慢性前列腺炎病人EPS中炎癥相關生物標志物檢測

姜涵中　孫立江

［摘要］目的探討慢性前列腺炎（CP）病人趨化因子、白細胞（WBC）、卵磷脂小體（SPL）、神經生長因子（NGF）的表達水平及其臨床意義。方法根據美國國立衛生研究院的分類標準，收集2020年2月—2021年5月就診的93例Ⅲ型CP病人，其中ⅢA型44例，ⅢB型49例，另外選擇50例健康體檢者作為對照組。采用CP癥狀指數評分表（CPSI）評估病人臨床癥狀，采用酶聯免疫吸附法檢測前列腺液（EPS）中趨化因子單核細胞趨化因子（MCP-1）、巨噬細胞炎癥因子α（MIP-1α）和NGF水平，EPS鏡檢WBC及SPL計數，分析不同分型病人EPS中趨化因子、WBC、SPL和NGF水平差異。結果ⅢA型和ⅢB型病人的WBC計數等級和SPL計數差異有統計學意義（Z=-9.053、-3.056，P<0.05）。ⅢA型和ⅢB型病人WBC、SPL計數與CPSI各項評分無相關性（P>0.05）。與對照組相比，ⅢA型和ⅢB型病人EPS中趨化因子MCP-1、MIP-1α及NGF水平均升高（F=101.397～196.707，P<0.05）；與ⅢA型相比，ⅢB型病人趨化因子MCP-1、MIP-1α水平降低（P<0.05），NGF水平及CPSI總分升高（P<0.05）。CP病人趨化因子MCP-1、MIP-1α與CPSI量表中疼痛和不適評分存在正相關（r=0.405、0.427，P<0.05）。結論Ⅲ型CP病人EPS中趨化因子及NGF均高于對照組。ⅢA型與ⅢB型EPS鏡檢WBC及SPL計數存在差異，WBC和SPL可以用來對CP進行分型，但與CPSI癥狀評分無相關性。MCP-1和MIP-1α可用來評估CP病人的分型和嚴重程度。

［關鍵詞］前列腺炎；趨化因子類；白細胞計數；神經生長因子

［中圖分類號］R697.33;R977.9［文獻標志碼］A［文章編號］2096-5532（2023）03-0397-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2023.59.081［開放科學（資源服務）標識碼（OSID）］

［網絡出版］https：//kns.cnki.net/kcms2/detail/37.1517.R.20230725.0936.001.html;2023-07-2611：47：54

MEASUREMENT OF INFLAMMATORY BIOMARKERS IN EXPRESSED PROSTATIC SECRETION OF PATIENTS WITH CHRO-NIC PROSTATITISJIANG Hanzhong， SUN Lijiang （Department of Urology， The Affiliated Hospital of Qingdao Univer-sity， Qingdao? 266003， China）

［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expression levels of chemokines， white blood cell （WBC） count， small particles of lecithin （SPL）， and nerve growth factor （NGF） and their clinical significance in patients with chronic prostatitis （CP）. Me-thodsAccording to the classification criteria established by the National Institutes of Health， 93 patients with type Ⅲ CP who attended the hospital from February 2020 to May 2021 were enrolled， among whom 44 patients had type ⅢA CP and 49 had type ⅢB CP. A total of 50 individuals who underwent physical examination were enrolled as control group. Chronic Prostatitis Symptoms Index （CPSI） was used to evaluate the clinical symptoms of patients， ELISA was used to measure the levels of chemokines [monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1） and macrophage inflammatory protein-1 alpha （MIP-1α）] and NGF in expressed prostatic secretion （EPS）， and EPS microscopy was used to measure WBC and SPL count. The levels of chemokines， WBC， SPL， and NGF were compared between the patients with different types of CP. ResultsThere were significant differences in WBC and SPL count between the patients with type ⅢA CP and those with type ⅢB CP （Z=-9.053，-3.056;P<0.05）. There was no correlation between WBC/SPL count and CPSI scores in the patients with type ⅢA/ⅢB CP （P>0.05）. Compared with the control group， the patients with type ⅢA/ⅢB CP had significant increases in the levels of the chemokines MCP-1 and MIP-1α and NGF in EPS （F=101.397-196.707，P<0.05）. Compared with the patients with type ⅢA CP， the patients with type ⅢB CP had significant reductions in the levels of the chemokines MCP-1 and MIP-1α （P<0.05） and significant increases in the level of NGF and the total score of CPSI （P<0.05）. The correlation analysis showed that in the patients with CP， the chemokines MCP-1 and MIP-1α were positively correlated with the scores of pain and discomfort in CPSI scale （r=0.405，0.427;P<0.05）. ConclusionThe patients with type Ⅲ CP have higher levels of chemokines and NGF in EPS than the control group， and there are significant diffe-rences in WBC and SPL count between the patients with type ⅢA CP and those with type ⅢB CP. WBC and SPL may be used for the classification of CP， but they are not correlated with CPSI symptom score. MCP-1 and MIP-1α can be used to evaluate the classification and severity of CP patients.

