動物源性食品中地塞米松的檢測相關(guān)研究

王冰聰，曲婧喆，李天雨，張 瀟，李 丹，侯 宇

（吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，吉林長春 130000）

在動物養(yǎng)殖領(lǐng)域，時常會應用到地塞米松，實際應用過程如果用量不合理則會引發(fā)相關(guān)食品內(nèi)藥物殘留超標的問題，危及食品安全。對于動物源性食品，現(xiàn)下有多種檢測方法可檢測其中殘留的地塞米松，主要包含儀器分析法、液相色譜法等。

1 地塞米松簡析

地塞米松也被稱為氟美松，隸屬甾體類化合物的范疇，在獸醫(yī)臨床活動中以醋酸地塞米松與地塞米松磷酸鈉的應用為主，其中醋酸地塞米松呈白色結(jié)晶，遇乙醇或者氯仿發(fā)生輕微溶解，遇乙醚會進一步溶解，遇水不溶解，通常將其制作成片劑。而地塞米松磷酸鈉以微黃色粉末的形式存在，遇水或者甲醇發(fā)生溶解，遇到丙酮和乙醚基本上不溶解，一般將其制作成注射劑。地塞米松具有抗炎和抗過敏性，主要用在母畜代謝病癥中，也可與抗生素一起應用到感染性疾病中。因為它能促進飼料轉(zhuǎn)化，加快畜禽生長，所以在畜牧生產(chǎn)中得到了廣泛應用。但如果用量過度或者不規(guī)范用藥，則會引發(fā)水腫和肌肉萎縮等病癥，還存在藥物殘留的隱患。雖然此類藥物在肉制品中殘留較低，但長時間食用也會出現(xiàn)超標的問題，并會引發(fā)人體激素代謝混亂和肥胖等問題，出現(xiàn)蓄積性毒性，無論對人體健康，還是生態(tài)環(huán)境都會產(chǎn)生一定的危害。

2 檢測技術(shù)研究

2.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法是把抗原或者抗體融入特定固相載體表面，保證免疫活性，把抗體、抗原與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標抗體或抗原，再添加樣品，進行免疫反應，隨后添加酶反應底物，停止反應，依照顯色反應結(jié)果并利用分光光度計展開分析。該方法具有較高的靈敏性和特異性，耗時短、樣品檢測成本經(jīng)濟、預處理程序簡單，比較適合應用在批量樣品的初篩工作中。此方法包含雙抗體夾心法、間接法和競爭法這幾種類型，在檢測大分子抗原與抗體時會應用到前兩種方法，而競爭法需根據(jù)實驗步驟分為直接競爭和間接競爭兩種，主要用來檢測小分子抗原，在食品安全檢測中應用最多。

最早在1998 年，CERNI 等提出一種高效的提取方法，通過酶聯(lián)免疫法檢測牛肝中的地塞米松，其回收率達到130%，檢出限與定量限分別為1.43 μg·kg-1、2.09 μg·kg-1。VDOVENKO 等[1]研 究出一種利用過氧化酶檢測牛奶中地塞米松含量的策略，將25%的甲醇添加到牛奶中，通過離心方法加以處理，規(guī)避了基質(zhì)效應，由此檢測的IC50為0.9 ng·mL-1，回收率為120%左右。羅曉琴等[2]提出的間接競爭酶聯(lián)免疫法在雞肉檢測樣本中的最低檢測限達到了0.1 μg·kg-1，變異系數(shù)在10%，該方法具有較高的靈敏性和準確度，前處理程序簡單，可達到獸藥殘留檢測標準。WANG 等[3]研制出地塞米松半抗原與多克隆抗體，提出了間接競爭酶聯(lián)免吸附法，用該方法檢測雞組織，IC50為0.061 ng·mL-1，檢出限為0.015 μg·kg-1，回收率處于90%左右。雞肉與雞肝內(nèi)的地塞米松檢出限對應為0.3 μg·kg-1、0.5 μg·kg-1，該方法具有較高的靈敏性和精密性，但也存在一定的不足，缺少特異性，且抗體在地塞米松類似物中存在交叉反應。通過間接競爭法檢測地塞米松殘留，具有較高的靈敏性和精確性，且用時短，檢測樣本量較大，比較適合應用于大量樣本檢測中，是現(xiàn)下較為普遍的獸藥殘留檢測方法。

