砧木對歐亞種葡萄‘小味多’果實揮發性物質的影響

周曉航，王雯染，李惠清，王 軍，何 非

（中國農業大學食品科學與營養工程學院，葡萄與葡萄酒研究中心，農業農村部葡萄酒加工重點實驗室，北京 100083）

香氣是構成葡萄果實及葡萄酒感官品質的重要指標之一[1]。香氣物質在葡萄果實中通常以游離態和糖苷結合態2 種形式存在，其中游離態形式對葡萄果實和葡萄酒香氣的呈現有直接貢獻，而結合態香氣物質則在葡萄酒釀造和陳釀過程中通過水解釋放出游離態的苷元，通過累加、協同、抑制等相互作用賦予葡萄酒豐富而獨特的香氣輪廓[2]。

葡萄果實和葡萄酒中的香氣物質主要包括萜烯類、C13-降異戊二烯類、甲氧基吡嗪類、酯類、醇類、揮發性酸類物質和含硫化合物等。萜烯是葡萄中一類重要的次生代謝產物[3]，目前在釀酒葡萄果實中已經發現了70多種萜烯類物質[4]，其中對葡萄和葡萄酒香氣有重要貢獻的物質主要是單萜、倍半萜及其衍生物[5]。C13-降異戊二烯類化合物是由類胡蘿卜素及含40 個碳原子的萜類物質氧化降解產生[6]，在葡萄酒中呈現令人愉悅的花果香氣味[7]。甲氧基吡嗪是一類含氮的六元雜環化合物[8]，被認為是葡萄和葡萄酒中青椒、蘆筍、青豆等生青氣味的主要來源[9]。酯類物質主要賦予葡萄和葡萄酒果香，對葡萄酒的香氣感官品質起著積極作用。醇類物質主要包括C6/C9醇和其他高級醇，其中C6/C9醇賦予葡萄和葡萄酒青草味和植物味，而高級醇則賦予了葡萄酒化學味，通常被認為對葡萄酒的感官有負面影響。揮發性酸類物質賦予葡萄酒脂肪味和酸腐味，一般認為它們會對葡萄酒的香氣產生不利影響[10]。含硫化合物通常是在發酵或陳釀過程中產生[11]，特別是硫醇類物質會賦予葡萄酒獨特的香氣[12]。

因為具有抗根瘤蚜、抗線蟲、抗旱、抗鹽堿、耐寒、耐濕等優良特性[13-16]，葡萄砧木在葡萄栽培中廣泛使用。Cheng Jing等[17]分析了5 種砧木嫁接對‘霞多麗’葡萄果實揮發性物質特征的影響，發現砧木‘1103P’能顯著提高果實中游離和結合態香氣物質含量。Wang Yu等[18]通過比較8 個砧木品種對‘赤霞珠’葡萄揮發性物質的影響，發現砧木‘110R’、‘Riparia Gloire’和‘SO4’可以顯著降低‘赤霞珠’葡萄果實中酯類物質的含量。韓曉等[19]研究發現，砧木‘1103P’可以顯著提高‘丹娜’葡萄果實中C6/C9類物質的含量，‘SO4’則可以顯著提高‘丹娜’葡萄果實中C13-降異戊二烯類物質的含量。李敏敏等[20]以8 個砧木品種分別嫁接‘小味多’，研究其對‘小味多’葡萄生長、結果和果實品質的影響，結果表明，‘101-14’、‘3309C’為砧木嫁接的主干粗度顯著小于其自根苗，其余6 種砧木嫁接的‘小味多’主干粗度與自根苗無顯著差異。顯然，砧木對接穗品種果實品質及營養生長的影響取決于氣候-土壤條件。

