T-SPOT.TB在涂陰活動性肺結核診斷中的臨床價值

梁志勇

清遠市慢性病防治醫院(廣東 清遠 511500)

肺結核為常見結核感染性疾病的一種，涂陰活動性肺結核指的是3份以上痰圖片鏡檢抗酸桿菌陰性，且胸部X線檢查顯示特征符合于活動性肺結核的病例，病情隱匿，傳染性較小，可接觸更多人群，致使肺結核廣泛傳播[1-2]。不僅如此，大量研究均顯示，涂陰活動性肺結核若未及時得到有效治療，1～5年內有極大的風險可轉化為涂陽肺結核，增大治療難度[3]。因此，對于涂陰活動性肺結核，臨床上應早期確診，并及時干預，以往臨床上對肺結核的診斷方法包括TB-AB、PPD等，診斷結果受多方面因素的影響，準確率不夠理想。結核感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)為γ干擾素釋放試驗的一種，對結合分歧桿菌感染由較高的敏感度、特異度，近年來逐漸被廣泛應用于肺結核診斷中[4]。本院近年來通過T-SPOT.TB對涂陰活動性肺結核進行診斷，現以2021年11月-2022年11月接收的46例涂陰肺結核患者、健康人員為對象展開研究，以進一步探討其診斷價值，并報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料于2021年11月-2022年11月在本院接受治療的涂陰活動性肺結核患者中選取46例，設為觀察組。46例患者中，24例為男性，22例為女性；年齡24～58歲，平均(41.02±6.53)歲。另選取同期在本院體檢的46例健康人員，設為對照組，包括男性25例，女性21例，年齡25～58歲，平均(41.10±6.55)歲。

納入標準：以《肺結核基層診療指南(實踐版·2018)》[5]為參照，觀察組明確確診為涂陰活動性肺結核，對照組則排除肺結核；年齡＞18歲，且＜60歲；病歷、檢查資料完整；知曉研究，并配合簽署知情同意書。排除標準：肺外結核合并；復治肺結核；免疫系統疾病、艾滋病合并；長期免疫抑制劑服用；妊娠、哺乳期女性。本院醫學倫理會審批通過了此次研究，且對比兩組性別、年齡，發現差異無統計學意義(P＞0.05)，有可比性。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB 采集受檢者5mL外周靜脈血液標本，肝素抗凝，室溫下運送保存，4h內送檢。對外周血單個核細胞進行分離，洗滌后進行計數。檢測試劑盒購自英國Oxford Immunotec Liminted公司，按試劑說明書進行檢測。取單核細胞，于4個預包被有γ干擾素抗體的反應孔內加入，并以此加入結核特異抗原、抗原B。置入37℃、5%CO2環境，進行孵育，過夜。次日，洗板，隨后予以60min孵育，再次進行洗板，取底物顯色液進行加入，孵育7min。通過蒸餾水實施反應終止處理，記錄斑點形成細胞，1個效應T淋巴細胞通過1個斑點表示，以抗原A和(或)抗原B孔反應情況為依據對結果進行判斷，具體如下：對照孔斑點數介于0～5 SFCs/2.5＊105PBMCs，樣本斑點數-對照組斑點數≥6 SFCs/2.5＊105PBMCs表示陽性，對照孔斑點數≥6個，樣本斑點數≥對照孔斑點數2倍也表示陽性[6]。

1.2.2 結核抗體(TB-AB)檢測 采集受檢者5mL外周靜脈血液標本，肝素抗凝，室溫下運送保存，4h內送檢。檢測試劑盒由上海奧普生物醫藥有限公司提供，按試劑說明書展開檢測。取2滴封閉液，于反應板的反應孔中加入，隨后取血清標本(40μL)加入，再依次加入洗活液(6滴)、金標液(2滴)、洗滌液(6滴)，目測觀察與判讀結果：可見質控點為紅色，且反應孔內有紅色斑點出現，即判定為陽性[7]。

1.3 觀察指標(1)兩組患者的T-SPOT.TB、TB-AB陽性檢出率。(2)觀察組患者的診斷結果。(3)對照組患者的檢測結果。診斷效能判定與計算方法：真陽性(TP)、假陽性(FP)、真陰性(TN)、假陰性(FN)。診斷符合率=(TP+TN)/總例數×100；敏感度=TP/(TP+FN)×100%；特異度=TN/(TN+FP)×100%。

1.4 統計學分析此研究數據以SPSS 20.0進行處理，計數資料采用百分率(%)表示，兩組間比較檢驗方法是χ2，計量資料采用均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者T-SPOT.TB、TB-AB陽性檢出率觀察組T-SPOT.TB陽性檢出率是86.96%，比對照組的19.57%高，觀察組TB-AB陽性檢出率是80.43%，比對照組的34.78%高(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者T-SPOT.TB、TB-AB陽性檢對比[n(%)]

表1 兩組患者T-SPOT.TB、TB-AB陽性檢對比[n(%)]

組別 例數(n) T-SPOT.TB TB-AB對照組 46 9(19.57) 16(34.78)觀察組 46 40(86.96) 37(80.43)χ2值 - 41.961 19.628 P值 - 0.000 0.000

2.2 觀察組患者檢測結果在觀察患者中，T-SPOT.TB診斷符合率是95.65%，敏感度是77.56%，特異度是80.00%，比TB-AB的82.61%、90.00%、50.00%高(P＜0.05)，見表2。

表2 觀察組患者檢測結果[n(%)]

2.3 對照組患者檢測結果在對照組患者中，T-SPOT.TB診斷符合率是97.83%，敏感度是97.62%，特異度是100.00%，比TB-AB的89.13%、90.00%、42.86%高(P＜0.05)，見表3。

