康派特組織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口的有效性

卜文，劉文謙，李彥，劉超，叢源，沈連忠（通信作者）

山東欣博藥物研究有限公司 （山東 臨邑 251500）

α-氰基丙烯酸正丁酯是一種具有抑菌作用的醫用粘合劑，可在血液、組織液中陰離子的作用下快速聚合固化成膜，產生一層具有高抗拉強度的彈性薄膠膜[1-2]。該膠膜約5～10 d 后可隨角化皮膚逐步脫落[3]。康派特組織粘合膠的主要成分為α-氰基丙烯酸正丁酯，并添加了少量著色劑和穩定劑，適用于接近皮膚表面的封閉，不可用于皮膚亞表層的閉合[4-5]。作為一種新型醫用膠，康派特組織粘合膠在皮膚上使用的安全性和有效性需要進一步觀察。目前臨床上評價粘合劑安全性、有效性的動物實驗常規采用大鼠、家兔和犬作為實驗動物[6-17]，關于小型豬的研究較少。小型豬被覆的毛發緊附于皮下組織，其體表毛發的疏密、皮膚脂肪層的形態學和增生動力學、皮膚的血液供給、切口的修復機制等均與人類相似[18]。因此，相對于大鼠、家兔和犬，小型豬的皮膚更適合用于藥物和醫療器械的有效性、安全性評價[19]。基于此，本研究探討康派特組織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口的有效性，并與Histoacryl 醫用組織膠水[15-17]進行比較，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物與飼養環境

實驗動物：購于北京實創世紀小型豬養殖基地[動物生產許可證號：SCXK（京）2013-0008]的巴馬小型豬（普通級）8 只，雌雄各半，8～9 月齡，體重15.23～21.06 kg。實驗動物質量合格證編號：No.111014000000097。

飼養環境：山東欣博藥物研究有限公司，山東欣博藥物安全評價研究中心，普通級大動物室（環境控制：溫度16～26 ℃，濕度40～70%，換氣次數≥8 次/h，照明時間12 h/12 h 明暗交替）。實驗動物使用許可證號：SYXK（魯）2016-0011。設施使用許可證號：H20150050。飼料購于北京實創世紀小型豬養殖基地，飼料批號：15111803。實驗動物術前禁飼12 h。

本研究已通過本單位實驗動物倫理委員會審查。

1.1.2 供試品

康派特組織粘合膠：北京康派特醫療器械有限公司生產，國械注準20173023182，批號160415；型號：涂抹LT 型；規格：0.4 ml/支；性狀：藍色透明液體。

1.1.3 上市對照品

Histoacryl 醫用組織膠水（Histoacryl Tissue Adhesive）：貝朗醫療西班牙股份公司生產，國械注進20173026756，批號215272N2；商品名：藍靈；型號：1050044；規格：0.5 ml/支；性狀：藍色透明液體。

1.1.4 麻醉藥品

戊巴比妥鈉：德國莫克公司生產，商品編號NO.6902100，批號150408，含量99.4%，規格25 g/瓶。

1.1.5 實驗儀器

TCS-150 電子臺秤（常州牛頓力稱重系統有限公司），CWT7-3 電子天平（常州牛頓力稱重系統有限公司），Tissue-TekTECTM5 組織包埋機（日本櫻花檢驗儀器株式會社），Tissue-TekVIP6 全封閉組織脫水機（日本櫻花檢驗儀器株式會社），JLX-A 型蠟塊修復儀（天津市久圣醫療電子儀器有限公司），TK-218 型恒溫攤片烤片機（湖北泰維科技實業有限公司），BX53 雙目顯微鏡（日本奧林巴斯株式會社）。