‘小味多’原產于法國，是法國波爾多六大法定品種之一，其果實有機酸和單寧含量較高，所釀葡萄酒香氣馥郁，酒體豐滿而強勁，適宜陳釀，多用于紅葡萄酒的混釀以加強葡萄酒的結構感。近些年來，‘小味多’葡萄在我國一些產區開始試種和推廣[21]。關于‘小味多’葡萄酒揮發性物質已有相關報道，但是關于不同砧木嫁接對‘小味多’葡萄果實揮發性物質的影響目前報道較少。本實驗通過頂空固相微萃取-氣相色譜-質譜（head space solid phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry，HS-SPME-GC-MS）聯用技術，以‘小味多’自根苗葡萄為對照，比較5 個砧木品種嫁接對商業成熟期‘小味多’葡萄果實游離態和結合態香氣化合物組分和含量的影響，以期為實際生產中‘小味多’嫁接砧木的選擇與應用提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

本實驗于2016—2017年連續2 a在中國農業大學上莊實驗站（40.14°N，116.19°E）進行。葡萄園為平地，海拔高度為49 m，年平均氣溫12.5 ℃，年平均降雨量約630 mm，年日照時數2662 h，無霜期211 d。2016—2017年連續2 a的氣象數據來源于中國氣象數據網（http://data.cma.cn/），觀測點與實驗地的直線距離約為45.2 km。

實驗所用的5 個砧木品種分別為‘101-14’、‘1103P’、‘Beta’、‘5BB’、‘SO4’。接穗品種為‘小味多’（記為PV）。砧木苗于2010年定植，當年綠枝嫁接‘小味多’，以自根苗作為對照。葡萄園南北行向，行距2.5 m、株距1.2 m。每5 株葡萄為1 個單元，每個單元栽植同一個砧穗組合的苗木；每種砧穗組合設置3 個單元，計為3 個生物學重復。葡萄葉幕形為改良的VSP（M-VSP），留梢量為12～15 支/m（行），葉幕高度和寬度分別保持在約1.2 m和0.7 m。灌溉方式為滴灌。采用常規葡萄園管理方法按照相同的標準進行滴溉、施肥和病蟲害防控等田間操作。于每年商業采收期進行樣品采集，每個處理每次重復隨機采集300 粒葡萄漿果。采集后放入冰盒，立即帶回實驗室。隨機選取100 粒漿果用于葡萄果實理化指標的測定，其余樣品液氮速凍后保存于-40 ℃冰箱中以備后續香氣物質的分析。

二氯甲烷、酒石酸（均為分析純）、葡萄糖北京化工廠；己醇、(E)-3-己烯醇、(Z)-3-己烯醇、(E)-2-己烯醇、(Z)-2-己烯醇、己醛、壬醛、(E)-2-己烯醛、月桂烯、檸檬烯、里那醇、α-萜品醇、香茅醇、檸檬醛、香葉基丙酮、香葉醇、橙花醇、茶螺烷、β-大馬士酮、β-紫羅蘭酮和4-甲基-2-戊醇（內標）等香氣標準品美國Sigma-Aldrich公司。

1.2 儀器與設備

PAL-1手持糖度計 日本ATAGO公司；PB-10 pH計、BSA223S天平 賽多利斯有限公司；FD-1C-50冷凍干燥機 北京博醫康實驗儀器有限公司；S63300HBT超聲波儀 上海冠特超聲儀器有限公司；Micro 17R離心機美國賽默飛世爾公司；6890-5975 GC-MS聯用儀美國Agilent公司；Cleanert PEP-SPE固相萃取柱（150 mg/6 mL）美國Bonna-Agela科技公司；50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取纖維 美國Supelco公司。

1.3 方法

1.3.1 果實理化指標檢測

參照GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》測定[22]。每個砧穗組合每次重復隨機選取100 粒葡萄漿果用于理化指標分析。首先稱量100 粒漿果的百粒質量，再將100 粒葡萄漿果壓榨取汁，8000 r/min條件下離心10 min，取上清液用手持糖度儀測定總可溶性固形物含量（以°Brix表示）；用pH計測定pH值；用酸堿滴定法測定可滴定酸含量，以酒石酸當量表示，單位為g/L。

