體內黃曲霉毒素檢測技術研究進展

陳沫冰，嚴 慧，劉 偉

（1.司法鑒定科學研究院上海市法醫學重點實驗室上海市司法鑒定專業技術服務平臺 司法部司法鑒定重點實驗室，上海 200063； 2.中國藥科大學 藥學院，江蘇 南京 210009）

黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等菌株產生的次級代謝物[1]，黃曲霉毒素衍生物約有20 種，常見的天然黃曲霉毒素衍生物包括黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）、黃曲霉毒素B2（Aflatoxin B2，AFB2）、黃曲霉毒素G1（Aflatoxin G1，AFG1）和黃曲霉毒素G2（Aflatoxin G2，AFG2）等。 黃曲霉毒素的毒性已被廣泛研究，并從動物的毒物代謝動力學模型中獲得了大量信息。 黃曲霉毒素具有劇毒性，半數致死量（median lethal dose，LD50）為0.249 mg/kg，其毒性是氰化鉀的10 倍，是砒霜的68 倍[2]。 黃曲霉毒素具有遺傳毒性、肝毒性、致癌性、致突變性、致畸性和免疫抑制毒性[3-5]。 長期接觸黃曲霉毒素會誘發癌癥，導致兒童營養不良和發育遲緩[6-8]。 AFB1是黃曲霉等菌株產生的主要毒素，研究表明，除黃曲霉毒素共有的毒性外，AFB1還具有腎毒性、脾臟毒性、心臟毒性，此外還會損害睪丸導致男性不育，以及加速艾滋病從感染到患病的進程[9-11]。 糧食作物（谷物、油籽、香料和堅果等）在生產過程的任何階段（如種植、收獲、加工、儲存和運輸）都容易受到霉菌的污染，食用受到黃曲霉毒素污染的食物是人類和動物接觸黃曲霉毒素的主要途徑，并且黃曲霉毒素還可通過空氣傳播增加人類和動物接觸黃曲霉毒素的風險[12-13]。

由于黃曲霉毒素在糧食中廣泛存在且又具有毒性，黃曲霉毒素是法醫毒物學領域的重點研究對象。 人們通過測定食品中黃曲霉毒素的含量來評估人體攝入黃曲霉毒素的情況，但這種方法準確性不高，這是因為黃曲霉毒素在特定食物中分布不均，人們有可能會通過飲食之外的其他途徑接觸黃曲霉毒素，且個體的吸收分布代謝情況也存在差異，對生物基質中黃曲霉毒素原體及其代謝物進行檢測能更準確地反映人和動物攝入的黃曲霉毒素情況[14-17]。 檢材中黃曲霉毒素的檢測結果可為黃曲霉毒素相關中毒事（案）件的偵破提供線索，探索黃曲霉毒素攝入與黃曲霉毒素中毒之間的聯系，對人群攝入的黃曲霉毒素進行風險評估，有利于及時采取黃曲霉毒素管控措施，保障人們的身體健康。

1 體內過程

黃曲霉毒素進入體內后主要經肝臟的細胞色素P450酶系氧化代謝，AFB1經氧化代謝后主要生成黃曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1）、黃曲霉毒素Q1（Aflatoxin Q1，AFQ1）、 黃曲霉毒素B1-內8，9-環氧化物（Aflatoxin B1endo-8,9-epoxide）、黃曲霉毒素B1-外8，9-環氧化物（Aflatoxin B1exo-8,9-epoxide）。前3 種物質主要經尿液排出，黃曲霉毒素B1-外8，9-環氧化物在體內與生物大分子相互作用，攻擊脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）分子產生黃曲霉毒素B1-N7-鳥嘌呤加合物（Aflatoxin-N7-Gua-nine，AFB1-N7-Gua），與血清白蛋白上的賴氨酸殘基結合形成黃曲霉毒素-白蛋白加合物（AFs-Albumin），并最終以黃曲霉毒素-賴氨酸加合物（Aflatoxin-lysine adducts）的形式存在外周血液循環中[18-19]。

