]。AR患兒主要的臨床表現包括鼻通氣性差、有明顯癢感、出現大量清水樣涕及陣發性噴嚏,多數患兒病程較長且呈季節性發病,一定程度上會影響患兒的生活質量[3-4]。有學者圍繞AR的發病機制進行分析發現嗜酸細胞(EOS)的水平異常增加是其主要病理表現[5]。微小RNA-487b(miR-487b)被認定可以實現對蛋白質的轉錄調控進而影響機體的炎癥反應,并對巨噬細胞產生負調控作用,提示miR-487b可能參與AR的發生過程[6]。另外,研究發現患兒出現明顯過敏反應的主要機制為IgE介導的Ⅰ型變態反應,針對該指標的臨床檢測也成為目前常用的診斷方式,檢測血清特異性IgE水平并觀察患兒陽性反應變化情況,可明確患兒過敏源并開展針對性地治療,對改善患兒臨床癥狀、提高生活質量具有積極作用[7]。因此本研究對AR患兒IgE、miR-487b和EOS水平進行分析,探討其與患兒疼痛程度的相關性,現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2020年1月至2022年6月在本院門診確診為AR的共98例患兒納入研究作為AR患兒組。另外,選取同期在本院接受體檢的健康兒童66例作為對照組。AR患兒組中,男56例,女42例;年齡4～12歲,平均(8.16±2.14)歲;病程3個月至3年,平均(6.25±1.01)個月。健康對照組中,男39例,女27例;年齡3～12歲,平均(7.81±2.22)歲。兩組基線資料包括性別、年齡等數據比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。AR患兒組納入標準:(1)患兒臨床癥狀表現及診斷結果均符合AR診斷標準[8];(2)臨床資料完整;(3)患兒及家屬臨床依從性好,可配合完成本研究相關調查工作直至研究結束。排除標準:(1)合并鼻息肉/鼻腔內腫瘤患兒;(2)患兒在本院就診前6個月內接受過免疫治療、抗過敏藥物治療、激素治療等;(3)合并其他過敏癥狀;(4)具有鼻腔相關手術史;(5)合并肝、腎等嚴重器質性功能障礙病變。

1.2方法

1.2.1IgE檢測 取所有研究對象空腹狀態下肘靜脈血5 mL并收集于促凝管中,30 min后行離心機離心操作,參數設定為3 500 r/min,離心半徑10 cm,持續離心15 min后取上清液(血漿)作為待測標本。應用UniCAP 100E全自動體外免疫診斷儀(瑞典Phadia AB公司)及配套試劑盒檢測特異性IgE水平。

1.2.2以PCR法檢測血漿miR-487b的表達 取1.2.1中分離的血漿標本置于-20 ℃低溫冰箱保存待測。應用實時熒光定量PCR(qPCR)測定研究對象血漿中miR-487b的表達水平。按照試劑盒說明書嚴格完成操作,首先提取研究對象血樣中血漿總RNA,經異丙醇沉淀濃縮后應用75%乙醇完成洗滌并干燥,之后加入100 μL DEPC水,對所得RNA純度及完整度進行檢測并明確;按照逆轉錄試劑盒說明書完成cDNA逆轉錄,之后置于-20 ℃保存備用。qPCR反應(反應體系20 μL):上下游引物各1 μL,雙蒸水6 μL,每一樣本設定3個平行檢測孔。上下游引物、內參基因引物由上海恒斐生物科技有限公司設計并合成,miR-487b的檢測以U6為內參。引物序見表1。反應條件:預變性 95 ℃ 8 min;在90 ℃環境下持續變性20 s,之后60 ℃環境下完成退火并持續40 s,在72 ℃環境下延伸25 s,共持續40個循環。采用2-ΔΔCt法計算血漿中miR-487b相對表達水平。

表1 qPCR引物序列

1.2.3以全自動血液細胞分析儀檢測EOS水平 采用空腹狀態下取得的抗凝靜脈血標本進行EOS檢測,使用的檢測儀器為邁瑞BC5150全自動血液細胞分析儀。

1.2.4以視覺模擬量表(VAS)評分評估患兒疼痛程度 AR患兒均根據自身臨床癥狀填寫VAS評分(其得分可采用cm作為計量單位,使用0～10 cm來表示):以VAS評分<5.3 cm為輕度,≥5.3 cm為中重度[9]。

1.3觀察指標 (1)對比兩組各指標水平;(2)對比不同嚴重程度AR患兒各指標水平;(3)分析各指標單一檢測及三項聯合檢測模式對AR的診斷效能;(4)分析各指標與AR患兒VAS評分的相關性。

2 結 果

2.1比較兩組IgE、miR-487b和EOS水平 AR患兒組IgE、EOS水平均明顯高于對照組(P<0.05);AR患兒組miR-487b表達水平明顯低于對照組(P<0.05),見表2。

表2 兩組IgE、miR-487b和EOS表達情況對比

2.2比較不同嚴重程度AR患兒IgE、miR-487b和EOS水平 根據AR患兒病情嚴重程度進行評估并建立亞組,分別為輕度AR組(51例)和中重度AR組(47例),對比兩組各指標水平,結果顯示,隨著AR患兒病情嚴重程度的增加,其IgE、EOS水平呈升高的趨勢,其miR-487b表達呈下降趨勢(均P<0.05),見表3。

表3 不同嚴重程度AR患兒IgE、miR-487b和EOS表達情況對比

2.3分析IgE、miR-487b和EOS單一檢測及三項聯合檢測模式對AR的診斷效能 ROC曲線分析顯示,IgE、miR-487b和EOS單一檢測的曲線下面積均較低,三項聯合檢測的曲線下面積明顯高于單一指標檢測(AUC=0.908,P<0.05),見表4、圖1。

