基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系建設(shè)

王芊芊， 劉 沖， 傅 軍， 陳若寧， 劉迪文， 汪 洌，

（浙江大學(xué)a.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；b.醫(yī)學(xué)院，杭州 310058）

0 引言

自2021 年4 月15 日，《中華人民共和國(guó)生物安全法》正式施行［1］，預(yù)示著生物安全自此由規(guī)范約束上升到法律約束的高度。生物安全是指國(guó)家有效防范和應(yīng)對(duì)危險(xiǎn)生物因子及相關(guān)因素威脅，生物技術(shù)能夠穩(wěn)定健康發(fā)展，人民生命健康和生態(tài)系統(tǒng)相對(duì)處于沒(méi)有危險(xiǎn)和不受威脅的狀態(tài)，生物領(lǐng)域具備維護(hù)國(guó)家安全和持續(xù)發(fā)展的能力［2］。實(shí)驗(yàn)室生物安全是指以實(shí)驗(yàn)室為科研和工作場(chǎng)所時(shí)，實(shí)驗(yàn)室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，避免危險(xiǎn)生物因子造成實(shí)驗(yàn)室人員暴露，向?qū)嶒?yàn)室外擴(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施［3］。

基因修飾小鼠模型在生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、腫瘤學(xué)、新藥研發(fā)和疾病治療等諸多領(lǐng)域已顯示出其優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用前景［4-8］。基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)也方興未艾，相比于發(fā)展基因修飾技術(shù)，實(shí)驗(yàn)室生物安全一直是容易被忽視的問(wèn)題。近年來(lái)，多起生物類科研院所和高校實(shí)驗(yàn)室引發(fā)的生物安全事件已嚴(yán)重威脅甚至危害到公眾的生命安全，因此建立健全基因修飾實(shí)驗(yàn)室生物安全管理系統(tǒng)迫在眉睫。基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室從性質(zhì)上并不屬于單一結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室，其涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、小鼠胚胎操作和基因修飾小鼠飼養(yǎng)繁育實(shí)驗(yàn)室等功能區(qū)塊，屬于綜合性實(shí)驗(yàn)室，在管理上難度更大，所面臨的生物安全風(fēng)險(xiǎn)相較于單一功能實(shí)驗(yàn)室更高。以結(jié)合基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室，在生物安全管理體系建設(shè)中的管理組織構(gòu)架、制度建設(shè)、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、監(jiān)督機(jī)制和人員培訓(xùn)等方面進(jìn)行了有益探索，以期為同類型實(shí)驗(yàn)室生物安全管理提供一定的借鑒和參考。

1 基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

1.1 基因編輯技術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)

許多人工重組DNA分子都存在著生物安全危害。例如用于重組和擴(kuò)增DNA 分子的大腸桿菌可能與其他細(xì)菌的基因信息發(fā)生交換，而其中的某些細(xì)菌對(duì)人類是具有致病性的。再如，將全部或部分癌基因DNA片段連接到細(xì)菌質(zhì)粒上，這種重組的DNA分子很可能更易在人類或其他物種中傳播，從而增加患癌或其他疾病的風(fēng)險(xiǎn)［9-11］。此外，在操作重組微生物的工作中，還需要考慮的風(fēng)險(xiǎn)包括插入基因編碼是一種已知的毒素還是相對(duì)特征不明的毒素？修飾作用是改變宿主的類別還是病毒的細(xì)胞趨向性？修飾作用能否增加病毒的復(fù)制能力？插入基因能否改變細(xì)胞周期？等［3，12］。由于科學(xué)界對(duì)基因修飾技術(shù)的擔(dān)憂促使1975 年NIH對(duì)重組DNA 分子研究指南的開(kāi)發(fā)。指南同時(shí)指導(dǎo)成立了生物安全委員會(huì)（institutional biosafety committee，IBC），對(duì)使用重組或人工合成技術(shù)的研究進(jìn)行審核和監(jiān)督，并對(duì)研究人員在設(shè)計(jì)基因治療的實(shí)驗(yàn)給出總體框架［13-14］。在我國(guó)，使用基因編輯技術(shù)必須遵照《生物安全法》和《基因工程安全管理辦法》等法律法規(guī)，并在實(shí)驗(yàn)開(kāi)展前通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查。

