乙型肝炎病毒感染患者乙型肝炎病毒DNA載量與外周血CD4+CD25+、白細胞介素33、肝組織病理相關性分析

蔣菁蓉, 張天洪, 高崇勇, 王 元, 魏 超, 陳 婧

成都中醫藥大學附屬醫院 1.感染科;2.繼續教育部;3.急診科,四川 成都 610000;4.重慶醫科大學附屬第一醫院綦江醫院 肛腸科,重慶 401420

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染屬于世界重要公共衛生問題,高達20億人具有HBV感染史,約2.4億人被診斷為慢性HBV感染,每年因HBV感染造成死亡的患者約有65萬[1-2]。有研究報道,我國HBV感染人數占總人口比例約為10.00%[3]。機體長期HBV感染能使肝組織受到持續損傷,促使肝細胞產生纖維化病變,造成肝硬化。HBV-DNA載量可直接反映HBV感染后病毒復制活動情況,其持續增高造成的組織損傷屬于肝硬化形成的主要原因[4]。既往研究表明,HBV感染期間,調節性T細胞參與免疫抑制過程,且與慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)緊密相關[5]。CD4+CD25+能夠有效反映調節性T細胞變化[6]。白細胞介素33(interleukin-33,IL-33)屬于新型炎癥因子,可在CHB肝纖維化病變發生、發展過程中發揮作用[7]。本研究旨在探討HBV感染患者HBV-DNA載量與外周血CD4+CD25+、IL-33水平、肝組織病理的相關性。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取成都中醫藥大學附屬醫院自2021年1月至2022年12月收治的104例CHB患者為研究對象。依據HBV-DNA載量將患者分為高載量組(HBV-DNA載量>1.0×105IU/ml,n=71)與低載量組(1.0×103IU/ml

1.2 研究方法 抽取所有患者空腹靜脈血,以3 000 r/min離心10 min,獲得血清樣本,放入-20℃冰箱存儲待測。通過實時熒光定量聚合酶鏈式反應(polymease chain reaction,PCR)法進行HBV-DNA載量測定。采用酶聯免疫吸附法檢測兩組患者血清IL-33水平,試劑盒由上海心語生物科技有限公司提供。通過流式細胞分析儀(貝克曼庫爾特公司生產,型號CytoFLEX)進行CD4+CD25+測定。肝組織病理檢查:于超聲引導下實施1 s穿刺活檢術,獲得約1.5 cm肝組織,注意其內部結構中有3個及以上完整匯管區,然后放入10%甲醛液固定,常規石蠟包埋處理。分別行蘇木精-伊紅染色、Masson染色、網狀纖維染色,由兩名經驗豐富的病理醫師閱片診斷。參照《病毒性肝炎防治方案》完成肝炎癥活動分級評估和纖維化分期評估[9]。肝炎癥活動分級評估分為G0～G4級,纖維化分期分為S0～S4期,S4期判斷為肝硬化,S2～S3期判斷為明顯纖維化。

2 結果

2.1 兩組患者一般資料比較 兩組患者性別構成、年齡、體質量指數(body mass index,BMI)、吸煙史比例、酗酒史比例比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較/例(百分率/%)

2.2 兩組患者外周血CD4+CD25+、IL-33比較 高載量組患者CD4+CD25+、IL-33均高于低載量組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者外周血CD4+CD25+、IL-33比較

2.3 兩組患者肝組織病理比較 兩組患者纖維化分期、肝炎癥活動分級比較,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者肝組織病理比較/例(百分率/%)

2.4 CD4+CD25+、IL-33與HBV-DNA載量相關性分析 Spearman相關性分析顯示,CD4+CD25+、IL-33與HBV-DNA載量呈正相關性(r=0.492、0.513,P<0.05)。

2.5 多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析顯示,CD4+CD25+、IL-33、纖維化分期、肝炎癥活動分級均為HBV-DNA載量的影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 多因素Logistic回歸分析

3 討論

HBV侵入人體后一般不會直接損傷肝細胞,而是干擾免疫調控系統,造成肝細胞病變。HBV感染后,會在體內繁殖,啟動先天免疫反應,然后建立一種適應性免疫應答反應,在控制HBV的同時導致器官受損[10-11]。調節性T細胞參與免疫應答穩態以及免疫耐受維持過程,在自身免疫疾病、感染免疫、移植以及腫瘤免疫中起免疫調節作用。對于HBV感染者,調節性T細胞水平上調可能抑制其細胞免疫功能,引起免疫耐受,病毒持續存在并不斷復制,為促使CHB發展為肝硬化以及肝癌的關鍵原因[12-13]。

本研究結果顯示,高載量組患者CD4+CD25+、IL-33均高于低載量組,差異均有統計學意義(P<0.05)。這提示,CD4+CD25+、IL-33可能與HBV感染患者HBV-DNA載量有關。CD4+CD25+能夠對HBV感染特異性引起的CD4+、CD8+增殖作用加以抑制,在抗HBV感染免疫反應損傷中起重要作用[14]。人體多種組織中存在IL-33表達,其可在調節性T細胞引起的免疫應答中發揮作用,加重炎癥反應,并對機體免疫平衡狀態進行調節,與多種免疫疾病形成及發展密切相關[15-16]。侯麗娟等[17]研究發現,IL-33表達和HBV感染存在緊密聯系,且能夠反映肝纖維化情況。進一步Spearman相關分析顯示,CD4+CD25+、IL-33與HBV-DNA載量呈正相關(r=0.492、0.513,P<0.05)。這提示,CD4+CD25+、IL-33水平越高,HBV感染患者HBV-DNA載量越大。這可能是由于機體CD4+CD25+水平或功能障礙,減弱了機體對病毒引起的細胞毒性T細胞以及效應T細胞應答反應,導致HBV無法被完全清除,使機體處于免疫耐受狀態;HBV-DNA載量升高時HBV復制較為活躍,機體出現抗HBV免疫應答行為,而這種免疫應答能夠引起肝炎癥反應,導致IL-33合成增加。HBV感染后,機體通過免疫功能清除病毒的同時,能夠損傷肝細胞,這類受損細胞修復過程與細胞外基質大量沉積,導致肝纖維化病變[18]。有研究報道,肝炎癥程度以及纖維化分期均與血清HBV-DNA載量密切相關[19]。本研究中多因素Logistic回歸分析顯示,CD4+CD25+、IL-33、纖維化分期、炎癥分級均為HBV-DNA載量的影響因素(P<0.05)。HBV復制后主要經機體免疫功能介導肝組織病理損害,檢測HBV-DNA載量能夠了解HBV復制活躍度,檢測水平越高,說明HBV復制行為越活躍,對患者肝組織產生的傷害越大,加劇肝炎癥活動以及纖維化病變。因此,臨床對于高水平HBV-DNA載量的CHB患者,需要重視肝炎癥活動以及纖維化進展,適時給予肝病理活檢,了解肝病理狀態[20]。

綜上所述,HBV感染患者HBV-DNA載量與外周血CD4+CD25+、IL-33水平、肝組織病理密切相關。CD4+CD25+、IL-33水平越高,HBV-DNA載量越大,肝纖維化病變與炎癥程度越嚴重。