［KEY WORDS］prostatitis; hemotactic factors; leukocyte count; nerve growth factor

慢性前列腺炎（CP） 是由各種病因引起的前列腺組織慢性炎癥，美國國立衛生研究院（NIH）將其分為Ⅰ～Ⅴ型，其中Ⅲ型占90%～95%，Ⅲ型CP分為ⅢA型和ⅢB型，其病因與發病機制尚未完全闡明[1-2]。神經生長因子（NGF）作為神經營養因子，介導炎癥因子和神經痛覺，可導致CP病人疼痛加劇[3]。有研究顯示，不同NIH分型的CP病人前列腺液（EPS）中的炎癥相關因子、趨化因子和免疫細胞遞質存在較大差異，推測機體自身免疫異?？赡苁且餋P發生和分型的重要因素[4]。本研究納入不同CP分型病人的免疫、趨化因子和NGF等指標進行對比分析，同時鏡檢EPS 中白細胞（WBC）及卵磷脂小體（SPL）計數，分析病人CP癥狀指數評分表（CPSI）癥狀與WBC和SPL計數的關系，為進一步探究CP不同分型差異提供理論依據。

1資料與方法

1.1研究對象

1.1.1一般資料2020年2月—2021年5月，收集在我院就診的93例Ⅲ型CP病人，年齡20～63歲，平均（37.4±9.3）歲；病程0.1～3.7年，平均（1.2±0.6）年。另外，選擇50例健康體檢者作為對照組，年齡19～65歲，平均（36.6±8.7）歲。對照組與CP病人的年齡差異無統計學意義（P>0.05）。所有納入研究的病人及其家屬均已簽署知情同意書。

1.1.2納入標準①慢性非細菌性前列腺炎，符合NIH[5]制定的CP（Ⅲ型）診斷標準的病人；②病人骨盆區域各部位出現慢性或反復發作疼痛感，可伴有排尿異常癥狀，持續時間>3個月；③EPS細菌培養無菌生長；④EPS中鏡檢WBC異常升高。

1.1.3排除標準①NIH標準中的Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ型CP病人；②合并睪丸炎等其他類型的泌尿系統炎癥感染病人；③前列腺癌、前列腺結石或急性膀胱炎；④合并其他類型自身免疫性疾病；⑤近3個月接受過免疫治療。

1.2研究方法

1.2.1EPS標本采集收集EPS標本前，囑咐病人多飲水，用浸濕生理鹽水的棉球清洗尿道口，用碘附消毒，由同一位從事相關工作10年以上泌尿科醫生對病人經直腸進行前列腺按摩，收集第1滴EPS置玻片上送常規檢查，其余EPS置于Eppendorf 管中進行病原學檢查。

1.2.2CP分型和分組參考NIH制定的分類標準，根據病原學分類原則，均診斷為Ⅲ型慢性非細菌性前列腺炎、慢性骨盆疼痛綜合征。同時，根據有無炎癥反應分為ⅢA型（炎癥性CP）和ⅢB型（非炎癥性CP）。

1.3觀察指標

1.3.1WBC和SPL計數 臨床檢驗時取出標本，以濕玻片法在400倍顯微鏡下觀察5個高倍鏡視野（HP）下 WBC、SPL 計數，取平均值，根據平均計數進行 分 組。WBC 計 數：計 數 <10/HP 記 為 少 見，10/HP≤ 計 數 ≤20/HP 記 為 +，21/HP≤ 計 數 ≤30/HP記為++，31/HP≤計數≤40/HP 記為+++，計數>40/HP 記為++++。SPL 計數：未見 SPL 或稀疏少見SPL，記為-;SPL分布占視野≤1/4，記為+;占視野>1/4～1/2，記為;占視野>1/2～3/4，記為+++;分布滿視野，記為++++[6]。

1.3.2CPSI量表檢測由具有相關培訓經驗10年以上泌尿科醫師進行指導，由病人根據自身情況填寫CPSI量表。量表主要癥狀項目包括排尿、疼痛、生活質量及癥狀嚴重程度等，每個項目包括9個條目，總分43分，評分越高表明癥狀越嚴重[7-8]。

1.3.3趨化因子和NGF檢測采用酶聯免疫吸附檢測（ELISA）試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司），以雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ABC-ELISA）檢測EPS中趨化因子單核細胞趨化因子（MCP-1）、巨噬細胞炎癥因子α（MIP-1α）水平和NGF水平[9]。

1.4統計學處理

采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析。計數資料用例數表示，等級資料比較行Mann-Whitney 檢驗；計量資料用±s表示，2組均數的比較采用兩獨立樣本的t檢驗，3組均數比較采用單因素方差分析，均數間兩兩比較采用SNK（Student-Newman-Keuls）法；采用Person相關系數分析WBC計數、SPL計數、趨化因子與病人CPSI量表評分的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1鏡檢WBC、SPL計數及其與CPSI量表評分的關系

