病毒性心肌炎患者外周血心肌酶譜和miR-26b miR-19b表達(dá)變化分析及與預(yù)后的關(guān)系

王小芳, 林 琳, 雷 蕾, 魯紅娥, 雷 朝, 劉基燕

(1.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科, 陜西 西安 710000 2.延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 陜西 延安 716000)

病毒性心肌炎由嗜心性病毒感染引起,具有較高的發(fā)病率[1]。該病的臨床癥狀不夠明顯,當(dāng)感染引發(fā)心臟傳導(dǎo)阻滯時就會嚴(yán)重威脅患者生命安全。病毒可以破壞細(xì)胞膜的完整性,進(jìn)而影響谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate a minotransferase AST)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)及肌酸激酶(creatine kinase,CK)等心肌酶的水平,侵害心肌細(xì)胞及組織,檢測此人群外周血會出現(xiàn)心肌酶指標(biāo)的變化,且心肌酶指標(biāo)水平變化程度還能預(yù)測患者預(yù)后情況[2,3]。但是單純使用心肌酶指標(biāo)預(yù)測病毒性心肌炎病情程度及預(yù)后的特異度較低,臨床亟待找尋更加靈敏的生物學(xué)標(biāo)志物[4]。微小RNA(mirco RNA,miRNA)參與了細(xì)胞增殖及凋亡過程,其與心臟疾病有著密切關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn),miR-26家族在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中有重要作用,有關(guān)其家族內(nèi)的miR-26b與病毒性心肌炎的作用機(jī)制及其與預(yù)后的關(guān)系較少有臨床報道[5]。miR-19b具有促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。也有研究表明miR-19b具有調(diào)控動脈粥樣硬化、心肌纖維化等過程的作用。缺血損傷心肌細(xì)胞中miR-19b表達(dá)水平較正常心肌細(xì)胞升高[6]。研究表明,病毒性心肌炎患者miR-19b表達(dá)水平顯著高于健康者,提示miR-19b的表達(dá)促進(jìn)了疾病的發(fā)生[7]。目前有關(guān)miR-26b、miR-19b的變化特點(diǎn)及與病毒性心肌炎患者預(yù)后結(jié)局關(guān)系的研究較少。本研究探討病毒性心肌炎患者外周血心肌酶學(xué)指標(biāo)、血清miR-26b、miR-19b的變化及與患者預(yù)后結(jié)局的關(guān)系,以期為臨床提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院2020年11月至2022年8月收治的116例病毒性心肌炎患者作為心肌炎組、另外選取同期健康體檢的非心肌炎志愿者60例作為對照組。兩組患者的基礎(chǔ)資料比較見表1,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn):①病毒性心肌炎參考《成人急性病毒性心肌炎診斷參考標(biāo)準(zhǔn)》中的標(biāo)準(zhǔn)[8];②年齡19～65歲;③患者具有病毒感染史,經(jīng)血清學(xué)、心肌酶學(xué)等輔助檢查確診;④伴有心電圖改變、心臟超聲檢查提示心功能異常;⑤對照組為體檢志愿者,心電圖檢查無異常,心肌酶學(xué)指標(biāo)檢查無異常;⑥本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)規(guī)定,相關(guān)檢查及治療獲得患者本人的知情同意并簽署協(xié)議。排除標(biāo)準(zhǔn):①心臟起搏器植入患者、急性心肌梗死患者;②患有感染性心內(nèi)膜炎;③癌癥患者或器官移植患者;④患有血液系統(tǒng)疾病;⑤患有嚴(yán)重的肝腎功能疾病;⑥伴有急性傳染病;⑦伴有精神疾病或免疫系統(tǒng)疾病。

表1 兩組研究對象的一般資料情況

1.2指標(biāo)檢測方法:血清心肌酶譜測定:采集患者空腹靜脈血4mL,以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min,取上清液待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、AST、LDH、肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)、心肌型肌酸激酶同工酶(MB fraction of creatine kinase,CK-MB)、CK水平,試劑盒購于北京丹大生物技術(shù)有限公司。血清收集與上述過程一致,使用Bio-Rad熒光定量PCR儀檢測血清中miR-26b、miR-19b表達(dá)水平。所用到的引物購自上海生工生物工程股份有限公司。根據(jù)Trizol試劑盒(上海碧云天有限公司)提取各組總RNA,根據(jù)美國Ambion公司生產(chǎn)的RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。qRT-PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)熱1min,55℃反應(yīng)1min,72℃反應(yīng)1min,72℃延長5min,共40個循環(huán)。收集數(shù)據(jù),以U6為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt法計算miR-26b、miR-19b相對表達(dá)量。