AFM1與AFB1-N7-Gua 可反映短時間內是否攝入過黃曲霉毒素；AFM1與AFB1-N7-Gua 主要經尿液排泄，AFM1還可通過哺乳動物的乳汁排出；AFB1-N7-Gua 不僅是評估個體黃曲霉毒素攝入的有用標記物，還是肝癌風險的最佳預測因子之一；依據半衰期判斷，血清黃曲霉毒素-賴氨酸加合物水平被假定為可反映過去2~3 個月內個體攝入黃曲霉毒素的情況[18，20]。 尿液中的AFB1-N7-Gua 和血清中的黃曲霉毒素-賴氨酸濃度水平都與黃曲霉毒素的膳食攝入量相關，已被成功應用于估算人類攝入AFB1的含量[21-22]。

因為黃曲霉毒素-賴氨酸加合物只能反映最近2~3 個月內黃曲霉毒素的攝入情況，而毛發生長緩慢，大約每周生長0.25 cm，可用于檢測長期接觸的藥物和毒素，頭發中的黃曲霉毒素生物標志物可用來評估多年來生物接觸黃曲霉毒素的情況[23]。 關于檢測頭發中黃曲霉毒素的研究較少，僅有一項研究采用了高效液相色譜-熒光檢測器法對頭發中的AFB1進行檢測，但該研究頭發樣本中的AFB1并不是由生物體內轉入，而是采用黃曲霉毒素和頭發共同孵育的方式進入頭發內，缺少AFB1在頭發中的代謝過程和結構形態等相關信息[18]。 AFG1經類似的體內代謝后會形成白蛋白加合物，AFB2、AFG2由于缺乏第8 和第9 碳原子之間的雙鍵，在體內不能形成環氧化物[18]。 AFB1體內代謝途徑可詳見文獻[16]。

2 樣品前處理方法

樣品前處理主要是為了消除基質干擾，預濃縮目標分析物，以便達到更好的檢測效果，并提供與分析技術相兼容的萃取物。 黃曲霉毒素的生物基質主要是尿液和血液。 大部分生物體液可直接用于質譜分析，這樣可最大限度地減少代謝物的損失。 比如尿液、透析液和消化液，通常只需要稀釋、調節pH 值、蒸發或離心即可，但為了進一步消除干擾效應，防止高鹽濃度基質對目標物造成電離抑制，或是非揮發物對質譜儀造成損害，上清液會根據需要做進一步處理。 血清或血漿中存在高濃度蛋白質、磷脂等物質，需要在前處理步驟中除去[24]。

2.1 稀釋后進樣

稀釋后進樣（dilute and shoot，DAS）前處理方法在尿液中應用較多。DAS 操作簡單、成本低，但需要仔細優化稀釋因子，且經常會出現基質效應和干擾基質峰的現象，這可能會降低靈敏度[25]。JOHANNES等[26]采用直接稀釋后進樣的方法對德國、海地、孟加拉國等地的人群尿液中的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1進行篩查，樣品經離心后去除固體殘留物，再用體積比為0.94∶0.05∶0.01 的水-乙腈-甲酸溶液進行稀釋，取上清液分析。該方法的回收率為109%~129%，AFM1僅在海地人群尿液樣本中檢出。DEBONGNIE 等[27]利用離心后取上清液過濾膜直接進樣的方法對黃曲霉毒素進行分析，黃曲霉素檢出限可達到pg級。

2.2 液液萃取

液液萃取（liquid-liquid extraction，LLE）是利用待測物質與干擾物油水分配系數不同而將待測物與干擾物分離的提取分離技術[28]。 在LLE 過程中，加入鹽輔助提取可促使極性化合物從水相轉移到有機相中[29]。 SONG 等[30]采用鹽析輔助液液萃取法（salting-out assisted liquid-liquid extraction，SALLE）作為前處理方法，AFB1和AFM1的萃取回收率為85%~88%。分散液液微萃取（dispersive liquid-liquid microextraction ，DLLM）技術基于三元溶劑體系（高密度萃取溶劑、水溶性溶劑和極性分散劑溶劑），利用萃取溶劑的細小液滴在水相中進行分散，萃取劑與水相之間的接觸表面積增大，使得萃取平衡較快[31]。 TOLOSA 等[32]運用DLLM 提取魚血漿中的黃曲霉毒素， 血漿樣品用乙腈沉淀蛋白后取上清液，在上清液中加入0.2 g 氯化鈉，再加入分散劑溶劑（乙腈）和萃取劑（乙酸乙酯），渦旋離心，在4℃條件下經相分離后提取有機相；該研究還比較了乙酸乙酯和三氯甲烷的萃取效果，結果發現，乙酸乙酯對黃曲霉毒素的萃取效果更佳。 SLOBODCHIKOVA等[16]運用乙酸乙酯三步LLE 提取人血漿中的17 種霉菌毒素，其中包括AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，該方法所測霉菌毒素均無明顯的基質效應，4 種黃曲霉毒素的回收率均在80%以上；該研究還考察了乙酸乙酯與甲基叔丁基醚對黃曲霉毒素的提取效果，結果表明，乙酸乙酯對黃曲霉毒素的提取效果更佳。 LLE 的優點在于選擇性好，可進行多次萃取達到富集目標物的目的，但不利于提取極性大的組分，并且在提取過程出現乳化現象還會導致目標物的損失[28]。

