KAI1/CD82在垂體腺瘤中表達及對預后影響

鄭 鍇, 羅秀玲, 張瑋豪, 劉宇利, 李玉明, 廖尚高

貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 1.神經(jīng)外科;2.頭頸腫瘤科,貴州 貴陽 550004;3.貴州醫(yī)科大學 藥學院,貴州 貴陽 550004

垂體腺瘤(pituitary adenoma,PA)是起源于垂體前葉的良性腫瘤,是繼神經(jīng)膠質(zhì)瘤和腦膜瘤之后的第3大常見原發(fā)性腦腫瘤,約占所有顱內(nèi)腫瘤的15%[1]。臨床上無功能的PA主要表現(xiàn)為對周圍結構的占位效應,包括視交叉和垂體,分泌性PA會刺激某些下丘腦-垂體-器官軸并表現(xiàn)為肢端肥大癥和庫欣病等[2]。PA的臨床體征、神經(jīng)病理學特征、增殖活性和可能侵入周圍解剖結構的生長模式等影響因素存在巨大異質(zhì)性,對其病程的預測非常具有挑戰(zhàn)性[3]。治療PA的最終目標是延長患者生存期和改善患者生活質(zhì)量,雖然絕大多數(shù)PA是良性的,可以通過手術、放療及藥物進行治療,但有些PA對上述治療無反應[2,4]。因此,尋找與PA密切相關、可對其預后進行預測的生物標志物十分必要。跨膜4超家族(trans-membrane 4 superfamily,TM4SF)蛋白可促進細胞與細胞外基質(zhì)的相互作用,增強腫瘤細胞間的凝聚力,減少吞噬和侵襲,抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移,KAI1/CD82是TM4SF的成員,可抑制大多數(shù)腫瘤的轉(zhuǎn)移,與腫瘤侵襲和預后顯著相關[5]。有研究發(fā)現(xiàn),KAI1/CD82在某些惡性腫瘤中表達降低,與惡性進展、轉(zhuǎn)移及預后密切相關,如甲狀腺狀微癌、鼻咽癌等[6-7]。本研究旨在探討KAI1/CD82在PA中的表達及其對預后的影響,為臨床中PA的防治提供新的研究方向。現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院自2020年5月至2021年10月收治的72例PA患者為研究對象。納入標準:臨床初次確診為PA[8];無家族性疾病病史;既往無手術史;術前無放療、化療史。排除標準:合并嚴重多器官疾病;合并身體其他部位腫瘤;合并已明確的長期內(nèi)分泌疾病;術后病理石蠟切片初篩發(fā)現(xiàn)瘤組織稀少,大片壞死及血凝塊等雜質(zhì)過多。根據(jù)Knosp分級[9]進一步將研究對象分為侵襲性PA 37例(Knosp 3級20例,Knosp 4級17例),非侵襲性PA 35例。72例患者中,男性34例,女性38例;年齡18～72歲,平均年齡41.53歲;至入院時病程20 d至8年,平均病程16.24個月;按激素類型分類,無功能腺瘤15例,催乳素腺瘤33例,生長激素腺瘤14例,促甲狀腺激素腺瘤5例,促性腺激素細胞腺瘤型5例;經(jīng)蝶手術40例,經(jīng)顱手術32例。患者及其家屬均簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 免疫組織化學法 收集患者手術瘤組織(1.0～1.5 cm)及少量瘤旁正常組織。將石蠟包埋的PA組織進行4 μm切片,石蠟切片脫蠟和再水合,在乙二胺四乙酸(pH 9.0)中煮沸20 min進行抗原修復,避光條件3%過氧化物酶封閉10 min。將切片與10%山羊血清孵育30 min以阻斷非特異性染色,然后與一抗KAI1/CD82抗體(武漢三鷹生物技術有限公司)在室溫下孵育60 min。此后在室溫下與二抗一起孵育30 min,使用3,3′-二氨基聯(lián)苯胺顯色并用蘇木精復染。空白對照使用相同體積的PBS緩沖液取代KAI1/CD821抗體。封片后置于顯微鏡下進行觀察。

1.3 結果判定 KAI1/CD82蛋白表達水平通過半定量IHC評分系統(tǒng)確定,該系統(tǒng)基于陽性細胞百分比和細胞染色強度的總組合進行評分。陽性細胞的百分比評分:0分,無陽性細胞;1分,不超過5%陽性細胞;2分,超過5%且25%以下細胞染色陽性;3分,不少于25%且不超過50%細胞染色陽性,4分,50%以上細胞染色陽性。染色強度評分:1分,淡黃色;2分,黃棕色;3分,棕褐色。計算每個組織樣本的總分,總分>3分為陽性,總分≤3分為陰性。

1.4 熒光定量聚合酶鏈反應法 使用Trizol總RNA抽提試劑盒(德國Qiagen公司)提取總RNA,紫外分光光度計測定RNA純度,使光密度260/光密度280為1.8～2.0,使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)轉(zhuǎn)錄合成cDNA。使用qRT-PCR試劑盒(德國Qiagen公司)配置25 μl反應體系:SYBR Green I qPCR Master Mix 12.5 μl,正反向引物各0.5 μl,cDNA模板2.5 μl,ddH2O 9.0 μl。混勻后在熒光定量聚合酶鏈反應儀(美國ABI公司)中進行擴增,反應設置為95℃預變性2 min,95℃變性15 s,60℃退火20 s,72℃延伸20 s,共40個循環(huán)。根據(jù)NCBI相應的序列設計引物,引物序列見表1。反應結束后以GAPDH為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt法計算KAI1/CD82的相對表達量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.5 隨訪及預后 在術后次日開始隨訪,方式包括電話、短信及門診復查,周期為6個月。根據(jù)患者的預后情況,進一步將研究對象分為預后良好組(緩解)和預后不良組(未緩解)。患者預后未緩解標準:隨訪期內(nèi)術后觀察到新腫塊或磁共振成像診斷剩余腫塊體積增加。