2.2 免疫層析法

免疫層析法建立在20 世紀末期，融入了免疫技術(shù)與色譜層析技術(shù)，是一種全新的檢測技術(shù)手段，它是以抗原抗體特性免疫反應為主。在層析環(huán)節(jié)，抗體和待測物相互結(jié)合變成復合物，借助毛細作用力完成層析，再被抗體或者抗原加以捕獲，一點點聚集，借助肉眼或者儀器進行觀察，完成定量檢測。免疫層析法可進行單人份檢測，具有對操作人員要求不高、檢測高效、成本低以及應用廣泛等優(yōu)點。

WANG 等[4]研制出了抗地塞米松單克隆抗體，這一抗體具有較強的特異性，其IC50為0.095 ng·mL-1，并在此基礎(chǔ)上提出免疫層析膠體金試紙條，它在牛奶中的視覺臨界值為0.5，一次檢測的時間在10 min。ZHANG 等[5]提出以上轉(zhuǎn)換發(fā)光微球為基礎(chǔ)的免疫層析法，可用于高效、全面檢測動物組織內(nèi)部的地塞米松，IC50值為0.58 ng·mL-1，檢出限在0.3 μg·kg-1，平均回收率為84.5%，還可使用手持讀取儀在現(xiàn)場進行檢測。

免疫檢測技術(shù)在人類醫(yī)學和食品安全等領(lǐng)域得到了廣泛的應用。在早期，免疫層析技術(shù)通常借助膠體金顯色原理完成定性檢測，而最近10 年，熒光材料與檢測儀得到了進一步發(fā)展，依托免疫層析平臺形成的定量檢測產(chǎn)品已達到了產(chǎn)業(yè)化的規(guī)模。

2.3 氣相色譜法

氣相色譜主要以氣體充當流動相，載氣即為氣體流動相，通過加熱氣化處理注入樣口中的物質(zhì)，通過載氣向色譜柱轉(zhuǎn)送進行分離，之后不斷被檢出。氣相色譜主要用來分析分子量小、具有揮發(fā)性、不易分解的物質(zhì)，如果分子量大可利用不同的處理手段將其變成易于揮發(fā)的化合物加以測定。地塞米松本質(zhì)上是一種糖皮質(zhì)激素，由于缺少揮發(fā)性，在選用氣相色譜法進行檢測時應進行適當?shù)难苌磻瑸榇耍瑯悠非疤幚磔^為煩瑣。在早期，研究者主要利用OV-17 柱來檢測糖皮質(zhì)激素，可檢測出一定量的三甲基硅烷衍生物。氣相色譜具有一定的靈敏性，且符合獸藥殘留標準，但卻無法全面分解出痕量獸藥殘留情況。

2.4 高效液相色譜法

高效液相色譜是當前普遍應用的分離分析技術(shù)，它借助高壓輸液泵把規(guī)定流動相轉(zhuǎn)入含固定相的色譜柱內(nèi)，因柱內(nèi)各成分于兩相中表現(xiàn)出不同的分配系數(shù)差異，由此得以分離，經(jīng)由檢測器完成檢驗。此方法適合應用于不易揮發(fā)的、熱不穩(wěn)定化合物。在糖皮質(zhì)激素檢測中，一般選用含紫外檢測器的色譜儀，此類色譜儀具有較高的選擇性與靈敏性。

2.5 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）是把GC 與MS 經(jīng)由接口相互連接，GC 對復雜混合物進行分離，變成單組分以后流向MS，MS 則是把位于電場與磁場內(nèi)不斷運動的離子依托質(zhì)荷比相互分離隨后檢測的一種方法。色譜法無法準確判斷分析物，也不能有效鑒定內(nèi)部結(jié)構(gòu)，但與質(zhì)譜法聯(lián)用可有效解決上述問題。近年來，隨著色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的問世，很多研究人員開始嘗試利用GC-MS 檢測動物源性食品內(nèi)部的甾體激素殘留情況，此種方法具有良好的靈敏性。