2.3 固相萃取

固相萃取（solid phase extraction，SPE）的原理是將不同的填料作為固定相填入微型小柱， 基于吸附、分配、離子交換或其他親和作用，將目標物或干擾物保留在柱子上，用適當溶劑洗脫，從而將目標物和干擾物相互分離[28]。SOLFRIZZO 等[33]將Oasis HLB固相萃取柱與Myco6in1 多種霉菌毒素免疫親和柱聯用，采用雙重凈化的方式對尿樣進行純化和濃縮，結果表明，AFM1的平均回收率為95%。 CHEN 等[34]對血漿中的4 種黃曲霉素進行測定，血漿用乙腈提取后利用Oasis PRiME HLB 固相萃取柱富集， 結果表明，Oasis PRiME HLB 固相萃取柱可降低基質效應，具有較高的萃取能力，回收率為92.1%~102%。固相萃取柱引入的干擾物質少， 在優化條件下有較高的萃取率，重現性好、樣品用量少，且易于實現自動化，但也存在價格昂貴，柱子易堵塞影響目標物的分離效果，以及樣品需要預處理過程等限制[28]。

2.4 QuEChERS 法

QuEChERS 法是一種精簡有效的前處理方法，由于具有快速、簡單、廉價、有效、可靠及安全（quick，easy，cheap，effective，rugged and safe）等特點，故命名為QuEChERS[35]。根據樣品基質和目標物不同，QuEChERS 法有了不同程度的改進。 JOSEP 等[36]運用簡化的QuEChERS 法提取乳汁中的黃曲霉毒素及其他霉菌毒素，該方法的回收率為64%~93%，黃曲霉素檢出限為1.25ng/mL。 凌阿茹等[37]運用QuECh-ERS前處理技術提取畜禽組織中6 種黃曲霉毒素及雜色曲霉素。 畜禽組織經β-葡萄糖醛酸酶酶解后用10 mL 體積比為84∶16 的乙腈-水溶液提取，然后用1.0 g 氯化鈉和1.0 g 無水硫酸鎂鹽析除水凈化、5 mL 正己烷脫脂。 王瑞國等[38]運用QuEChERS法提取動物血漿中包括AFB1在內的21 種霉菌毒素及其代謝物，黃曲霉毒素的定量限為0.05 ng/mL，黃曲霉毒素的平均回收率為62.0%~99.4%。 QuECh-ERS 法存在前處理回收率高，且可分析的物質種類廣泛，樣品處理過程快速、簡便，溶劑使用量少等優勢，但也存在處理需要的樣品用量大，容易產生基質效應等問題[39]。

3 分析方法

黃曲霉毒素在生物基質中的檢測方法主要有酶聯免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）、高效液相色譜-熒光檢測器法（high performance liquid chromatography-fluorescence detector，HPLC-FD）、高效液相色譜-串聯質譜法（HPLCtandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）、高效液相色譜-高分辨質譜法（HPLC-high resolution mass spectrometry，HPLC-HRMS）等分析方法。 ELISA 適合對大量樣品進行篩查；HPLC-FD 對黃曲霉毒素的定量具有很高的靈敏度；HPLC-MS/MS 分析速度快、靈敏度高，在定性定量分析已知目標物有更大的優勢； HPLC-HRMS 在定性分析未知代謝物和經修飾的化合物方面具有重要的價值。 在實際應用中應根據分析要求選擇分析方法。