1.3隨訪方式及預(yù)后結(jié)局判斷:對病毒性心肌炎患者進(jìn)行6個月的隨訪,患者治療后采取電話、來院復(fù)查形式進(jìn)行隨訪觀察,如果患者出現(xiàn)以下任何一種情況:死亡、再次出現(xiàn)心力衰竭入院、心臟移植、心律失常入院或心肌炎復(fù)發(fā)等作為預(yù)后不良?xì)w為預(yù)后不良組,未出現(xiàn)不良事件歸為預(yù)后良好組。

2 結(jié) 果

2.1心肌炎組和對照組患者的心肌酶學(xué)指標(biāo)、miR-26b、miR-19b表達(dá)水平比較:心肌炎組患者的ALT、AST、LDH、cTnI、CK-MB、CK、miR-19b表達(dá)水平高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);心肌炎組患者的miR-26b相對表達(dá)強(qiáng)度低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 心肌炎組和對照組患者的心肌酶學(xué)指標(biāo) miR-26b miR-19b表達(dá)水平比較

2.2不同預(yù)后結(jié)局的心肌炎患者各項基礎(chǔ)資料比較:根據(jù)6個月隨訪,預(yù)后不良患者36例,其中死亡2例、再次出現(xiàn)心力衰竭入院18例、心律失常入院9例、心肌炎復(fù)發(fā)7例;預(yù)后良好組和預(yù)后不良組患者的年齡、BMI、性別、胸痛發(fā)生情況進(jìn)行兩組之間對比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);預(yù)后不良組的收縮壓、舒張壓低于預(yù)后良好組,預(yù)后不良組患者的心率頻率、胸悶、心肌、乏力、呼吸頻率、房撲/房顫、房室傳導(dǎo)阻滯、束支阻滯均高于預(yù)后良好組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 不同預(yù)后結(jié)局的心肌炎患者各項基礎(chǔ)資料比較

2.3不同預(yù)后結(jié)局的心肌炎患者心肌酶學(xué)指標(biāo)、miR-26b、miR-19b表達(dá)水平比較:預(yù)后不良組患者的ALT、AST、LDH、cTnI、CK-MB、CK、miR-19b表達(dá)水平顯著的高于預(yù)后良好組,上述指標(biāo)的兩組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);預(yù)后不良組患者的miR-26b相對表達(dá)強(qiáng)度顯著低于預(yù)后良好組且指標(biāo)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表4。

表4 不同預(yù)后結(jié)局的心肌炎患者心肌酶學(xué)指標(biāo) miR-26b miR-19b表達(dá)水平比較

2.4影響心肌炎患者預(yù)后結(jié)局的多因素分析:以單因素分析具有統(tǒng)計學(xué)意義的ALT、AST、LDH、cTnI、CK-MB、CK、miR-19b、miR-26b、收縮壓、舒張壓、心率頻率、呼吸頻率、房撲/房顫(0=否、1=是)、房室傳導(dǎo)阻滯(0=否、1=是)、束支阻滯(0=否、1=是)、胸悶(0=否、1=是)、心肌(0=否、1=是)、乏力(0=否、1=是)作為自變量,以患者6個月的隨訪結(jié)局作為因變量(0=預(yù)后良好、1=不良預(yù)后)建立Logistic回歸模型,結(jié)果顯示:房撲/房顫、房室傳導(dǎo)阻滯、束支阻滯、ALT增高、AST增高、LDH增高、cTnI增高、CK-MB增高、CK增高、miR-19b增高、miR-26b降低是心肌炎患者不良預(yù)后結(jié)局的獨(dú)立危險因素(P<0.05),見表5。

表5 Logistic回歸多因素模型結(jié)果

3 討 論

病毒性心肌炎具有較高的發(fā)病率,嚴(yán)重威脅患者生命健康。心肌酶指標(biāo)已廣泛應(yīng)用于心肌功能異常相關(guān)疾病診斷中,本研究探究病毒性心肌炎患者血清心肌酶指標(biāo)水平。本研究結(jié)果顯示:心肌炎組患者的AST、ALT、cTnI、LDH、CK、CK-MB水平較對照組高;預(yù)后不良組上述指標(biāo)水平較預(yù)后良好組顯著增高。提示心肌酶譜指標(biāo)變化可以用作病毒性心肌炎診斷及預(yù)后的評估指標(biāo)。病毒性心肌炎患者心肌功能受損,心肌酶廣泛在心肌及腦組織中有分布,在外周血中含量相對較少,外周血心肌酶水平可以對心肌細(xì)胞的通透性進(jìn)行評估。病毒入侵心肌后,會破壞細(xì)胞膜完整性,此時上述心肌酶指標(biāo)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),對心肌造成損傷,影響患者預(yù)后。不同病毒感染對病毒性心肌炎患者心肌損傷的影響不同,僅通過心肌酶指標(biāo)預(yù)測患者預(yù)后可能存在差異,因此還需要納入其他指標(biāo)來共同分析。