1.2 通過(guò)基因工程技術(shù)研制基因修飾小鼠的風(fēng)險(xiǎn)

通過(guò)基因工程技術(shù)研制對(duì)特定病原體易感的基因修飾小鼠存在很大的風(fēng)險(xiǎn)。例如，利用hACE2 轉(zhuǎn)基因小鼠研究新型冠狀病毒（COVID-19）的感染機(jī)制、疫苗開(kāi)發(fā)和治療［15-17］。在造模以及后續(xù)的研究中稍有不慎都極有可能感染研究人員或進(jìn)而危害公共安全。不涉及感染性基因修飾小鼠的實(shí)驗(yàn)絕不意味著就不存在生物安全的風(fēng)險(xiǎn)。基因修飾小鼠主要可分為轉(zhuǎn)基因小鼠和基因敲除／敲入小鼠，分別是通過(guò)基因工程的手段將一段外源基因片段導(dǎo)入小鼠生殖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或早期胚胎中，使其整合進(jìn)小鼠基因組中并使其表達(dá)某一遺傳性狀和通過(guò)同源重組原理敲除／敲入某一個(gè)或某一段特定基因片段使其喪失或獲得某些遺傳性狀。基因敲除小鼠一般不表達(dá)特殊的生物危害，而轉(zhuǎn)基因小鼠和基因敲入小鼠因引入外源的基因片段，會(huì)表達(dá)不同于野生型小鼠的外源基因的蛋白，這些蛋白是否會(huì)對(duì)人類產(chǎn)生威脅？基因在不同物種間的漂移會(huì)破壞野生近緣種的遺傳多樣性，如果基因修飾小鼠逃逸很有可能污染野生型小鼠的基因庫(kù)也是很大的風(fēng)險(xiǎn)。此外還有增加人畜共患病的傳播機(jī)會(huì)，甚至給人類帶來(lái)災(zāi)難性的后果［12，18-19］。

因此，基因編輯技術(shù)和基因修飾小鼠研制存在著一定的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，需制定詳細(xì)地審核和監(jiān)督機(jī)制。故實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用基因編輯技術(shù)之前必須通過(guò)學(xué)校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查委員會(huì)的審批（該委員會(huì)審核范圍包含了生物安全相關(guān)內(nèi)容），獲批后方可開(kāi)展相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)，且委員會(huì)會(huì)對(duì)全實(shí)驗(yàn)流程進(jìn)行監(jiān)督。

1.3 基因修飾小鼠運(yùn)輸、飼養(yǎng)、繁育及實(shí)驗(yàn)中的生物安全風(fēng)險(xiǎn)

基因修飾小鼠的進(jìn)口、引種和運(yùn)輸以及到達(dá)動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施后的隔離檢疫過(guò)程中都有可能存在感染未知病原微生物的風(fēng)險(xiǎn)。在基因修飾小鼠的運(yùn)輸中，要特別注意運(yùn)輸盒的牢固性，以免基因修飾小鼠逃逸，并制定相應(yīng)的動(dòng)物逃逸處理應(yīng)急預(yù)案。基因修飾小鼠飼養(yǎng)及繁育過(guò)程中，小鼠本身的活動(dòng)會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，飼養(yǎng)人員更換小鼠籠盒時(shí)，會(huì)吸入大量的氣溶膠。如果基因修飾小鼠被病原微生物污染，則可能感染實(shí)驗(yàn)人員。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中可能會(huì)出現(xiàn)特別的生物安全問(wèn)題，如實(shí)驗(yàn)人員可能會(huì)被小鼠抓傷或咬傷［20］，或因?qū)嶒?yàn)中操作不當(dāng)受到的傷害。因此，基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室從動(dòng)物引種、運(yùn)輸、飼養(yǎng)、繁育和研制直至實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人道終點(diǎn)都必須建立全流程、嚴(yán)格的管理制度。

2 基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系的建立

實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系的建立是一個(gè)系統(tǒng)性工程，必須符合2008 年頒布的國(guó)標(biāo)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB 19489-2008）。在體系的建立和維護(hù)過(guò)程中，要隨時(shí)根據(jù)國(guó)家相關(guān)法律、法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的變化，以及衛(wèi)生行政主管部門的要求予以修訂，在此基礎(chǔ)上還可以參考WHO《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》等資料［21］。單位和實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)導(dǎo)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室安全管理體系建立、機(jī)構(gòu)設(shè)置和職能劃分以及資源配置等起著決定性作用。實(shí)驗(yàn)室生物安全最高管理者應(yīng)確定方針和目標(biāo)［22-23］。