3.1 ELISA

MARTINEZ 等[40]采用ELISA 試劑盒檢測46 名志愿者的尿液。 結果表明，78.5%的尿樣可檢出AFM1，質量濃度為0.1~3.1 ng/mL。 SEETHA 等[41]運用ELISA 檢測馬拉維農村230 人血液中的黃曲霉毒素賴氨酸加合物，血液中黃曲霉毒素賴氨酸加合物的檢出限為2.5 pg/mg 白蛋白[17]。 ELISA 操作簡單快速、靈敏度高、特異性強，適用于大量樣本的篩查，但易出現假陽性的結果，且重復性差[19]。

3.2 HPLC-FD

黃曲霉毒素具有香豆素結構，在紫外光的照射下可發出熒光[42]。 GABRIELE 等[43]將免疫親和層析與HPLC-FD 聯用，測定血清中黃曲霉毒素-賴氨酸加合物的含量。ANDRADE 等[44]運用HPLC-FD 測定母 乳 中 的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1和 赭 曲 霉毒素A，結果顯示，定量限為0.005~0.03 ng/mL，回收率為73%~99.5%，在分析的224 個母乳樣本中，有2 個樣本檢出了AFB1。 熒光檢測器的選擇性好、靈敏度高，但干擾因素較多，熒光淬滅、背景熒光等會影響測定結果的準確度，且使用熒光分析法缺乏結構信息，不能對結構上相似的黃曲霉素進行鑒別，不能滿足在一次運行過程中同時檢測大量分析物的需求[44-45]。

3.3 HPLC-MS/MS

HPLC-MS/MS 是分析黃曲霉毒素的最常用技術。 OSTERESCH 等[46]基于干血斑和干血清斑點技術對包括黃曲霉毒素在內的27 種霉菌毒素及其代謝物進行分析，結果顯示，黃曲霉毒素的定量限為0.05~0.125 ng/mL，但存在明顯的基質效應，干血斑基質和干血清斑點的基質效應分別為49%~423%、19%~125%。HPLC-MS/MS 只能檢測已知結構的目標物或代謝物，而不能檢測經代謝或修飾的未知霉菌毒素[47]。

3.4 HPLC-HRMS

黃曲霉毒素的未知天然衍生物及在生物體內經修飾和代謝的未知化合物作為潛在污染物還需進一步探索，對于未知化合物的結構解析使用高分辨質譜儀更有優勢，高分辨質譜儀將全掃描采集模式結合高分辨率和精確的質量測定，能將目標物分析與非目標化合物的篩選、新化合物鑒定和回溯數據分析相結合。 SLOBODCHIKVA 等[16]運用HPLCHRMS 檢測人血漿中的17 種霉菌毒素，檢測時間為33 min，定量限為0.1~3 ng/mL。 DASí-NAVARRRO 等[48]運用HPLC-HRMS 檢測100 名女性尿液中 包 括AFB1、AFB2、AFG1和AFG2在 內 的10 種 目標霉菌毒素以及其他非目標霉菌毒素。 結果發現，尿液樣品中檢出了目標黃曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1，還檢出了非目標黃曲霉毒素代謝物AFM1、AFM2、AFP1。 HPLC-HRMS 雖然已被證明在定性分析中具有重要的價值，但其在靈敏度、穩健性和線性動態范圍上不及HPLC-MS/MS[24]。