miRNA與靶RNA非編碼區(qū)特異性結(jié)合后可對蛋白翻譯過程產(chǎn)生影響。miRNA已被證實(shí)能夠?qū)λ拗骷安《净虻谋磉_(dá)過程進(jìn)行調(diào)控,在很多疾病中均具有一定作用[9]。本研究結(jié)果顯示:心肌炎組患者的miR-19b表達(dá)水平高于對照組,而miR-26b則低于對照組。Logistic回歸分析模型結(jié)果顯示:miR-19b增高、miR-26b降低是心肌炎患者不良預(yù)后結(jié)局的獨(dú)立危險因素。miR-19b是目前研究較多的miRNA基因簇成員,其促進(jìn)癌細(xì)胞增殖的作用已被大量研究證實(shí)。亦有研究表明其還能對動脈粥樣硬化、心肌纖維化過程進(jìn)行調(diào)控。在病毒性心肌炎中,miR-19b大量表達(dá)促進(jìn)了心肌的纖維化進(jìn)程,誘導(dǎo)心肌出現(xiàn)炎癥及壞死,在預(yù)測患者預(yù)后就有重要價值。

有研究稱[10],miR-26可通過調(diào)控炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)參與炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展。本文結(jié)果說明miR-26b呈現(xiàn)低表達(dá)會加重心肌受損,提示其可認(rèn)為是心肌保護(hù)因子。已有研究顯示,心肌肥厚患者的miR-26b水平有降低趨勢[11]。本研究提示miR-26下調(diào)可作為預(yù)測病毒性心肌炎潛在危險因素。分析miR-19b、miR-26b指標(biāo)水平與患者預(yù)后的關(guān)系,病毒性心肌炎患者心肌狀態(tài)異常,使調(diào)控miRNA因子發(fā)生異常,miR-26b水平降低,miR-19b水平升高,加重心肌損傷?？苫谄渌皆u估病毒性心肌炎患兒預(yù)后。本研究檢測的血清學(xué)指標(biāo),今后可再結(jié)合其他類型樣本同時檢測。

病毒性心肌炎是能導(dǎo)致心功能障礙的全身性疾病,準(zhǔn)確診斷及評估預(yù)后有利于對臨床決策的制定提供依據(jù)。本研究Logistic回歸分析結(jié)果顯示:房室傳導(dǎo)阻滯、房撲/房顫、束支阻滯、ALT增高、AST增高、LDH增高、cTnI增高、CK-MB增高、CK增高、miR-19b增高、miR-26b降低是心肌炎患者不良預(yù)后結(jié)局的獨(dú)立危險因素。提示上述指標(biāo)可以預(yù)測患者預(yù)后,臨床需要積極監(jiān)測。病毒性心肌炎患者首發(fā)癥狀為胸痛,但是此癥狀不具有特異性,易掩蓋病毒性心肌炎的特殊癥狀,可能耽誤診斷及治療。病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制尚未有統(tǒng)一定論,埃可病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒以及柯薩奇病毒是其致病的主要病毒,上述病毒易使心肌細(xì)胞受損,進(jìn)一步影響免疫反應(yīng),上述過程對機(jī)體的傷害是持續(xù)性的[12]。部分患者會因為發(fā)生心律失常及炎癥反應(yīng)而預(yù)后較差,持續(xù)性炎癥會逐漸發(fā)展為房室傳導(dǎo)阻滯、束支阻滯,引起心臟組織病變,臨床及時明確病毒性心肌炎的癥狀及危險因素是采取針對性治療及改善預(yù)后的重要環(huán)節(jié)。

基于本研究結(jié)果,病毒性心肌炎的發(fā)生及轉(zhuǎn)歸與心肌酶指標(biāo)及miR-19b、miR-26b表達(dá)量有關(guān)。提示對于心肌受損顯著及功能差的患者應(yīng)該快速有效治療。但本研究樣本量有限,研究結(jié)果還有待前瞻性、大樣本量研究證實(shí)。

綜上所述,病毒性心肌炎患者外周血心肌酶學(xué)指標(biāo)及miR-19b表達(dá)顯著增高、miR-26b表達(dá)顯著降低,并且與患者不良的預(yù)后結(jié)局具有密切關(guān)系。