黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素對(duì)白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎大鼠的療效及機(jī)制研究

顧盼瑾,張立紅,胡錫池,沈麗娟,高 吟

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 無(wú)錫市中醫(yī)醫(yī)院,江蘇 無(wú)錫 214001;2.江南大學(xué)附屬中心醫(yī)院 無(wú)錫市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江蘇 無(wú)錫 214001)

鮑曼不動(dòng)桿菌是非發(fā)酵菌屬類革蘭氏陰性桿菌,會(huì)引起院內(nèi)感染,尤其在重癥監(jiān)護(hù)室中,因鮑曼不動(dòng)桿菌感染的患者比例逐年增加[1]。鮑曼不動(dòng)桿菌主要會(huì)侵襲有創(chuàng)機(jī)械通氣、免疫功能不全、極度衰竭的患者,從而引起菌血癥、肺炎、創(chuàng)傷感染、尿路感染、腦膜炎、心內(nèi)膜炎等感染,鮑曼不動(dòng)桿菌引起的院內(nèi)感染死亡率較高[2-3]。近年來(lái),隨著器官移植、腫瘤放化療及人口老齡化的出現(xiàn),免疫受損的宿主日益增多,使用細(xì)胞毒性藥物或糖皮質(zhì)激素患者多會(huì)出現(xiàn)白細(xì)胞減少性免疫功能損害[4]。肺部感染是因白細(xì)胞減少性免疫受損宿主最易出現(xiàn)的主要死因及并發(fā)癥,其臨床表現(xiàn)不典型、起病隱匿、病情發(fā)展迅速,會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸衰竭,使得患者死亡[5]。近年來(lái)因鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥的出現(xiàn),其耐藥性已逐漸上升,因此因鮑曼不動(dòng)桿菌引起的肺部感染已成為臨床棘手的問題[6]。

有研究發(fā)現(xiàn)[7],因鮑曼不動(dòng)桿菌引起的醫(yī)院獲得性肺炎死亡率在40%～80%,因鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥菌株的增加,使得臨床醫(yī)師應(yīng)對(duì)其病原體感染時(shí),制定合理治療方案較為困難。目前常用的藥物包括舒巴坦、碳青霉素烯類、替加環(huán)素、多粘菌素類等。有研究針對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染的治療進(jìn)行一些列動(dòng)物模型試驗(yàn)及體外藥敏試驗(yàn),不同體外藥敏試驗(yàn)檢測(cè)方法使得藥敏結(jié)果不一,而體外藥敏試驗(yàn)多認(rèn)為針對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌替加環(huán)素的敏感率相對(duì)較高[8],而有研究發(fā)現(xiàn)[9],此類藥物需聯(lián)合應(yīng)用可以起到相加或協(xié)同的作用,改善治療效果。黃芪是我國(guó)的一味傳統(tǒng)中藥,黃芪多糖是是從黃芪中提取的水溶性雜交糖,具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗病毒、抗腫瘤的作用[10],因此本研究分析了黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素對(duì)白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎大鼠的療效,并分析了作用機(jī)制,以為臨床中白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎提供新的治療靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 購(gòu)買75只雄性SD大鼠,體重140～200 g,SPF級(jí),分籠飼養(yǎng),自由進(jìn)食、飲水。維持動(dòng)物室溫在(25±2)℃,保持環(huán)境安靜、通風(fēng)良好,室內(nèi)維持12 h/12 h明暗交替,定期使用紫外燈進(jìn)行消毒。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑:黃芪多糖購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,分子式為C10H7ClN2O2S,分子量為254.69,純度為95%。環(huán)磷酰胺購(gòu)自Sigma公司,替加環(huán)素購(gòu)自浙江海正藥業(yè)股份有限公司,地塞米松購(gòu)自Sigma公司,哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基購(gòu)自梅里埃生物制品有限公司。大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、白細(xì)胞介素-6(Interleukin- 6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、酶聯(lián)免疫吸附試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司(批號(hào)ml059268、ml064292、ml002859),大鼠Toll樣受體4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)抗體及鼠克隆抗β-actin購(gòu)自Abcam公司(批號(hào)ab22048、ab32536、ab8226)。

1.2.2 儀器:恒溫二氧化碳培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)NAPCO公司,酶標(biāo)儀購(gòu)自Molecular Devices,IX71型倒置顯微鏡購(gòu)自日本Olympus公司,石蠟切片機(jī)購(gòu)自上海萊卡儀器有限公司。