2.1 建立相對(duì)完善的基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系

基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室是學(xué)校大型公共技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，由醫(yī)學(xué)院和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（以下簡(jiǎn)稱“中心”）共建。生物安全管理工作分為3 個(gè)層級(jí)［24-25］。第1 級(jí)學(xué)校成立有實(shí)驗(yàn)室技術(shù)安全管理辦公室，管理全校的實(shí)驗(yàn)室安全，包括實(shí)驗(yàn)室生物安全；第2 級(jí)是實(shí)驗(yàn)室所屬的醫(yī)學(xué)院的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)安全管理辦公室，由院長(zhǎng)為第一責(zé)任人；第3 級(jí)即為實(shí)驗(yàn)室，由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心主任負(fù)責(zé)。中心主任在充分掌握國(guó)家相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的要求下，負(fù)責(zé)制定實(shí)驗(yàn)室制度和管理實(shí)驗(yàn)室所有的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，并明確實(shí)驗(yàn)室的組織構(gòu)架和其他部門的關(guān)系；負(fù)責(zé)定期組織人員參加安全培訓(xùn)并制定監(jiān)督健康計(jì)劃；保障實(shí)驗(yàn)室所有安全設(shè)施設(shè)備的落實(shí)到位和定期檢修；確保所有實(shí)驗(yàn)人員熟悉并掌握實(shí)驗(yàn)流程，了解所有可能存在的生物安全風(fēng)險(xiǎn)。中心主任指定1 名實(shí)驗(yàn)室技術(shù)負(fù)責(zé)人，負(fù)責(zé)提交實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和安全評(píng)估報(bào)告并負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室所有實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的具體實(shí)施。另外指定1 名安全負(fù)責(zé)人，負(fù)責(zé)監(jiān)督實(shí)驗(yàn)室的一切實(shí)驗(yàn)活動(dòng)是否存在安全風(fēng)險(xiǎn)并有權(quán)阻止一切不安全的實(shí)驗(yàn)行為（見(jiàn)圖1）。

圖1 基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系構(gòu)架

2.2 編制基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系文件

按照生物安全管理體系文件的框架依次編寫實(shí)驗(yàn)室生物安全管理手冊(cè)（包含組織構(gòu)架、人員職責(zé)、生物安全管理方針和目標(biāo)、管理責(zé)任和個(gè)人責(zé)任等內(nèi)容）、實(shí)驗(yàn)室程序文件（含25 個(gè)）、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（32 份操作規(guī)程和規(guī)范）以及生物安全記錄表格（共21 項(xiàng)）和應(yīng)急預(yù)案［26-27］（見(jiàn)表1）。實(shí)驗(yàn)室生物安全管理手冊(cè)由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心主任審核后實(shí)施，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際運(yùn)行情況定期修訂。

3 基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)與管理

3.1 實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)

分子細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室主要功能是完成基因修飾小鼠研制的上游和下游實(shí)驗(yàn)，包括載體構(gòu)建、載體的驗(yàn)證、ES細(xì)胞培養(yǎng)和傳代、打靶ES 細(xì)胞的篩選和基因修飾小鼠的基因型鑒定等工作。實(shí)驗(yàn)室屬于生物安全Ⅰ級(jí)實(shí)驗(yàn)室，設(shè)計(jì)符合BSL-1 的建設(shè)要求［28］，根據(jù)主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行必要的分區(qū)：樣本制備區(qū)、試劑配置區(qū)、清洗滅菌區(qū)、試劑存放區(qū)和PCR區(qū)。