4 應用

黃曲霉毒素中毒可分為急性、亞急性或慢性中毒，這取決于黃曲霉毒素的攝入量、攝入時長以及物種的特異性和敏感性[49]。 黃曲霉毒素急性中毒癥狀包括嘔吐、出血、腹痛、黃疸、腦水腫、昏迷、抽搐，嚴重時甚至會導致死亡。 世界衛生組織（World Health Organization，WHO）根據世界范圍內黃曲霉毒素中毒案例和體外實驗的記錄，指出短時間內經常食用受AFB1污染的食品（質量分數≥1 mg/kg），可能會導致人類急性中毒，而在1~3 周內每天攝入0.02~0.12 mg/kg 被AFB1污染的食物，可能會導致嚴重的黃曲霉毒素中毒甚至死亡[50]。 黃曲霉毒素被列為一類致癌物，應減少與黃曲霉毒素的接觸[51]。研究表明，慢性乙型肝炎病毒感染和飲食中攝入黃曲霉毒素均會導致肝癌發病風險增高[52]。 通過對生物基質中黃曲霉毒素水平進行評估，可監測人群接觸黃曲霉毒素的情況，一方面有利于防止黃曲霉毒素急性中毒事件發生，另一方面可阻斷黃曲霉毒素的慢性毒害作用，對保護人類身體健康具有重要的意義。黃曲霉毒素檢測方法在生物基質中的應用詳見表1。

表1 黃曲霉毒素檢測方法在生物基質中的應用

4.1 黃曲霉毒素急性中毒

2004 年，肯尼亞有125 人因黃曲霉毒素急性中毒死亡。 通過對采集自黃曲霉毒素中毒爆發地區的玉米進行檢測，結果發現，AFB1的濃度高達4 400 ×10-9，是肯尼亞規定的食品中AFB1限值（20 ×10-9）的220 倍[57]。 1991 年，13 人因食用被硼酸和黃曲霉毒素共同污染的菜肴死亡，經檢測發現，在肝、腎、心、脾、肺和腦等器官中，AFB1、AFB2、AFG1、AFM1和AFM2以及黃曲霉毒醇含量很高[58]。 2016 年，坦桑尼亞爆發了的黃曲霉毒素中毒事件，其中15 人死亡，患者血液中黃曲霉毒素白蛋白加合物的質量分數為36~32 800 pg/mg[59]。 除了意外中毒事件，還有利用黃曲霉毒素毒性自殺事件的發生。 一名25 歲的年輕女性兩天內連續攝入5.5 mg AFB1試圖自殺，失敗后，該女性在兩周內連續攝入35 mg AFB1自殺，但都只出現輕微的中毒癥狀（皮疹、惡心和頭痛）[60]。

4.2 評估黃曲霉毒素攝入量及致癌風險

研究發現，黃曲霉毒素污染地區肝癌患者的TP53 抑癌基因的第249 位密碼子發生了顛倒突變（AGG→AGT），而在非黃曲霉毒素污染區肝癌患者的TP53 抑癌基因的第249 位密碼子卻沒有發現變化，AFB1進入體內代謝后會形成DNA 加合物導致DNA 突變，從而促使癌癥發生[61]。 CHEN 等[34]對10名肝癌志愿者的血清樣本進行分析，以評估AFB1膳食攝入與臨床研究中預期人類肝癌風險增加之間的關系，結果表明，膳食攝入AFB1與人類患肝癌風險增加呈正相關。 2009 年，在我國臺灣地區進行的研究觀察到AFB1的尿液代謝物水平與患肝癌的風險之間存在正相關，可用于預測肝癌風險[62]。 XIA等[12]運用HPLC-MS/MS 測定195 份小麥和62 份大米樣品中AFB1的含量，并對巴基斯坦農村人群（年齡4~80 歲，男性占比58%，n=264）尿液中相應的尿液生物標志物（AFM1）進行分析。 結果顯示：66%的大米和3%的小麥中檢出AFB1；AFM1在尿液中的平均質量濃度為（0.023±0.048） ng/mL，檢出率為69%。 尿液中的AFM1可作為AFB1的生物標志物來評估AFB1攝入與肝癌的相關性。

無論是評估人群膳食攝入霉菌毒素量還是霉菌毒素生物監測，都可以分別用預估攝入量（estimate dietary intake，EDI）和每日可能攝入量（probable daily intake，PDI）來估算霉菌毒素的日攝入量，EDI 和PDI 的計算方法如下[12]：

其 中：A表 示EDI，μg/（kg·d）；a表 示 食 物 消耗量，kg/d；b表示食物中霉菌毒素的質量分數，μg/kg；c表示體重，kg。

其中：B表示PDI，ng/（kg·d）；d表示尿液中生物標記物質量濃度，ng/mL；e表示每日尿量，mL/d；g表示體重，kg；h表示尿液生物標志物排泄率，%，AFB1 排泄率估計為2%。