1.2 方法

1.2.1 分組

選用8 只巴馬小型豬，用TOXSTAT 2006 軟件按性別和體重隨機分為A、B 兩組，每組4 只，雌雄各半。A 組術后1 周剖檢，B 組術后4 周剖檢。

1.2.2 手術方法

采用同體左右側自身對比法。為實驗動物肌內注射3% 戊巴比妥鈉30 mg/kg 進行麻醉，腹部朝下置于手術臺上。剃除背部手術部位毛發，范圍約15 cm×15 cm。先用75% 乙醇擦拭手術部位，再用聚維酮碘消毒手術部位，然后鋪洞巾。用手術刀在背中線兩側旁開3 cm 處各劃開3 個長3 cm、深1 cm 的切口，切口間距約4 cm，方向與背部中線垂直。左側1、2、3 切口用康派特組織粘合膠粘合，右側1、2、3 切口用Histoacryl 醫用組織膠水粘合。

1.3 觀察指標

（1）臨床癥狀：于籠旁觀察實驗動物，記錄其臨床表現和特點，包括外觀、體征、行為活動、飲食、對刺激的反應、腺體分泌、呼吸、分泌物、糞便性質、死亡情況，以及切口是否有開裂、滲出和感染等不良反應，2 次/d。（2）體重：用TCS-150 電子臺秤的“預去皮”功能去除稱重籠具的重量后，稱量實驗動物的體重，1 次/周。（3）攝食量：實驗期間，每只實驗動物每日上、下午各喂食（350±5）g 飼料，次日上午記錄飼料剩余量（按照剩余0%、25%、50%、75%、100% 4 擋記錄），1 次/d。（4）切口局部癥狀：每日肉眼觀察切口局部膠體是否可見（膠體明顯可見記“++”，膠體不清楚記“+”，未見明顯膠體記“-”）及切口局部刺激反應（切口的刺激評分方法見表1，每組動物每側12 個切口的平均評分對應的反應類型見表2），1 次/d。（5）剖檢：每只實驗動物肌內注射3%戊巴比妥鈉30 mg/kg 麻醉后，采用頸動脈放血方式安樂死，剖檢動物，大體觀察動物各臟器組織和切口部位有無異常病變，然后取切口局部皮膚和異常臟器組織，用4%甲醛固定，行常規組織切片鏡檢，并對供試品側和上市對照品側進行刺激性評價，評分標準見表3～4。同時，對切口的纖維組織增生情況進行評分，評分越高表明恢復越好，其評分不計入刺激指數。

表1 皮膚反應積分系統

表2 刺激強度評價標準

表3 組織反應顯微鏡計分系統評分

表4 刺激指數

1.4 統計學處理

采用EXCEL 軟件進行數據統計，采用TOXSTAT 2006 統計軟件進行數據處理。計量資料以±s 表示，采用t檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床癥狀

實驗期間，動物切口部位均未見開裂、滲出和感染癥狀，臨床癥狀觀察均未見明顯異常。

2.2 體重

B 組術后21 d 和28 d 的體重均高于術前，差異有統計學意義（P<0.05），表明動物術后體重略有增長，未見明顯并發癥，見表5。

表5 兩組體重比較（kg，±s）

表5 兩組體重比較（kg，±s）

注：與術前比較，aP<0.05

組別 只數術前術后7 d術后14 d術后21 d術后28 d A 組422.19±1.47 22.34±1.45 B 組422.06±0.39 22.29±0.37 22.70±0.42 23.31±0.42a 25.05±0.86a

2.3 攝食量

實驗期間，動物均未見剩余飼料。

2.4 切口局部癥狀

2.4.1 膠體狀態

術后1～4 d 兩側膠體均明顯可見，術后5 d 開始兩側膠體均不清楚；術后21 d 后兩側均未見明顯膠體，見表6。

表6 兩組切口膠體狀態比較（個）

2.4.2 切口局部刺激反應

實驗期間兩組手術當天兩側切口局部可見輕度紅斑，刺激強度為輕度，術后1 d 開始兩側切口局部均未見明顯刺激性反應，刺激強度為極輕微，見表7。

表7 切口局部刺激反應統計數據

2.5 病理學檢查

剖檢：實驗動物各組織臟器及手術部位均為未見明顯大體病理學改變。

組織病理學檢查結果提示，術后1 周兩側切口部位均可見極輕度或輕度的炎癥細胞浸潤、極輕度出血、輕度至中度的纖維組織增生等組織病理學改變，術后4 周可見不同程度組織修復（致密結締組織修復或完全修復），且未見其他明顯組織病理學改變。見圖1～6。