1.3.2 游離態揮發性物質的提取

參考Wen Yaqin等[23]的實驗方法，每個生物學重復取葡萄果實50 g，用液氮冷凍，除梗去種子，加入0.5 gD-(+)-葡萄糖酸δ-內酯，在液氮保護下研磨成粉末。然后在4 ℃條件下靜置浸提4 h，之后離心得到澄清葡萄汁，其中一部分直接用于游離態揮發性物質的檢測，另外一部分葡萄汁用于糖苷結合態揮發性物質的提取。每個樣品進行2 次重復。

1.3.3 結合態香氣物質的提取

固相萃取柱依次加入10 mL甲醇和10 mL水進行活化，然后加入1 mL上述澄清葡萄汁，之后加入5 mL蒸餾水洗脫去除糖、酸等低分子質量的極性化合物，加入5 mL二氯甲烷洗脫去除游離態揮發性物質的干擾，最后用20 mL色譜純甲醇將結合態香氣物質洗脫。收集洗脫液至50 mL的圓底燒瓶內，用真空旋轉蒸發儀蒸干，加入10 mL檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液（0.2 mol/L，pH 2.5）重新溶解，轉移至新的離心管中，加入10 μL內標溶液，置于100 ℃恒溫油浴鍋中1 h以水解糖苷態香氣物質。反應結束后用于糖苷結合態香氣物質的檢測。

1.3.4 揮發性物質的檢測

參考Wu Yuwen等[24]的方法，取5.0 mL上述澄清葡萄汁或酸解溶液于20 mL香氣進樣小瓶中，加入1.00 g NaCl，準確加入10 μL的4-甲基-2-戊醇溶液（內標，1.0018 mg/mL），用帶有聚四氟乙烯隔墊的蓋子擰緊，置于CTC-PAL自動進樣裝置上加熱攪拌30 min，然后將已活化的SPME萃取頭（50/30 μm DVB/CAR/PDMS）插入進樣小瓶的頂空部分，在40 ℃條件下繼續加熱攪拌30 min，隨后取出SPME萃取頭自動插入GC-MS進樣口，在250 ℃條件下解吸8 min。

G C-MS 條件：HP-INNOWAX 毛細管柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣為高純度氦氣，流速為1 mL/min。升溫程序如下：50 ℃保持1 min，然后以3 ℃/min升溫至220 ℃，最后保持5 min。電子電離源；進樣口溫度250 ℃，采取不分流模式；電離能量70 eV；離子源溫度230 ℃；質譜接口溫度280 ℃；質量掃描范圍為30～350 u。

揮發性物質的定性根據NIST11標準譜庫中的保留指數和質譜信息進行。揮發性物質定量根據對應的標準曲線。根據葡萄果實的糖、酸含量，配制葡萄汁模擬液（200 g/L葡萄糖、7 g/L酒石酸，pH值用1 mol/L的NaOH溶液調至3.4），然后用模擬液溶解揮發性物質的標準品制備標準品母液（混標），再用模擬液進行15 個梯度稀釋，GC-MS檢測前加入10 μL的內標溶液，使用同樣的萃取方法和GC-MS分析條件，檢測并制作標準曲線。沒有標準品的香氣物質利用具有相同化學結構或相近碳原子數的標準品或內標化合物進行定量。揮發性物質的含量以mg/kg（果實鮮質量）表示。

1.4 統計分析

采用SPSS（V23.0）軟件進行統計分析，用Duncan多重比較進行年份與砧木的雙因素方差分析（P＜0.05）；采用SIMCA 14.1進行主成分分析（principal component analysis，PCA）。

2 結果與分析

2.1 氣象數據

根據葡萄果實發育物候期，計算各個物候階段所經歷的日數、有效積溫、日照時數、日平均溫度、日平均溫差和降雨量（表1）。由表1可知，2 個年份的生長季降雨量差異顯著，其余氣象指標無顯著差異。2016年的降雨量小于2017年，兩年的降雨量分別為538.7 mm和653.6 mm，在轉色期，2016年的降雨量是2017年的1.8 倍，而在成熟期，2017年的降雨量是2016年的2.13 倍。