在XIA 等[12]的研究中，由公式（1）、（2）可計算得出巴基斯坦農村AFB1的平均EDI 為3.5ng/（kg·d）；AFB1平均PDI 為30.3 ng/（kg·d）。 若每天攝入黃曲霉毒素量達到20~120 μg/（kg·d），則在1~3 周內會導致急性黃曲霉毒素中毒，癥狀為嘔吐和腹痛，嚴重者通常會導致死亡[57，63]。

AFB1是強致癌物，可誘導肝癌形成。攝入AFB1的致癌風險可通過暴露邊際（margin of exposure，MOE）來評估，計算方法如下：

其中：C表示MOE，i表示癌癥發生率為10%的95%基準劑量置信區間下限值（BMDL10），其中歐洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）建議黃曲霉毒素的BMDL10為400 ng/（kg·d）[64]；j表示EDI 或PDI。

由公式（3）和EDI 可計算得出巴基斯坦農村AFB1的MOE 為112.9，由公式（3）和PDI 可計算得出AFB1的MOE 為13.2。 根據EFSA 的建議[65]，黃曲霉毒素這種具有致癌性和基因毒性的物質，MOE 低于10 000 被認為是對人類健康有風險，需要采取管理行動，這項研究得出的數據遠低于10 000，這說明需要對接觸黃曲霉毒素所致的公眾健康問題引起重視。

考慮到AFB1和乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）在肝癌中的協同作用，分別對HBV 陽性和HBV 陰性人群的致癌潛力進行評估。使用公式（4）、（5）可估算與AFB1攝入相關的癌癥風險。

其中：q表示致癌潛力，為非乙肝攜帶者與乙肝攜帶者每天每千克體重攝入1 ng/kg 的AFB1所致的肝癌年發病率（/10 萬人）；P為乙肝病毒攜帶率，0.01 與0.3 分別為非乙肝攜帶者與乙肝攜帶者每天每千克體重攝入1 ng/kg 的AFB1所致的肝癌年發病率（/10 萬人）[66]。 巴基斯坦的乙肝病毒攜帶率為2.4%。

其中：p表示癌癥風險，表示每年每10 萬人中因AFB1所致的肝癌癥人數；q表示致癌潛力；j表示EDI 或PDI。

運用EDI 和PDI 來預估癌癥風險，XIA 等[12]推斷AFB1誘導的癌癥風險分別為每年0.059例/10萬人、0.514 例/10 萬人。

4.3 評估黃曲霉毒素與兒童生長發育障礙之間的關系

目前，很多學者對黃曲霉毒素對兒童發育的影響進行了評估，但目前關于黃曲霉毒素與對兒童健康造成影響的相關證據仍較少，且存在方法上的局限性。 與成人相比，兒童的代謝和排泄系統不成熟且生長發育速度較快，這樣的生理特點使得其更易受到環境毒物的影響，而若是幼年時暴露于有害環境中會影響日后的生長甚至誘導疾病產生。 研究發現，黃曲霉毒素與幼兒生長遲緩有關[67-68]。 根據相關動物模型提供的信息和有限的人類數據，提出了流行病學發現的若干機制：黃曲霉毒素對腸上皮細胞的毒性損傷，導致兒童營養物質攝取不足；黃曲霉毒素相關的免疫抑制可增加兒童腹瀉的發病率[61，69]。MCMILLAN 等[69]運用HPLC-HRMS 和同位素質譜法對58 名尼日利亞兒童血漿中黃曲霉毒素-賴氨酸加合物進行定量分析，血漿中黃曲霉毒素-賴氨酸加合物的檢出率為81%；檢出的黃曲霉毒素-賴氨酸加合物含量為0.2~59.2 pg/mg 白蛋白，中位數為2.6 pg/mg 白蛋白。營養不良的兒童血漿中黃曲霉毒素-賴氨酸含量更高，推測長期接觸黃曲霉毒素超過閾值可能引起發育遲緩，但是實際過程影響因素眾多，還需要進一步研究。 AYELIGN 等[54]運用HPLC-MS 對大約200 名兒童尿液中的黃曲霉毒素進行檢測，大約有17%的兒童尿液中檢出黃曲霉毒素，這表明兒童吃的食物中存在黃曲霉素污染的風險；該研究還通過皮爾遜相關系數來評價尿液中黃曲霉毒素含量與發育遲緩、兒童消瘦之間的關系，結果發現不存在相關性。 LAUER 等[70]運用HPLCFD 評估220 名孕婦暴露于黃曲霉毒素環境中的情況，并對孩子出生后的體重、體重年齡指數以及頭圍-年齡指數進行評估，結果發現，母體黃曲霉毒素-賴氨酸加合物高水平與低出生體重、低出生體重年齡指數和低頭圍-年齡指數得分之間顯著相關。 由于方法檢測的指標不同，影響生長評估指標的差異以及影響生長發育的因素具有復雜性，目前表明黃曲霉素會造成兒童發育遲緩和營養不良的證據不足，還需進一步長期跟蹤性調查，以及需要更加全面可靠的評估指標來闡明黃曲霉毒素對兒童生長發育的影響。