小鼠飼養(yǎng)和胚胎操作實(shí)驗(yàn)室設(shè)置在中心的屏障系統(tǒng)內(nèi)，使用許可證編號(hào)：SYXK（浙）2018-0016。屬于動(dòng)物生物安全Ⅰ級(jí)實(shí)驗(yàn)室，符合ABSL-1 的建設(shè)要求［28-29］。屏障區(qū)域?yàn)? 走廊設(shè)計(jì)，采用3 級(jí)空氣過(guò)濾系統(tǒng)（初、中、高效空氣過(guò)濾器），屏障內(nèi)空氣可達(dá)萬(wàn)級(jí)凈化標(biāo)準(zhǔn)。所有實(shí)驗(yàn)小鼠均為SPF級(jí)小鼠，并采用獨(dú)立通氣式籠具（individual ventilated cages，IVC）飼養(yǎng)。飼料經(jīng)Co-60 輻照，飲水采用121 ℃，1 h 高溫高壓的滅菌。屏障內(nèi)設(shè)置監(jiān)控系統(tǒng)，接入中心監(jiān)控室，除第一更衣室、第二更衣室和風(fēng)淋室外，每間實(shí)驗(yàn)室和走廊均為監(jiān)控全覆蓋。

3.2 實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)設(shè)備配置

分子細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室配有應(yīng)急噴淋和洗眼設(shè)備，小鼠飼養(yǎng)和胚胎操作實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)設(shè)備主要有生物安全柜和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器。滅菌器每年由杭州市特種設(shè)備檢測(cè)研究院檢測(cè)并出具質(zhì)檢報(bào)告。每半年由中心獸醫(yī)團(tuán)隊(duì)用3MTM壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑對(duì)實(shí)際壓力蒸汽滅菌效果進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)。

個(gè)人防護(hù)裝備主要有防靜電全身隔離衣、手套、醫(yī)用外科口罩、3M口罩、面罩、護(hù)目鏡和厚底工作鞋等。實(shí)驗(yàn)室安全員會(huì)定期檢查和更換所有的防護(hù)設(shè)備和個(gè)人防護(hù)裝備。

3.3 實(shí)驗(yàn)室消毒與衛(wèi)生管理

實(shí)驗(yàn)室和屏障設(shè)施初效過(guò)濾器每月更換一次，中效過(guò)濾器每3 個(gè)月更換一次，高效過(guò)濾器每年定期更換一次。每天至少用消毒藥水全面消毒一次分子實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)面，清潔實(shí)驗(yàn)室地面，所用的消毒劑根據(jù)潛在微生物的類別使用75%乙醇或0.5%次氯酸鈉等［22］。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如有活性物質(zhì)濺出要及時(shí)清理并消毒，所有操作參照浙大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心編制的“分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室洗滌、污物處理操作規(guī)程”（LAC-SOP-009）。

實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)臺(tái)面在操作前后均需用消毒劑擦拭，飼養(yǎng)間每天需用消毒水拖地，定期擦拭墻面和頂面，消毒劑需輪換使用以防長(zhǎng)期使用同一種消毒劑導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。所有操作參照浙大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心編制的“屏障系統(tǒng)的日常衛(wèi)生與消毒的操作規(guī)程”（LAC-SOP-011）。新的IVC 籠架運(yùn)至中心后，在特定房間內(nèi)進(jìn)行過(guò)氧化氫消毒后推至屏障系統(tǒng)內(nèi)。所有飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)小鼠的IVC籠架和主管道每3 個(gè)月全面清洗消毒。所有操作參照浙大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心編制的“實(shí)驗(yàn)小鼠IVC籠架清洗消毒的操作規(guī)程”（LAC-SOP-024）。

3.4 實(shí)驗(yàn)室儀器和試劑的安全管理

為加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備和試劑管理，實(shí)驗(yàn)室設(shè)置專人管理所有的儀器設(shè)備，負(fù)責(zé)試劑耗材的采購(gòu)和保管。建立實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備臺(tái)賬，對(duì)24 h 供電的儀器采取雙路供電，且連接報(bào)警系統(tǒng)。分子生物學(xué)所涉及的試劑復(fù)雜多樣、危害性強(qiáng)，很多都具有強(qiáng)腐蝕性、毒性和致畸性［30］。因此實(shí)驗(yàn)室建有試劑目錄和分類表（LAC-TABLE-006），整理了各種實(shí)驗(yàn)試劑的理化特性、使用注意事項(xiàng)和存儲(chǔ)要求等信息。設(shè)有專人負(fù)責(zé)試劑訂購(gòu)、分類和發(fā)放工作。對(duì)于像溴化乙啶等毒性強(qiáng)、有致癌性的試劑有專用存儲(chǔ)柜。實(shí)驗(yàn)室所用的危險(xiǎn)化學(xué)品均為雙人雙鎖保管，并有購(gòu)買、取用記錄（LAC-TABLE-007，LAC-TABLE-008）。