表1 2016—2017年生長季氣象數據Table 1 Meteorological indices during the growing seasons of ‘Petit Verdot’ grapes in two vintages (2016-2017)

2.2 砧木對‘小味多’葡萄果實理化指標的影響

如表2所示，‘小味多’嫁接苗的漿果百粒質量均高于自根苗；砧木‘101-14’、‘1103P’、‘Beta’嫁接的‘小味多’果實，其可溶性固形物含量高于自根苗，而砧木‘5BB’、‘SO4’嫁接的‘小味多’果實可溶性固形物含量低于自根苗；‘小味多’嫁接苗果實的pH值均略高于自根苗；PV/1103P組合葡萄果實的可滴定酸含量高于自根苗，而砧木‘101-14’、‘Beta’、‘5BB’、‘SO4’嫁接的‘小味多’果實的可滴定酸含量低于自根苗。雙因素方差分析結果表明，砧木對‘小味多’葡萄果實理化指標無顯著影響，年份對果實百粒質量、可溶性固形物、pH值有顯著影響。

2.3 砧木對‘小味多’果實游離態揮發性物質的影響

由表3可知，2016年‘小味多’各砧穗組合和自根苗采收期葡萄果實中游離態揮發性物質的種類相同，共檢測到52 種物質。‘小味多’各砧穗組合葡萄果實中游離態揮發性物質的含量與自根苗相比存在顯著差異。

與自根苗相比，‘101-14’、‘Beta’和‘SO4’嫁接顯著增加了葡萄果實游離態揮發性物質的含量。其中砧木‘5BB’嫁接的‘小味多’果實中游離態揮發性物質濃度增加量最顯著，其次為PV/SO4組合。5 種砧穗組合中，C6/C9類物質增加量最顯著；相比而言，PV/SO4組合增加量最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合。PV/5BB組合酸類物質增加量最顯著，PV/Beta組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合醇類物質增加量最顯著，PV/1103P組合增加量顯著低于其他砧穗組合。PV/5BB組合苯類物質增加量最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合。PV/5BB組合羰基化合物類物質增加量最顯著，PV/Beta組合增加量顯著低于其他砧穗組合。PV/5BB組合C13-降異戊二烯類物質增加量最顯著，PV/1103P組合增加量顯著低于其他砧穗組合。PV/5BB組合萜烯類物質增加量最顯著，PV/Beta組合增加量顯著低于其他砧穗組合。

2017年‘小味多’各砧穗組合和自根苗采收期葡萄果實中游離態揮發性物質的種類相同，共檢測到51 種物質，與2016年結果略有差別。‘小味多’各砧穗組合葡萄果實中游離態揮發性物質的含量與自根苗相比存在顯著差異。

與自根苗相比，砧木‘101-14’、‘Beta’、‘1103P’和‘SO4’嫁接顯著增加了葡萄果實游離態揮發性物質的含量。其中砧木‘101-14’嫁接的‘小味多’果實中游離態揮發性物質濃度增加量最顯著，其次為PV/SO4組合。5 種砧穗組合中PV/SO4組合C6/C9類物質增加最顯著，PV/101-14組合C6/C9類物質增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/101-14組合酸類物質增加量最顯著，PV/Beta組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/101-14組合醇類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/SO4組合苯類物質增加最顯著，PV/1103P組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/101-14組合羰基化合物類物質增加量最顯著，PV/Beta組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/101-14組合C13-降異戊二烯類物質增加量最顯著，PV/Beta組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合萜烯類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合。

