PD-1、PD-L1在三陰性乳腺癌中的表達及臨床意義

陳 薇 李思榮 溫麗珊

五華琴江醫院綜合外科(廣東 梅州 514400)

三陰性乳腺癌是指癌組織中ER、PR和 Her2三種受體均表達陰性[1]，目前，該類型乳腺癌約占所有乳腺癌病理類型的15%-20%[2]。研究發現，三陰性乳腺癌中，，針對Her2的靶向治療以及傳統的內分泌治療均不敏感，以及遠處轉移尤其是內臟轉移和腦轉移發生率高的特點，較其他病理類型治療困難，愈后差[3]。目前三陰性腫瘤治療方案有限，以系統性化療為主，但容易出現耐藥，所以需要尋找新的治療方法，目前靶向治療及免疫治療逐漸凸顯其優勢。PD-1/PD-L1是是腫瘤免疫治療的新星[4]，腫瘤細胞通過高表達PD-L1來改變細胞毒性和實現對淋巴細胞的免疫殺傷的免疫逃逸，干擾PD-1/PD-L1通路可以加強免疫監視和免疫介導的腫瘤細胞殺傷作用，同時還可誘導腫瘤細胞凋亡，對腫瘤的治療具有積極意義[5]。目前FDA已經批準PD-1/PD-L1用于惡性黑色素瘤和非小細胞肺癌等惡性腫瘤的治療中，其在多種腫瘤的臨床治療中獲得良好的結果[6]。因此本研究將深入探討PD-1/PD-L1通路蛋白在三陰性乳腺癌中的表達水平以及與臨床病理特征的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象隨機納入我院2020年1月至2021年1月39例三陰性乳腺癌患者作為觀察組,留存患者的乳腺癌組織(2.0cm×2.0cm×2.0cm)的石蠟標本，患者年齡 40～58歲，平均(48.54±8.41)歲，選取同期入院的39例非三陰性乳腺癌患者作為對照組，留存患者的乳腺癌組織(2.0cm×2.0cm×2.0cm)的石蠟標本，患者年齡 38～61歲，平均年齡(49.32±9.08)歲，兩組患者在其他可能影響PD-L1表達的因素如年齡、腫瘤的分化程度、病理分級和臨床TNM分期等方面差異無統計學意義(P＞0.05)。

納入標準 ：符合中國癌癥協會發布的《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2019版)》中三陰性乳腺癌的診斷標準，并經病理組織學檢查確診。術前未進行放療或化療。排除標準：合并多種實體腫瘤。免疫系統功能障礙的患者。嚴重基礎疾病，肝腎功能障礙者；伴有其他惡性腫瘤的患者。本研究獲醫院倫理委員會批準。

1.2 實驗方法

1.2.1乳腺癌組織中PD-1、PD-L1表達水平 對手術切除的乳腺癌組織的PD-L1表達使用免疫組化的方法進行檢測。具體方法：收集患者之前手術所取的用于病理檢查的石蠟組織切片，石蠟組織切片進行脫蠟和水化使用二甲苯和乙醇，抗原修復使用檸檬酸鹽修復液，完成抗原修復之后再使用過氧化氫溶液再次處理石蠟組織切片，加入兔抗人PD-L1及PD-1抗體進行孵育，孵育過后顯色使用3，3-二氨基聯苯胺，完成顯色之后需要梯度酒精脫水并且干燥，還需要透明以及封固。使用高倍鏡觀察細胞膜和細胞質的染色情況。

1.3 觀察指標PD-1、PD-L1表達水平的判定標準是：細胞膜和細胞質中出現棕黃色或者棕褐色的顆粒為細胞著色，細胞著色程度小于5%定義為陰性，細胞著色比例大于5%為定義為陽性，細胞著色比例是指在高倍鏡下著色細胞數與總細胞數比值，隨機選取5個視野進行計數，最終取平均值[7]。