1.3 細(xì)菌準(zhǔn)備 鮑曼不動(dòng)桿菌由我院檢驗(yàn)科提供,從慢性阻塞性肺疾病重癥肺炎患者痰液中分離,經(jīng)檢驗(yàn)科細(xì)菌室鑒定后,將其凍存在-70 ℃冰箱中,之后行常規(guī)復(fù)蘇,使用2 μl取菌環(huán)菌液接種在35 ℃瓊脂培養(yǎng)中,將其置于恒溫的培養(yǎng)中,在37 ℃下培養(yǎng),選擇典型的單菌落,將其轉(zhuǎn)種于MH肉湯中,放置在空氣恒溫震蕩箱中,在37 ℃下恒溫?fù)u床中,以70 r/min的速度孵育18 h,使用麥?zhǔn)瞎軠y(cè)定,無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液配制為1.2×109CFU/ml(4個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛?。

1.4 菌株鑒定 使用VITEK2 compact系統(tǒng)鑒定、測(cè)定病原菌的最小抑菌濃度,根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(2017)判定細(xì)菌耐藥性,測(cè)定抗菌藥物、最小抑菌濃度、結(jié)果,結(jié)果表明該菌株為鮑曼不動(dòng)桿菌,其中替加環(huán)素的最小抑菌濃度為4 μg/ml,屬于替加環(huán)素非敏感菌株,使用臨床劑量的替加環(huán)素不能完全清除鮑曼不動(dòng)桿菌,其鑒定的引物由上海英駿生物技術(shù)公司合成,引物:ITSF 5’-CATTATCACGGTAATTAGTG-3’,ITSB 5’-AGAGCACTGTGCACTTAAG-3’,擴(kuò)增鮑曼不動(dòng)桿菌的16 s RNA基因間隔區(qū)域,片段長(zhǎng)約為208 bp。

1.5 動(dòng)物分組及造模 實(shí)驗(yàn)開始前,將75只大鼠分為五組,而空白對(duì)照組、模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組,每組15只。造模前將所有大鼠稱重,實(shí)驗(yàn)開始第1天,除空白對(duì)照組,其余組大鼠均腹腔注射30 mg/kg環(huán)磷酰胺,肌肉注射60 mg/kg地塞米松,減少大鼠的白細(xì)胞,以形成免疫抑制,正常對(duì)照組大鼠給予等劑量的0.9%氯化鈉溶液。在第4天時(shí),重復(fù)第1天的操作。在第5天,所有大鼠均用異氟烷進(jìn)行麻醉,抓持大鼠后頭部,將其伸入有異氟烷棉球的離心管中,當(dāng)大鼠的眨眼反應(yīng)消失后,用皮筋固定大鼠四肢、牙齒在固定臺(tái)上,之后將大鼠的舌用止血鉗拉出,固定在口外。之后在頸部進(jìn)行剪毛消毒、備皮無(wú)菌操作,切開氣管,將大鼠的上段氣管暴露,使用帶有導(dǎo)絲導(dǎo)管插入大鼠氣管,插入約0.5 cm后,緩慢將導(dǎo)絲拔出,使用注射器將1.2×109CFU/ml(0.1 ml)鮑曼不動(dòng)桿菌懸液經(jīng)導(dǎo)管注入至大鼠的氣管中,之后注入少量空氣,將菌懸液注入大鼠的氣管中。將固定臺(tái)豎立,讓大鼠保持直立20 s,將固定臺(tái)左右搖晃,保證菌液分布在兩肺中。空白對(duì)照組大鼠注入等量無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液,之后完成造模。

1.6 給藥方法 動(dòng)物造模后,所有大鼠灌胃給藥,黃芪多糖組給予1 ml/100 g黃芪多糖,替加環(huán)素給予1 ml/100 g替加環(huán)素,黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組給予1 ml/100 g黃芪多糖+1 ml/100 g替加環(huán)素,正常對(duì)照組和模型組大鼠給予等量的0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行灌胃,五組均連續(xù)給藥7 d。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 精神活動(dòng)狀況及大鼠的生存時(shí)間:觀察五組大鼠的精神活動(dòng)狀況及大鼠的生存時(shí)間。