圖1 IgE、miR-487b、EOS單項及聯合檢測對AR的診斷價值分析

表4 IgE、miR-487b、EOS單項及聯合檢測對AR的診斷價值分析

2.4IgE、miR-487b和EOS與AR患兒VAS評分的相關性 Pearson相關分析顯示,IgE、EOS與VAS評分呈正相關(r=0.581、0.594,P<0.05),miR-487b水平與VAS評分呈負相關(r=-0.587,P<0.05),見圖2～4。

圖2 IgE與VAS評分的相關性

圖3 miR-487b與VAS評分的相關性

圖4 EOS表達與VAS評分的相關性

3 討 論

AR是臨床耳鼻喉科常見的一類病癥,隨著人們居住環境污染程度的加劇,AR發病率也呈現逐年遞增態勢[10]。AR患兒發病若不給予科學合理的干預治療方案,隨著病情進展很可能會引發哮喘、分泌性中耳炎等病癥。現階段臨床針對AR發病因素進行了探討,多數學者認為是抗原進入易過敏個體內引起相關炎癥介質的大量釋放加劇了炎癥反應[11]。

本研究針對AR患兒及健康受試者進行對比研究,發現AR患兒IgE水平較健康兒童明顯增高,而且隨著病情程度的增加,該指標水平呈升高趨勢,原因可能是與AR發病機制有關。既往研究已證實AR發病主要是機體內IgE介導的、以EOS浸潤為主的慢性炎癥。受AR患兒自身過敏體質影響,當機體吸入變應原后所產生的特異性IgE與自身鼻黏膜肥大細胞和嗜堿性粒細胞處聚集的IgE受體進行結合,當患兒再次吸入變應原時,與靶細胞表面的IgE結合后釋放大量炎癥介質介質進而引發AR[12]。

本研究結果顯示,AR患兒EOS水平較健康兒童明顯升高,而且隨著病情程度的加劇,患兒EOS水平更高,分析原因可能是EOS在機體內的作用機制有關。EOS屬于一類具有免疫監視的效應細胞,EOS的活化會到導致炎癥介質釋放并加劇各類炎癥反應。EOS可導致鼻黏膜受損,增加鼻黏膜的敏感性。相關研究顯示[13],EOS活化不僅會造成機體發生過敏性疾病的風險增加,一定程度上也會影響患者的病情發展程度。本研究結果與既往研究結果基本一致,分析原因可能是AR發作過程中上皮細胞、成纖維細胞等所釋放的炎癥因子促使EOS分化并趨化遷移至鼻黏膜。同時嗜酸性粒細胞、上皮細胞和肥大細胞可以分泌多種炎癥因子,使鼻黏膜組織中EOS呈現高表達。EOS活化后的產物可合成大量毒性物質,進而引發呼吸道黏膜上皮損傷,加重局部的炎癥反應[14]。既往關于一項AR發病機制的研究指出,EOS的異常表達可導致小血管壁損傷并加劇局部通透性,進而造成組織水腫及血漿外滲,加重鼻部癥狀,與本研究結果基本一致[15]。

既往有學者研究發現miR-487b可抑制炎癥介質進而減輕心力衰竭患兒機體炎癥反應程度[16]。而一項動物實驗結果發現,AR模型小鼠miR上調可以抑制炎癥介質表達,進而起到抑制AR的效用,提示miR-487b是治療AR的潛在治療靶點[17]。本研究結果顯示,miR-487b在AR患兒人群呈現低表達,而且隨著患兒病情程度的加劇呈現下降趨勢,提示miR-487b對AR病情的發生發展具有一定參與作用,而出現這一差異的原因可能是miR-487b在患兒機體中起到抑制炎癥反應的效用。miR-487b是14q32miRNA簇成員之一,臨床研究顯示該miRNA在機體炎癥狀態下可實現對基因轉錄的有效抑制,進而對炎癥相關因子起到抑制作用;miR-487b在人體內可靶向控制IL-33,miR-487b表達上調可實現對炎癥因子的抑制效用,并提示miR-487b可能是AR的相關有效檢測指標。

另外,本研究建立ROC曲線進行分析發現,IgE、miR-487b、EOS三項指標對診斷AR病情程度均有一定效用,但三者聯合檢測診斷效能更高,提示后續臨床可通過上述三項指標明確患兒病情發展程度并針對性給予有效治療。AR的過敏原主要以吸入性過敏原(以戶塵螨和粉塵螨為主)為主。VAS評分能較好地反映AR患兒的疾病嚴重程度。采用Pearson相關系數分析發現,IgE、EOS水平與VAS評分呈正相關,miR-487b表達與VAS評分呈負相關,也進一步提示上述三項指標可有效反映出患兒臨床癥狀嚴重程度。

綜上所述,IgE、miR-487b和EOS對AR患兒的診斷效能較高,而且三項指標聯合檢測的效能更高。IgE、miR-487b和EOS水平與AR患兒疼痛程度密切相關,提示臨床可密切觀察AR患兒IgE、miR-487b和EOS水平并完善相應診療方案,減輕患兒臨床不良癥狀,促進患兒快速康復。但本研究也存在一定不足,如樣品量較少且整個研究時間較短,可能會使研究結果出現偏倚性,后續研究中會繼續擴大樣本量及樣本范圍,深入分析相關機制來提高研究的科學性和結論的準確性。