砧木‘5BB’可以提高果實中游離態萜烯類化合物和游離態C13-降異戊二烯類化合物的含量，砧木‘SO4’可以提高果實中游離態C6/C9類化合物的含量。砧木‘101-14’可以提高果實中游離態羰基化合物類物質的含量。砧木‘SO4’可以提高果實中游離態C13-降異戊二烯類、游離態萜烯類物質的含量。對‘小味多’葡萄果實中的游離態揮發性物質進行雙因素方差分析，結果如表3所示。砧木對游離態揮發性物質的含量有顯著影響，對萜烯類、苯類、C13-降異戊二烯類、醇類、C6/C9類、羰基化合物類、酸類和總游離態揮發性物質的含量均有極顯著影響。年份對萜烯類、C13-降異戊二烯類、苯類、羰基化合物類、酯類、醇類、C6/C9類化合物、酸類和總游離態揮發性物質的含量均有極顯著影響。且年份和砧木的交互作用對C13-降異戊二烯類、羰基化合物類、醇類、C6/C9類化合物、酸類和總游離態揮發性物質的含量有顯著影響。綜上，年份和砧木都對游離態揮發性化合物有較大影響。

2.4 砧木對‘小味多’果實結合態香氣物質的影響

2016年‘小味多’各砧穗組合和自根苗采收期葡萄果實中結合態香氣物質的種類相同，共檢測到53 種物質。由表4可知，‘小味多’各砧穗組合葡萄果實中結合態香氣物質的含量與自根苗相比存在顯著差異。

表4 采收期‘小味多’不同砧穗組合和自根苗葡萄果實結合態香氣物質含量Table 4 Contents of bound volatile compounds in ‘Petit Verdot’ grape berries from self-rooted and grafted vines during harvest period

與自根苗相比，5 個砧穗組合均顯著增加了葡萄果實結合態香氣物質的含量。其中砧木‘5BB’嫁接的‘小味多’果實中結合態香氣物質增加最顯著，其次為PV/Beta組合。5 種砧穗組合中PV/5BB組合酸類物質含量增加最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合醇類物質增加最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合苯類物質增加最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合羰基化合物類物質增加最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合酯類物質增加最顯著，PV/1103P組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合C13-降異戊二烯類物質增加最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合萜烯類物質增加最顯著，PV/101-14組合增加量顯著低于其他砧穗組合。

2017年‘小味多’各砧穗組合和自根苗采收期葡萄果實中結合態香氣物質的種類相同，共檢測到53 種物質。‘小味多’各砧穗組合葡萄果實中結合態香氣物質的含量與自根苗相比存在顯著差異。

與自根苗相比，5 個砧穗組合均顯著增加了葡萄果實結合態香氣物質的含量。其中砧木‘1103P’嫁接的‘小味多’果實中結合態香氣物質含量增加最顯著，其次為PV/5BB組合。5 種砧穗組合中PV/5BB組合酸類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合醇類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/101-14組合苯類物質含量增加最顯著，PV/Beta組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/1103P組合羰基化合物類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/1103P組合酯類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/5BB組合C13-降異戊二烯類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合；PV/1103P組合萜烯類物質增加最顯著，PV/SO4組合增加量顯著低于其他砧穗組合。

砧木‘5BB’可以提高果實中結合態C6/C9類化合物、酯類、羰基化合物類、萜烯類化合物和C13-降異戊二烯類化合物的含量。砧木‘1103P’可以提高果實中結合態羰基化合物類物質的含量；砧木‘Beta’可以提高果實中結合態C13-降異戊二烯類、結合態萜烯類物質的含量；砧木‘SO4’可以提高果實中結合態羰基化合物類物質的含量。對‘小味多’葡萄果實中的結合態香氣物質進行雙因素方差分析，結果如表4所示。砧木對結合態香氣物質的含量有顯著影響，對萜烯類、C13-降異戊二烯類、醇類、羰基化合物類、酸類和總結合態香氣物質的含量有極顯著影響。年份對結合態香氣物質的含量均有顯著影響，對萜烯類、C13-降異戊二烯類、醇類、羰基化合物類、酯類、酸類和總結合態香氣物質的含量有極顯著影響。且年份和砧木的交互作用對C13-降異戊二烯類、羰基化合物類、醇類、酸類和總結合態香氣物質的含量有顯著性影響。綜上，年份和砧木都對結合態香氣化合物有較大影響。