2.6 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜-質(zhì)譜于液相色譜內(nèi)分離，離子化處理后經(jīng)由質(zhì)譜的質(zhì)量分析器把離子碎片依托質(zhì)量數(shù)分開，再利用檢測器獲得質(zhì)譜圖。該方法具有優(yōu)良的選擇性與較高的靈敏性，可全面剖析復雜樣品基質(zhì)內(nèi)部的痕量組分，并可準確辨識糖皮質(zhì)激素內(nèi)部的差向異構(gòu)體。DRAISCI 等[6]利用加速溶劑萃取法可有效提取牛肝臟內(nèi)部的倍他米松與地塞米松，經(jīng)由液相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用法進行檢測，最低定量限為10.3 μg·kg-1，回收率為75%。ANTIGNAC 等[7]利用C18固相萃取柱進行濃縮與凈化處理，利用此法可檢測出牛肉、尿液、毛發(fā)內(nèi)的倍他米松與地塞米松，在肉品和尿液中殘留最低檢測限是0.05 μg·kg-1，在毛發(fā)中的則是6 μg·kg-1，回收率在50%。

檢測牛奶樣品時，因內(nèi)部含有大量的蛋白質(zhì)與脂肪，整體目標化合物含量不高，非常容易遭受干擾，因此，進行前處理十分關(guān)鍵。任宏彬等[8]在使用該法檢測牛奶中的地塞米松時，利用固相萃取法檢測樣品，并改進色譜條件，其檢出限與定量限分別為0.08 μg·kg-1、0.25 μg·kg-1，對應回收率在80%左右。

3 展望

綜上所述，酶聯(lián)免疫層析法的靈敏性高、特異性突出、成本低廉，但實際操作離不開專業(yè)人員，耗用時間較長、程序復雜，且對樣本數(shù)量還有一定的要求，否則將會造成無形的浪費，通常應用于中心實驗室檢驗中。生物技術(shù)的大力發(fā)展與食品安全關(guān)注度的提升加快了地塞米松免疫檢測技術(shù)的發(fā)展進程，從理論層面來說，只要具有地塞米松半抗原與抗體，便能開發(fā)出集免疫層析和酶聯(lián)免疫等于一身的免疫檢測法。從免疫層析的角度來說，因近年涌現(xiàn)出不同的標記物，可進一步提升檢測結(jié)果的靈敏性，原有的膠體金或者微球免疫熒光可達到各國在食品中提出的地塞米松檢測標準，在未來，將重點探索前處理簡化問題，進一步增加檢測方法的便捷性和高效性。而氣相色譜法需要在前期采用衍生化處理，前處理相對復雜，實際應用較少。近年來，隨著聯(lián)用技術(shù)水平的提升，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)得到了高度應用，無論是液相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用還是超高效液相色譜、串聯(lián)質(zhì)譜法都整合了高分離能力、較強的選擇性、突出的靈敏性等特點，大大優(yōu)化了樣品分析工作，現(xiàn)下在藥物、食品和環(huán)境等不同領(lǐng)域得到了高度應用，且在法定動物源性食品中的應用也較多。動物源性食品內(nèi)部的地塞米松殘留不是很多，其本質(zhì)是糖皮質(zhì)激素，實際檢測中也存在大量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)，基質(zhì)復雜不便分離，會影響實驗結(jié)果的準確性，降低儀器的可用性。因此，在測定前通常會借助不同的凈化處理手段進行處理，以富集檢測物，提升檢測結(jié)果的準確性，然而樣品前處理大多較為復雜，儀器造價偏高，且離不開專業(yè)人員，基于以上因素制約了其在基層范圍的推廣，影響了高通量檢測。

4 結(jié)語

眾所周知，獸藥殘留情況關(guān)乎著動物源性食品最終的安全，而檢測技術(shù)是維系食品安全的重要支撐，在社會生產(chǎn)生活中應加強在地塞米松殘留量上的檢測，并健全相關(guān)法律體系，加大安全監(jiān)管力度，從養(yǎng)殖源頭著手進行控制與規(guī)范，遵循休藥期，切實保障食品安全。