1.7.2 測(cè)定濕干比:五組大鼠分別在給藥后第1天、第3天、第5天、第7天時(shí),每組處死3只大鼠,處死后立即分離腹腔靜脈、取血。在無(wú)菌條件下取出整肺,將右上肺葉組織進(jìn)行稱重(濕重),之后置于60 ℃烤箱中24 h,復(fù)稱重作為干重,計(jì)算濕干比=濕重/干重×100%[11]。

1.7.3 血白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè):五組大鼠分別在給藥后第1天、第3天、第5天、第7天時(shí)取3只剪尾尖取20 μl血,使用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.7.4 細(xì)菌含量測(cè)定:五組大鼠分別在給藥第1天、第3天、第5天、第7天時(shí),在無(wú)菌條件下取左肺上葉,稱重后加入0.9%氯化鈉溶液1 ml,之后進(jìn)行勻漿,取20 μl接種在M-H平板中,置于37 ℃搖床上,培養(yǎng)24 h,計(jì)算每克肺組織的細(xì)菌含量。

1.7.5 血清細(xì)胞因子檢測(cè):五組大鼠分別在給藥后第1天、第3天、第5天、第7天時(shí),將腹腔靜脈血使用ELISA法檢測(cè)五組大鼠的血清MMP-9、IL-6、TNF-α水平。

1.7.6 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá):五組大鼠分別在給藥后第1天、第3天、第5天、第7天時(shí),取3只大鼠的剩余肺組織,根據(jù)說(shuō)明書提取總蛋白,使用BCA法檢測(cè)蛋白濃度。取30 μg/孔蛋白質(zhì)樣品上樣,之后行SDS-PACE凝膠電泳,轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜中,使用5%的脫脂奶粉進(jìn)行封閉,加入一抗后在4 ℃下進(jìn)行孵育過夜,用HRP標(biāo)記的山羊抗IgG二抗,在室溫下孵育1 h,ECL顯色后用β-actin作為內(nèi)參,通過內(nèi)參的灰度比,得到要檢測(cè)TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié) 果

2.1 造模結(jié)果 造模后,75只大鼠死亡10只大鼠,造模成功65只,造模成功率86.67%(65/75)。最終五組大鼠中空白對(duì)照組15只、模型組13只、黃芪多糖組12只、替加環(huán)素組13只、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組12只。

2.2 五組大鼠精神活動(dòng)狀況比較 模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組大鼠免疫受到免疫抑制后,出現(xiàn)了反應(yīng)遲鈍、弓背、光澤度較差易脫落、毛發(fā)豎立的情況,在接種鮑曼不動(dòng)桿菌后,大鼠出現(xiàn)了嗜睡、進(jìn)食減少、呼吸緩慢的情況,部分大鼠口、鼻、肛門周圍出血的情況。空白對(duì)照組給藥期間,大鼠的活動(dòng)、飲食均正常,毛發(fā)有光澤;模型組大鼠飲食、活動(dòng)均減少,毛發(fā)無(wú)光澤,豎立;黃芪多糖組、替加環(huán)素組兩組大鼠的狀態(tài)較模型組好,兩組間大鼠狀態(tài)無(wú)差別;黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組給藥后較黃芪多糖組、替加環(huán)素組大鼠狀態(tài)好。

2.3 五組大鼠生存時(shí)間比較 所有大鼠給藥7 d內(nèi)均無(wú)死亡,模型組的生存時(shí)間為(10.52±1.08)d,黃芪多糖組為(12.52±1.85)d,替加環(huán)素組為(12.85±1.85)d,黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組為(14.45±2.4)d,組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05),黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的生存時(shí)間明顯較黃芪多糖組、替加環(huán)素組、模型組高,黃芪多糖組、替加環(huán)素組明顯較模型組高(均P<0.05),黃芪多糖組與替加環(huán)素組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.4 五組大鼠濕干比及白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 給藥第1天,模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的干濕比明顯較空白對(duì)照組高,白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯較低(均P<0.05);模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組組間的干濕比、白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05);給藥第3天、第5天、第7天,模型組的干濕比明顯較空白對(duì)照組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高,白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯較低;黃芪多糖組、替加環(huán)素組的干濕比明顯較空白對(duì)照組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高,白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯較低;黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的干濕比明顯較空白對(duì)照組高,白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯較低(均P<0.05);黃芪多糖組、替加環(huán)素組的干濕比、白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。見表1。