表3 對照組患者檢測結果[n(%)]

3 討 論

結核病指的是由結核分歧桿菌感染導致的慢性疾病，肺結核為其中常用的一種，由肺部受結核分歧桿菌感染導致。肺部與外界環境相通，通過呼吸進行氣體交換，可致使結核桿菌經呼吸道侵入，導致肺結核傳播，引發社會功能衛生問題[8]。除此以外，肺結核患者若未及時得到有效治療，可對肺部組織產生嚴重損害，增加治療難度，致使患者生存質量嚴重下降。因此，臨床上不斷強調肺結核的早期確診與治療，涂陰活動性肺結核患者多無明顯肺結核臨床癥狀，且痰涂片鏡檢、抗酸桿菌等檢查結果為陰性，確診難度較大，而此病病情進一步發展可轉變為涂陽肺結核，增大傳染性與治療難度[9-10]。基于此，臨床上應不斷探尋涂陰活動性肺結核患者的有效診斷方法，進一步提升此病早期診斷準確性，進而有效防控肺結核。

現階段，臨床上對肺結核的診斷方法較多，T-SPOT.TB、TB-AB等均較為常用，本次研究通過T-SPOT.TB對涂陰活動性肺結核實施診斷，并與TB-AB進行對比，結果顯示，觀察組T-SPOT.TB、TB-AB陽性檢出率均比對照組高(P＜0.05)，與王奕[11]等人的研究結果相似；另外，本次研究還發現，在觀察組、對照組診斷中，T-SPOT.TB診斷符合率、敏感度、特異度均比TB-AB高(P＜0.05)，相似于Wa A[12]等人的研究，提示在涂陰活動性肺結核患者診斷中，T-SPOT.TB、TB-AB陽性檢出率均較為理想，但T-SPOT.TB診斷效能更佳。T-SPOT.TB是一種γ-干擾素釋放試驗，通過對結核分枝桿菌進行特異性的抗原刺激，采用酶聯免疫斑點技術對此條件下外周血單個核細胞中γ-干擾素釋放效應下的T細胞數目。在肺結核診斷中，T-SPOT.TB具體原理如下：受到結核分枝桿菌特異性抗原后，人體內的T細胞可發生致敏改變，成為效應性的T細胞，外周血單核細胞結合結核分枝桿菌特異性抗原后，T細胞可大量分泌γ-干擾素，對巨噬細胞產生激活作用，對結核分枝桿菌進行吞噬、殺滅[13]。而肺結核患者外周血液中已經有效應T細胞存在，被T-SPOT特異性抗原刺激后，可直接分泌γ-干擾素，T-SPOT.TB可捕獲此γ-干擾素，以斑點數的方式呈現最終結果，每一斑點表示一個效應T細胞，斑點數量即為致敏T細胞數目[14]。我國相關診療指南建議，T-SPOT.TB尚無法排除活動性肺結核，但對于涂陰肺結核等缺少病原學診斷依據的肺結核，可作為常規檢查手段。國內關于T-SPOT.TB的診斷肺結核的研究顯示，靈敏度、特異度有較高差異，靈敏度介于53.0%～98.0%，特異度介于60.0%～90.0%以上，本次研究中，T-SPOT.TB診斷符合率是95.65%，敏感度是77.56%，特異度是80.00%，與報道基本一致，進一步表明，在涂陰活動性肺結核診斷中，T-SPOT.TB有良好價值[15-16]。TB-AB試驗是肺結核的常用診斷技術，操作簡單、快速，但免疫功能可對溶血樣本、高脂血樣本產生影響，致使假陰性結果出血，降低診斷的敏感度與特異度。

相關研究顯示，在具體臨床應用中，T-SPOT.TB診斷涂陰活動性肺結核的效能會受免疫狀態、年齡等因素的影響[17]。一項原因T-SPOT.TB診斷活動性肺結核影響因素的調查顯示，免疫抑制劑使用、高齡、合并淋巴細胞減少癥、合并艾滋病等均可導致T-SPOT.TB診斷出現假陰性結果，因此，此次研究排除了此類患者[18]。另外，在部分臨床研究中，T-SPOT.TB診斷涂陰活動性肺結核的的特異度、敏感度均比此次研究高，究其原因，可能由于此次研究患者均接受了抗結核治療，而效應T淋巴細胞存活的時間僅為4～6d，經抗結核治療后，結核均的數量降低，效應T淋巴細胞技術隨之下降，行T-SPOT.TB檢測時，部分結核分歧桿菌已經消滅，因此可導致靈敏度與特異度降低。基于以上分析，臨床上選擇T-SPOT.TB檢測對涂陰活動性肺結核患者實施診斷時，應全面考慮患者診斷效能影響因素，對于存在可能影響T-SPOT.TB診斷準確性的患者，可聯合使用其他診斷技術，如TB-AB、結核菌素試驗等，以進一步提升涂陰活動性肺結核的確診率。

綜上所述，對涂陰活動性肺結核進行診斷時，選擇T-SPOT.TB診斷效能良好，診斷符合率、敏感度、特異度均較高，臨床上可結合患者實際情況積極實施此檢測，必要時可選擇聯用其他檢測方法，以達到有效提升此病診斷準確率的效果。但此次研究存在不足，包括僅選取46例樣本、未與更多檢測方法對比，且未考慮更多診斷影響因素等，需展開更大規模的研究，以進一步驗證T-SPOT.TB在涂陰活動性肺結核患者診斷中的臨床價值。