4.4 黃曲霉毒素職業攝入評估

接觸黃曲霉毒素的最常見途徑是由于食用直接或間接受污染的食物。 此外，人類和動物也可能通過吸入或接觸受污染的粉塵而攝入黃曲霉毒素[71-72]。 工作在黃曲霉毒素暴露的環境中，特別是接觸黃曲霉毒素污染粉塵的工人，其患肺癌、支氣管和氣 管 腫 瘤 的 幾 率 較 高[73-74]。 DEBEGNACH 等[75]通 過對尿液中AFB1和AFM1進行分析，探討職業性接觸黃曲霉毒素的可能原因：將志愿者分為兩組，工人組由意大利一家飼料廠的工人組成（n=32），對照組（n=29）由同一飼料廠的行政人員組成，總共收集并分析了120 個尿液樣品。 結果顯示：14 個樣品（12%）檢出了AFM1（質量濃度為1.9~10.5 pg/mL），只有1個樣品的AFM1值超過了定量限值（10.5 pg/mL）。 工人組和對照組的黃曲霉毒素檢出平均值之間沒有統計學差異，這表明在這種特定的環境中沒有發生職業攝入，但對黃曲霉毒素的關注卻不能放松，需要對可能接觸這些有毒化合物污染粉塵的人群健康狀況進行系統監測。SUSANA 等[72]運用ELISA 對41名廢物處理廠工人和30 個對照人員血液中AFB1的含量進行評估， 結果顯示，41 名廢物處理廠工人的結果都呈陽性，質量濃度為2.5~25.9 ng/mL，而30 個對照人員均未檢出AFB1， 這說明廢物處理廠工人的霉菌毒素質量濃度明顯高于對照組。 其中，有6 名廢物處理廠工人的工作是分類廢物和駕駛垃圾清運車，工作接觸中高粉塵的機會更多，其AFB1水平高于20 ng/mL， 而其他廢物處理廠工人的AFB1水平均低于14 ng/mL。 VIEGAS等[14，76]利用ELISA 測定家禽屠宰場員工血清中的AFB1來評估該廠員工攝入黃曲霉毒素的情況。 結果顯示：14名屠宰場員工血清中檢出AFB1， 質量濃度為1.06~4.03 ng/mL； 對照組員工血清中未檢出AFB1。 在屠宰場環境中，工人們除了可能吸入空氣中顆粒而吸入黃曲霉毒素外，還可能是接觸到了食用黃曲霉素污染飼料的雞鴨內臟， 通過皮膚攝入黃曲霉毒素，在大多數工作場所，工人在處理禽類時都應該使用手套避免霉菌的污染和傳播。 黃曲霉毒素對人體會產生毒害作用，對可能接觸黃曲霉素的工作者需要配套好保護措施并對其健康狀態進行跟蹤監測。

5 展望與不足

目前，文獻所報道的對生物檢材中多種霉菌毒素進行同時快速篩查的檢測方法中，黃曲霉素篩查的目標物主要還是黃曲霉毒素原型或是代謝物AFM1，對黃曲霉毒素代謝物黃曲霉毒素Q、黃曲霉毒素-鳥嘌呤加合物、黃曲霉毒素-賴氨酸加合物的檢測比較少，在實際應用中可能會低估黃曲霉毒素的污染流行率。