1.4 統計學方法使用SPSS 20.0軟件進行數據分析。計量資料組間比較選擇t檢驗；計數資料組間比較選擇χ2檢驗或Fisher確切概率法，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組PD-1、PD-L1蛋白表達情況的比較觀察組PD-1的陽性表達率為33.33%(13/39)，比對照組非三陰性乳腺癌組織的PD-1蛋白的陽性表達率12.82%(5/39)高，差異有統計學意義(χ2=5.034，P=0.046)；觀察組中PD-L1蛋白的陽性表達率為52.78%(19/39)，比對照組非三陰性乳腺癌組織的17.94%(7/39)高，差異有統計學意義(χ2=6.543，P=0.011)。見表1，圖1，圖2。

圖1 PD-1、PD-L1蛋白在三陰乳腺癌組織中的陽性表達(圖1A：PD-1，圖1B：PD-L1)。

圖2 PD-1、PD-L1蛋白在非三陰乳腺癌組織中的弱陽性表達(圖2A：PD-1，圖2B：PD-L1)。

表1 兩組PD-1、PD-L1蛋白表達情況的比較

2.2 三陰乳腺癌組織中PD-1、PD-L1的表達情況與臨床特征的關系 兩組患者在年齡、絕經情況和淋巴結轉移等方面對PD-1、PD-L1表達的影響差異無統計學意義(P＞0.05)，但在低分化組和TNM Ⅲ期患者中PD-1、PD-L1表達的表達又明顯升高P＜0.05)，(表2)。

表2 不同臨床特征的三陰性乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-1 ，PD-L1的表達情況

3 討 論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，在我國，乳腺癌的發病率也逐年上升[8]。乳腺癌晚期可發生遠處轉移，出現其他器官的轉移癌可危及生命。隨著對乳腺癌的研究的深入，目前在乳腺癌早期診斷及治療都取得了令人矚目的成就，乳腺癌治療的不斷進步使乳腺癌成為治療效果最好的腫瘤之一[9]。乳腺癌有多種分類方法，目前多種類型乳腺癌的治療已經獲得不菲的成就[10]。由于三陰性乳腺癌遠處轉移風險更高愈后較其他病理類型更差并且對常規的內分泌治療及靶向治療并不敏感，目前除系統的放化療尚無其他更佳的治療方法。NCCN進行的12000 名乳腺癌患者臨床表現及治療效果的研究顯示，TNBC 患者比非TNBC患者2 年生存率、總體生存率更低[11]。所以尋找TNBC相關特異性分子有益于其早期診斷及治療。PD-1/PD-L1作為近年來腫瘤免疫靶向治療中的熱門通路靶點，已被FDA批準用于多種腫瘤的治療[12]。PD-1和PD-L1可以使腫瘤細胞獲得免疫逃逸，而阻斷PD-1/PD-L1通路可達抗腫瘤的目的，與放化療相比，免疫治療特異性更強，破壞性更低，具有更好的療效及更少的并發癥[13]。但是目前PD-1、PD-L1在三陰性乳腺癌治療中的臨床意義尚未明確，仍有很大的研究意義。

本研究目的是探討PD-L1在三陰性乳腺癌中的表達及臨床意義，為臨床治療提出指導。目前 PD-1表達水平的檢測主要有：免疫組化、流式細胞術檢測T細胞表面的PD-1、ELISA 法以及 RTPCR等方法。本研究通過對病灶組織的PD-1/PD-L1進行免疫組化，免疫組化結果表明，觀察組 PD-1的表達水平33.33%明顯高于對照組的12.82%，PD-L1的表達水平43.58%明顯高于對照組的17.94%。結果表明PD-L1與PD-1表達具有一致性，并且可以通過相應的靶向免疫治療獲益。同時還研究了PD-1，PD-L1的表達與臨床特征關系，結果顯示不同的TNM分期，組織學分級，年齡，絕經情況下PD-1，PD-L1表達的差異無統計學意義，提示PD-1，PD-L1可能與病情的進展無關,這與Qin[14]等的研究結果基本相一致。

綜上所述，三陰乳腺癌組織中存在明顯的 PD-1/PD-L1通路蛋白表達上調，阻斷PD-1/PD-L1通路蛋白可能對三陰乳腺癌的早期診斷和治療效果評價有一定的臨床意義。