3.5 實(shí)驗(yàn)小鼠疾病預(yù)防控制

實(shí)驗(yàn)小鼠的飼養(yǎng)和繁育要嚴(yán)把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量關(guān)，嚴(yán)防人畜共患病。措施主要包括：①中心對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)商通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查和實(shí)地考察的方式進(jìn)行審核和評(píng)價(jià)，不定期對(duì)供應(yīng)商的產(chǎn)品進(jìn)行抽樣檢查。②對(duì)引入中心的實(shí)驗(yàn)小鼠有嚴(yán)格的質(zhì)量審核、隔離檢疫和生物凈化等流程。參照浙大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心編制的“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)出動(dòng)物設(shè)施操作規(guī)程”（LAC-SOP-015）、“基因修飾小鼠隔離檢疫操作規(guī)程”（LAC-SOP-016）和“基因修飾小鼠生物凈化操作規(guī)程”（LAC-SOP-017）。③對(duì)屏障內(nèi)日常飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)小鼠定期進(jìn)行微生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)，參照國(guó)標(biāo)“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)”（GB14922.2-2011）。

4 實(shí)驗(yàn)人員管理與培訓(xùn)

4.1 實(shí)驗(yàn)人員資質(zhì)管理

實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員管理依托于浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。人員招聘嚴(yán)格按照浙江大學(xué)事業(yè)性質(zhì)崗位聘用人才（勞務(wù)）派遣員工操作程序。所有實(shí)驗(yàn)人員均具有分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)、動(dòng)物醫(yī)學(xué)和微生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的專業(yè)背景，入職后經(jīng)專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)后方可上崗。在ABSL-1 的工作人員均通過(guò)浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)人員培訓(xùn)并獲得合格證。操作脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器的工作人員需取得《中華人民共和國(guó)特種設(shè)備作業(yè)人員證》，持證上崗。實(shí)驗(yàn)室1 名技術(shù)人員已參加由杭州市衛(wèi)生健康委員會(huì)組織的2021 年杭州市病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全培訓(xùn)班并已通過(guò)考試，成績(jī)合格。

4.2 實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)出管理

分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作人員經(jīng)培訓(xùn)授權(quán)持有門禁卡，憑本人門禁卡進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室。屏障區(qū)域采取封閉式管理，出入口處及屏障內(nèi)每個(gè)房間均設(shè)有門禁系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員培訓(xùn)獲得中心指紋權(quán)限和門禁密碼，憑本人指紋和門禁密碼進(jìn)出屏障系統(tǒng)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)出屏障系統(tǒng)必須嚴(yán)格按照浙大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心編制的“實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)出屏障設(shè)施操作規(guī)程”（LAC-SOP-018）進(jìn)行個(gè)人防護(hù)裝備的穿戴與更換。

4.3 實(shí)驗(yàn)人員健康管理

實(shí)驗(yàn)室新進(jìn)人員入職前需完成入職健康體檢，對(duì)于有相應(yīng)疾病或?qū)?dòng)物毛發(fā)過(guò)敏等不適宜從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理和操作的人員，中心人事部門將及時(shí)調(diào)整其工作崗位。實(shí)驗(yàn)室所有工作人員每年至少進(jìn)行一次體檢，并建立員工健康檔案。

4.4 實(shí)驗(yàn)人員培訓(xùn)管理

絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室生物安全事故發(fā)生的根本原因在于缺乏生物安全意識(shí)和疏于管理。有調(diào)查表明，很多受訪大學(xué)生不了解病原微生物分類、生物安全實(shí)驗(yàn)室等級(jí)的分類、動(dòng)物抓傷和咬傷后處理、生物安全柜的正常使用方法和生物安全防范等［31-32］。因此對(duì)從業(yè)人員的培訓(xùn)和教育至關(guān)重要。中心定期和不定期組織各項(xiàng)生物安全培訓(xùn)講座，包括每年組織人員參與學(xué)校和學(xué)院舉辦的消防安全知識(shí)講座和演習(xí)。通過(guò)組織實(shí)驗(yàn)人員參與各種培訓(xùn)和講座不斷強(qiáng)化人員的安全意識(shí)，降低生物安全風(fēng)險(xiǎn)。