2 結果

2.1 KAI1/CD82在PA組織、瘤旁組織中的表達水平 PA組織KAI1/CD82陽性率[51.39%(37/72)]低于瘤旁組織[75.00%(54/72)],KAI1/CD82 mRNA表達低于瘤旁組織[(0.65±0.18)比(1.01±0.32)],差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 KAI1/CD82在侵襲性、非侵襲性PA組織中的表達水平 侵襲性PA組織KAI1/CD82陽性率[35.14%(13/72)]低于非侵襲性PA組織[65.71%(23/72)],KAI1/CD82 mRNA表達低于非侵襲性PA組織[(0.46±0.13)比(0.85±0.27)],差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.3 影響PA患者預后的單因素分析 PA患者的預后情況與瘤卒中、侵犯海綿竇、侵襲性腫瘤、白細胞介素-6、白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子、C反應蛋白、KAI1/CD82有關(P<0.05)。見表2。

表2 影響PA患者預后的單因素分析/例(百分率/%)

2.4 Logistic多因素分析 瘤卒中是影響PA患者不良預后的獨立危險因素(P<0.05);高水平KAI1/CD82是影響PA患者不良預后的獨立保護因素(P<0.05)。見表3。

表3 Logistic多因素分析

2.5 KAI1/CD82對PA患者不良預后的預測價值 KAI1/CD826水平預測PA患者不良預后的ROC曲線下面積為0.847(95%可信區(qū)間0.743～0.921),靈敏度為96.67%,特異度為66.67%,臨界值為0.630。見圖1。

圖1 瘤組織中KAI1/CD82水平預測PA患者不良預后的ROC曲線

3 討論

PA是常見的顱內(nèi)腫瘤,在總?cè)巳褐械幕疾÷蕿?.1%[10-11]。因高度增殖和侵襲性,侵襲性PA具有浸潤周圍關鍵結構的傾向,如海綿竇、蝶骨、顱神經(jīng)等,也可能擴散到海綿竇或頸內(nèi)動脈周圍區(qū)域,很難完全切除[12-13]。手術治療對非功能性PA有益,卻無法完全切除某些腫瘤,因此,治療PA的目的是減輕或消除腫瘤占位病變的影響,糾正腫瘤過度釋放激素,使垂體維持正常功能[14]。垂體瘤切除手術復發(fā)率為7%～35%,且可能導致尿崩癥、蝶骨竇炎、腦脊液滲漏、視力障礙惡化、腦癱、腦膜炎等問題[15]。

KAI1/CD82是一種跨膜蛋白,是在各種組織類型中表達的進化保守分子,其首先被確定參與T細胞活化過程,現(xiàn)報道為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因[16]。Al-Khater等[17]認為,KAI1通過調(diào)節(jié)細胞運動和侵襲、誘導細胞衰老、細胞間粘附和細胞凋亡等機制來抑制實體癌的轉(zhuǎn)移。有研究發(fā)現(xiàn),CD82可通過阻斷TGF-β1/Smad信號通路,在腎細胞癌的遷移和侵襲中表現(xiàn)出抑制作用[18]。本研究中:PA組織KAI1/CD82陽性率低于瘤旁組織,KAI1/CD82 mRNA表達低于瘤旁組織,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);侵襲性PA組織KAI1/CD82陽性率低于非侵襲性PA組織,KAI1/CD82 mRNA表達低于非侵襲性PA組織,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。這提示,KAI1/CD82參與且抑制PA的發(fā)生和發(fā)展。Du等[19]發(fā)現(xiàn),KAI1表達與黑色素瘤、結直腸癌患者的預后顯著相關,當KAI1表達水平較低時,患者生存時間縮短。本研究結果顯示:高水平KAI1/CD82是影響PA患者不良預后的獨立保護因素(P<0.05);KAI1/CD826水平預測PA患者不良預后的ROC曲線下面積為0.847(95%可信區(qū)間0.743～0.921),靈敏度為96.67%,特異度為66.67%,臨界值為0.630。這提示,KAI1/CD826與PA患者的預后顯著相關,對PA患者不良預后的預測價值較好。

垂體瘤卒中是一種不常見的綜合征,會導致垂體腫瘤或腺體自發(fā)性出血或梗死,其最常見于所有類型的垂體偶發(fā)瘤中的非功能性PA,可引發(fā)頭痛、意識改變,甚至昏迷、死亡[20]。本研究中,瘤卒中是影響PA患者不良預后的獨立危險因素(P<0.05)。因此,為提高患者生存率,需對其進行預防。白細胞介素-6、白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子、C反應蛋白是細胞因子級聯(lián)和癌癥進展的主要炎癥調(diào)節(jié)因子[21]。炎癥因子受NF-κB信號通路調(diào)控,而NF-κB在PA中起著重要作用[22-23]。本研究發(fā)現(xiàn),PA患者的預后情況與白細胞介素-6、白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子、C反應蛋白有關(P<0.05)。這提示,不良預后的PA患者機體處于高炎狀態(tài)。因此,筆者推測,低水平KAI1/CD82會加重PA,使患者體內(nèi)炎癥積累,激活NF-κB信號通路,導致預后不良。

綜上所述,KAI1/CD82在PA組織中水平降低,其有望成為PA患者不良預后發(fā)生的預測因子。