2.5 ‘小味多’砧穗組合差異揮發性化合物的篩選

為了進一步明確不同砧穗組合之間的相似性和差異性，對揮發性化合物進行PCA（圖1），前兩個PC解釋了總方差的95%，其中PC1為52.2%，PC2為41.1%，PC1可將2016年和2017年的樣品明顯區分開，2016年各砧穗組合差異大，而2017年各砧穗組合差異相對較小。

圖1 采收期‘小味多’不同砧穗組合和自根苗葡萄香氣物質的PCA圖Fig.1 PCA scatter and loading plots of volatile compounds in ‘Petit Verdot’ grape berries from self-rooted and grafted vines during harvest period

盡管PCA對年際間的差異有很好的區分度，但是仍無法將各個砧穗組合區分，其差異性化合物也不能明確。由此可見，年份顯著影響揮發性物質含量。為了進一步明確砧木對‘小味多’葡萄果實揮發性物質的影響，消除年份的干擾，采用正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares-discrimination analysis，OPLS-DA）對6 組樣品進行分析，結果如圖2所示。結果表明，OPLS-DA可以很好地將2 個年份的結果區分開，并且不同砧穗組合與自根苗也能很好地區分。如表5所示，PV/1103P和PV/Beta與自根苗的差異化合物最多，PV/101-14組合與自根苗差異物質最少。整體來看，(E)-2-己烯醛、(Z)-2-己烯醛、己醛等C6/C9類化合物是區分嫁接苗和自根苗的共性差異化合物。

圖2 不同砧穗組合‘小味多’葡萄揮發性物質的OPLS-DA分布圖Fig.2 OPLS-DA distribution of volatile compounds in the grape berries of ‘Petit Verdot’ vines from different scion-rootstock combinations

表5 ‘小味多’中通過OPLS-DA模型識別的主要差異化合物Table 5 Primary biomarker compounds identified by the OPLS-DA model in ‘Petit Verdot’ grape berries

3 討論

‘小味多’葡萄果實中的揮發性物質包括酸類、酯類、C6/C9類、羰基化合物、C13-降異戊二烯類、萜烯類以及呋喃類。本實驗中游離態C6/C9類是‘小味多’葡萄果實中的主要揮發性物質，C6/C9類的醛、醇和酯來源于酶促脂質氧化路徑，可賦予葡萄和葡萄酒典型的草本植物味和青草味，也被稱為綠葉氣味物質，對葡萄酒的感官有重要作用[25]。有研究指出，砧木等因素均會影響葡萄果實中的揮發性物質積累[26]。

本研究中，2017年酸類、醇類、C6/C9類物質顯著高于2016年；2016年C13-降異戊二烯類、酯類物質顯著高于2017年，其他物質無顯著差異。結合氣象數據，2017年總降水量比2016年高114.9 mm，特別是2017年成熟期降水量較大。從開花到采收的其他氣象指標，包括日照時數、日平均氣溫和晝夜溫差等，2017年略高于2016年。有研究表明，一定程度的高溫有利于揮發性物質的積累[27]，而過度的水分虧缺會影響葡萄果實揮發性物質的積累，從而影響揮發性物質的含量[28]。C6/C9類物質是葡萄和葡萄酒“綠葉味”的主要來源[29]，有研究表明，高溫會導致葡萄果實中“綠葉味”增加[30]，一定程度減少土壤含水量能夠增加C13-降異戊二烯類和酯類物質的含量[31]。