圖1 手術部位炎性細胞浸潤，纖維組織增生（×100） （術后1周，動物編號/組別：M001/ A 組 Histoacryl 醫用組織膠水）

圖2 手術部位炎性細胞浸潤、纖維組織增生（×100） （術后1周，動物編號/組別：F002/ A 組 康派特組織粘合膠）

圖3 手術部位組織修復（致密結締組織修復） （×100） （術后4周，動物編號/組別：F004/ B 組 Histoacryl 醫用組織膠水）

圖4 手術部位組織修復（致密結締組織修復） （×100） （術后4周，動物編號/組別：M003/ B 組 康派特組織粘合膠）

圖5 手術部位組織修復（完全修復）（×100）（術后4 周，動物編號/組別：F003/ B 組 Histoacryl 醫用組織膠水）

圖6 手術部位組織修復（完全修復）（×100）（術后4 周，動物編號/組別：F003/ B 組 康派特組織粘合膠）

根據組織病理學組織反應評分統計評價結果顯示，術后1 周實驗動物均可見極輕度的皮膚刺激，但康派特組織粘合膠與Histoacryl 醫用組織膠水涂膠部位兩者差值為0（雄性）或0.3（雌性），刺激反應程度均為無，表明兩者刺激強度無明顯差異，見表8；術后4 周所有動物手術部位均未見有明顯皮膚刺激反應。

表8 刺激評分結果（1 周雄性動物）

表9 刺激評分結果（1 周雌性動物）

表10 刺激評分結果（4 周雄性動物）

表11 刺激評分結果（4 周雌性動物）

3 討論

以往臨床常用的皮膚切口處理方式是縫合，但縫合前需要注射麻醉藥物，縫合后需及時換藥、拆線，操作煩瑣，還有可能增加疼痛和刺激，且切口愈合后會遺留明顯的瘢痕，影響美觀。近年來，隨著醫療需求多樣性逐漸增加，人們對切口處理方式提出了更高的要求，特別是女性和兒童患者不僅要求切口愈合快速有效、減少疼痛，還要求避免遺留瘢痕[20-22]。近年來出現的一次性使用無菌醫用敷料貼可在切口皮下縫合后外敷使用，有利于減少換藥步驟，且無須拆線，同時具有淡化瘢痕的作用。但該敷料貼使用前仍需進行皮下縫合，使用后患者活動受限，影響美觀，且需要防止敷料貼開裂脫落。康派特組織粘合膠克服了傳統縫合法和一次性使用無菌醫用敷料貼的不足，傷痕較淺、切口邊緣對合良好的切口可在清創后直接使用（無須麻醉），且無須定期換藥，而手術切口可在皮內縫合減輕張力后使用。同時，康派特組織粘合膠的主要化學成分α- 氰基丙烯酸正丁酯具有極強的粘合力，與組織液接觸后迅速發生聚合反應，5～15 s 即由液體變為固體，可迅速粘合切口兩側皮膚，并在切口表面形成一層防水保護膜，有效阻擋細菌，防止感染，且使用后無須覆蓋其他敷料。此外，康派特組織粘合膠膠體呈藍色，便于通過視覺控制用量，能有效防止組織膠水進入切口。本研究采用巴馬小型豬皮膚切口模型評價康派特組織粘合膠產品的安全性和有效性，觀察其愈合過程中切口的恢復情況、粘合膠膠體變化、局部組織病理學變化等，并與同類產品Histoacryl 醫用組織膠水進行比較，評價指標客觀準確，數據真實可靠，可以滿足對康派特組織粘合膠產品的非臨床評價要求。

綜上，本試驗條件下，康派特組織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口安全有效，且與Histoacryl 醫用組織膠水比較未見明顯差異。