5 生化固廢／液和動(dòng)物尸體的處理

高校中常見(jiàn)的生化固廢／液有放射性物質(zhì)、化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)器械和耗材等［33］，基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室涉及化學(xué)試劑種類較多，有些具有很大毒性，或具有致癌致突變性，比如溴化乙啶（EB）染料，不能直接排放。實(shí)驗(yàn)器械和耗材主要有注射器及針頭、口罩、手套、敷料、培養(yǎng)皿、離心管、移液管和培養(yǎng)基等，可能會(huì)沾染有毒有害物質(zhì)，決不能與生活垃圾混放。基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室還涉及實(shí)驗(yàn)小鼠的尸體和組織材料處理。

目前中心管理模式是所有的生化固廢／液全部放入指定的生化固廢／液廢棄物桶，用特定的生化固廢垃圾袋盛裝，當(dāng)廢棄物達(dá)到容器的3／4 時(shí)，即由相關(guān)人員封口。所有在實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的碎玻璃、針頭和刀片等銳器一律投入利器盒。學(xué)校的生化固廢／液現(xiàn)已實(shí)行網(wǎng)絡(luò)化管理模式，各實(shí)驗(yàn)室的生化固廢／液和銳器盒由指定人員封扎并收集，在校網(wǎng)園實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備管理處平臺(tái)上提交申請(qǐng)，審核通過(guò)后在指定時(shí)間將生化固廢／液送到校指定回收點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)小鼠的尸體和組織材料使用專用的生物安全袋密封包裝，稱重登記后送學(xué)校指定的動(dòng)物尸體存放間，放入-20 ℃冰柜內(nèi)，由具備專業(yè)資質(zhì)的相關(guān)公司統(tǒng)一定期清運(yùn)至校外進(jìn)行無(wú)公害化處理。所有操作參照浙大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心編制的“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人道終點(diǎn)、安樂(lè)死與尸體處理操作規(guī)程”（LAC-SOP-031）。

6 結(jié)語(yǔ)

高校實(shí)驗(yàn)室生物安全因隱蔽性強(qiáng)、人員密集和潛在有毒有害試劑較多等因素往往很容易被忽視，而一旦發(fā)生事故又會(huì)引起極大的危害。所以建立完善的生物安全防范體系，提前做好生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，制定嚴(yán)格的生物安全管理制度和監(jiān)管機(jī)制對(duì)于高校實(shí)驗(yàn)室工作的開(kāi)展至關(guān)重要。

基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室始建于2015 年底，隨著近7年的發(fā)展在專業(yè)技術(shù)上已取得重大突破，建成了穩(wěn)定的專業(yè)技術(shù)隊(duì)伍，已為本校多個(gè)科研團(tuán)隊(duì)提供了基因修飾小鼠研制技術(shù)服務(wù)，相關(guān)成果已發(fā)表在《自然》等國(guó)際頂級(jí)學(xué)術(shù)期刊。在浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦公室、校實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備管理處、醫(yī)學(xué)院、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)安全管理辦公室和院領(lǐng)導(dǎo)的多方指導(dǎo)下，基因修飾小鼠實(shí)驗(yàn)室生物安全體系已初步建成，在實(shí)驗(yàn)試劑管理、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病預(yù)防控制和實(shí)驗(yàn)人員管理與培訓(xùn)等方面也已初見(jiàn)成效。通過(guò)該體系的建立和運(yùn)行，有效保障了實(shí)驗(yàn)室的安全運(yùn)轉(zhuǎn)，為學(xué)校基因修飾技術(shù)服務(wù)需求保駕護(hù)航。但同時(shí)，在生物安全制度的落實(shí)和監(jiān)管、實(shí)驗(yàn)人員安全意識(shí)、危化品管理上仍需不斷完善。生物安全關(guān)系到每一個(gè)人的生命健康和家庭幸福，在建設(shè)“雙一流”大學(xué)的征程上，不僅要全面提升專業(yè)技術(shù)服務(wù)水平為科研支撐做出貢獻(xiàn)，更要以人為本，重視生物安全，加強(qiáng)管理，防患未然，為助力醫(yī)藥和生命科學(xué)等各學(xué)科發(fā)展做好有力支撐。

致謝：

感謝浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院曾衛(wèi)東教授對(duì)本論文的修改。