砧木可以改變‘小味多’葡萄果實某些揮發性化合物的含量，但一般不會改變其揮發性物質的組成。本研究表明，5 種砧木均顯著增加‘小味多’采收期葡萄果實中游離態C6/C9類物質的含量。不同砧木對游離態揮發性物質的含量影響不同，與自根苗相比，PV/5BB、PV/SO4組合顯著增加果實游離態C13-降異戊二烯類、呋喃類、萜烯類物質的含量，PV/1103P組合、PV/Beta組合顯著增加果實游離態呋喃類物質的含量，PV/101-14組合顯著增加果實游離態羰基化合物類物質的含量。

與自根苗相比，PV/5BB、PV/Beta組合顯著增加果實結合態C13-降異戊二烯類、呋喃類、萜烯類物質的含量，PV/1103P組合顯著增加‘小味多’采收期葡萄果實結合態羰基化合物類、醇類物質的含量，PV/101-14組合顯著降低果實結合態C13-降異戊二烯類物質的含量，PV/SO4組合顯著增加果實結合態C13-降異戊二烯類、羰基化合物類揮發性物質的含量。孫磊等[32]的研究發現，‘1103P’、‘110R’和‘SO4’可顯著增加‘瑞都香玉’的游離態揮發性化合物總量，‘5BB’則對‘瑞都香玉’各類游離態揮發性化合物的含量表現出顯著的抑制作用，‘1103P’、‘110R’和‘SO4’3 種砧木均能顯著提高葡萄的玫瑰香味。本實驗中供試砧木均顯著增加各類游離揮發性化合物積累，這可能與氣候差異有關。李善菊等[33]的研究發現，砧木‘貝達’可顯著提高‘陽光玫瑰’中的醇類物質和酯類物質含量，砧木‘5BB’可提高‘陽光玫瑰’中醛類物質的含量。本研究中，與自根苗相比，PV/5BB組合顯著增加果實C13-降異戊二烯類、呋喃類、萜烯類物質的含量，這可能與氣候間差異造成的年份影響有關。同樣有研究發現，不同年份間葡萄果實中揮發性物質的組成與比例具有顯著不同[34]。鄭秋玲等[35]研究發現，砧木‘5BB’和‘Beta’對‘赤霞珠’葡萄酒揮發性物質有促進作用，可以作為‘赤霞珠’適宜的砧木。劉萬好等[36]在研究不同砧木對‘陽光玫瑰’葡萄果實揮發性物質的影響中發現，砧木‘SO4’嫁接的‘陽光玫瑰’揮發性物質總含量最高，砧木‘Beta’嫁接的‘陽光玫瑰’葡萄果實中萜類物質最高。本實驗中砧木‘5BB’嫁接的‘小味多’揮發性物質總含量和萜類物質含量均最高，這可能與砧穗之間的互作有關。

OPLS-DA對6 組砧穗組合自根苗之間進行差異分析結果中，揮發性物質中(E)-2-己烯醛、(Z)-2-己烯醛、己醛等C6/C9化合物均是區分嫁接苗和自根苗的共性差異化合物。相關研究[19,37]也發現，C6/C9類化合物可以作為嫁接苗和自根苗的差異化合物。孫磊等[32]用5 種砧木嫁接‘瑞都香玉’葡萄發現，與自根苗相比，2-己烯醛、里那醇、己醛、萜品油烯和β-月桂烯是‘瑞都香玉’/1103P組合的特征化合物。在本研究中也發現己醛是PV/1103P與自根苗中的差異化合物。可見，盡管接穗品種不同，但相同砧木對接穗揮發性物質的影響仍然存在一定的共性。

4 結論

嫁接砧木品種的差異會對‘小味多’成熟期葡萄果實揮發性物質的積累起到重要影響，但年份間氣候差異對其造成的影響往往會超過砧木品種的影響。(E)-2-己烯醛、(Z)-2-己烯醛、己醛等C6/C9類化合物是區分嫁接苗和自根苗的共性差異揮發性化合物。總體而言，在北京地區使用砧木‘5BB’嫁接有利于‘小味多’葡萄采收期果實萜烯類和C13-降異戊二烯類物質的積累，對葡萄果實的釀酒品質有正面影響。