ⅢA型和ⅢB型病人的WBC計數等級和SPL計數差異具有統計學意義（Z=-9.053、-3.056，P<0.05）。見表1。兩組病人的疼痛和不適癥狀、排尿癥狀、生活質量影響CPSI評分差異無統計學意義（P>0.05），但ⅢB型CPSI總評分高于ⅢA型（t=2.018，P<0.05）。見表2。兩組病人WBC、SPL 計數與CPSI各項評分均無相關性（P>0.05）。

2.2兩組趨化因子水平比較

ⅢA型病人、ⅢB型病人及對照組的趨化因子MCP-1、MIP-1α差異有統計學意義（F=101.397、196.707，P<0.05），與對照組相比，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中趨化因子MCP-1、MIP-1α水平均升高（P<0.05）；與ⅢA型相比，ⅢB型病人MCP-1、MIP-1α水平降低（P<0.05）。見表3。CP病人趨化因子與CPSI量表中疼痛和不適評分存在正相關（r=0.405、0.427，P<0.05），MIP-1α與生活質量影響評分呈正相關（r=0.266，P<0.05）。

2.3兩組NGF水平比較

ⅢA型病人、ⅢB型病人及對照組的NGF差異有統計學意義（F=112.767，P<0.05），與對照組相比，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中的NGF水平均升高（P<0.05）；與ⅢA型相比，ⅢB型病人NGF水平升高（P<0.05）。見表3。

3討論

CP是由各種病因引起的前列腺組織慢性炎癥，可刺激尿道并引發骨盆或會陰區域疼痛，并伴有不同程度的排尿癥狀和性功能障礙，嚴重影響病人生活質量[10-18]。雖然目前還未確定CP的特異性標志物，但多項研究發現CP病人的EPS、尿液和血清中存在多種相關生物標志物。馬成泉等[12]的研究顯示，EPS中的趨化因子、炎性因子和NGF等對CP的實驗室診斷具有重要作用，且CP病情與自身免疫機制也存在一定關系[19-21]。

NIH根據EPS中WBC計數，將Ⅲ型CP分為ⅢA及ⅢB兩個亞型。本文研究分析了兩個亞型的WBC、SPL計數，并將之與CPSI評分進行相關分析，結果顯示，兩個亞型之間WBC、SPL計數差異較大。但相關性分析結果顯示，ⅢA型、ⅢB型病人WBC、SPL計數與CPSI各項評分均無相關性，表明僅依靠WBC、SPL計數無法評判病情嚴重程度，也不能就此評價哪種亞型的病情更嚴重[22]。

趨化因子是由細胞分泌的小細胞因子或信號蛋白，在機體免疫防御時可使免疫細胞定向趨化，調節機體炎癥狀態[13-14]。本研究中，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中趨化因子MCP-1、MIP-1α水平均較對照組升高，且ⅢA型趨化因子水平高于ⅢB型。ⅢA型、ⅢB型病人趨化因子與CPSI量表中疼痛和不適評分存在中等程度正相關。由此來看，EPS中趨化因子水平可以作為CP初步診斷和分型的參考依據，且其水平可以顯性表達病人的生理疼痛和不適感，以此可為臨床采取相應干預措施提供一定參考。

NGF作為一種神經營養因子，可刺激細胞生長，延緩神經退行性病變，成為免疫調節的重要一環[15-16]。從炎癥反應和牽涉痛角度看，神經纖維在外周神經叢交匯，牽涉多種支配內臟和體壁的神經纖維束，分布至盆腔及其以下多個器官。當外來刺激傳入神經纖維，體壁結構接受到的神經沖動可能使傷害感受器致敏，進而形成痛覺過敏。而此時，NGF可促進中樞和外周神經元的生長發育，加快神經系統損傷后的修復，緩解痛覺過敏[23]。本研究中，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中的NGF水平高于對照組，兩種亞型的NGF因子差異也有統計學意義，ⅢB型病人的NGF水平高于ⅢA型病人，且ⅢB型病人CPSI總評分高于ⅢA型，臨床癥狀疼痛程度更高[24-25]。表明炎癥水平增高會引起NGF水平增高，但由前列腺局部引發的炎癥刺激在ⅢA型和ⅢB型CP中存在不同的NGF調控機制，甚至二者可能存在不同的發病機制，需要循此思路作進一步探究。

綜上所述，ⅢA型和ⅢB型CP病人EPS中的WBC、SPL、趨化因子和NGF表達均與其分型有關，可以用這些指標來評估臨床分型；趨化因子還與CP病人的CPSI評分相關，可用來評估病人臨床癥狀的嚴重程度。ⅢB型病人的CPSI總評分和EPS中NGF水平明顯高于ⅢA型，二者可能存在不同的發生或作用機制，需要進一步的研究來探索。

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（本文編輯周曉彬）