表1 五組大鼠干濕比及白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

2.5 五組大鼠細(xì)菌含量比較 空白對(duì)照組的細(xì)菌含量為陰性,給藥第1天,模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的細(xì)菌含量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05);給藥第3天、第5天、第7天,模型組的細(xì)菌含量明顯較黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高,黃芪多糖組、替加環(huán)素組明顯較黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高(均P<0.05),黃芪多糖組與替加環(huán)素組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表2。

表2 五組大鼠細(xì)菌含量比較(g/kg)

2.6 五組大鼠血清細(xì)胞因子水平比較 給藥第1天,模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的MMP-9、IL-6、TNF-α明顯較空白對(duì)照組高(均P<0.05);模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組組間MMP-9、IL-6、TNF-α比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05);給藥第3天、第5天、第7天,模型組的MMP-9、IL-6、TNF-α明顯較空白對(duì)照組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高;黃芪多糖組、替加環(huán)素組的MMP-9、IL-6、TNF-α明顯較空白對(duì)照組、多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高;黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的MMP-9、IL-6、TNF-α明顯較空白對(duì)照組高(均P<0.05);黃芪多糖組、替加環(huán)素組的MMP-9、IL-6、TNF-α組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。見表3～5。

表3 五組大鼠血清MMP-9比較(pg/ml)

表4 五組大鼠血清IL-6比較(pg/ml)

表5 五組大鼠血清TNF-α比較(pg/ml)

2.7 五組大鼠TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量比較 給藥第1天,模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量明顯較空白對(duì)照組高(均P<0.05);模型組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組組間TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05);給藥第3天、第5天、第7天,模型組的TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量明顯較空白對(duì)照組、黃芪多糖組、替加環(huán)素組、黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高;黃芪多糖組、替加環(huán)素組的TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量明顯較空白對(duì)照組、多糖聯(lián)合替加環(huán)素組高;黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素組的TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量明顯較空白對(duì)照組高(均P<0.05);黃芪多糖組、替加環(huán)素組的TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。見表6。

表6 五組大鼠TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量比較

3 討 論

3.1 鮑曼不動(dòng)桿菌感染疾病 鮑曼不動(dòng)桿菌屬是無(wú)動(dòng)力、不發(fā)酵糖類、氧化酶陰性的革蘭陰性球桿菌,在土壤、水、健康人皮膚表面均有廣泛分布,會(huì)長(zhǎng)期定植于機(jī)體的咽、皮膚、消化道、呼吸道。在臨床中分的不動(dòng)桿菌多數(shù)為鮑曼不動(dòng)桿菌,占比約為72.9%,其他菌種引起的感染較少[12]。其在高危人群中會(huì)有嚴(yán)重感染,包括患者免疫力低下、住院時(shí)間長(zhǎng)、心肺功能衰竭、機(jī)械性通氣、靜脈插管、留置導(dǎo)尿管等患者中,會(huì)使患者出現(xiàn)醫(yī)院獲得性肺炎,尤其是呼吸機(jī)相關(guān)的肺、菌血癥、傷口感染、繼發(fā)性腦膜炎、尿路感染等[13]。醫(yī)院感染的一個(gè)重要病原菌是鮑曼不動(dòng)桿菌,其是條件致病菌,是革蘭陰性球桿菌,經(jīng)革蘭染色后不易脫色,專性需氧菌,觸酶陽(yáng)性、無(wú)動(dòng)力、氧化酶陰性,在20～30 ℃溫度下生長(zhǎng)良好,沒有特殊的營(yíng)養(yǎng)要求,抵抗力強(qiáng),可在醫(yī)護(hù)人員和患者間傳播,出現(xiàn)鮑曼不動(dòng)桿菌感染的ICU病房,患者枕頭、標(biāo)本、 病歷、儀器、醫(yī)護(hù)人員手套等上均可分離到鮑曼不動(dòng)桿菌[14]。近年來(lái),因鮑曼不動(dòng)桿菌引起的醫(yī)院感染不斷增加,同時(shí)其耐藥性也在不斷增加,臨床上多從抗菌方面使用西醫(yī)治療細(xì)菌感染,用多種抗生素起到殺菌、抑菌的作用,而不能完全控制感染,同時(shí)耐藥問題較多,使得臨床上存在一定局限性[15]。

3.2 動(dòng)物感染性肺炎模型 目前對(duì)于誘導(dǎo)肺部感染主要有4種方式:經(jīng)支氣管氣管注入、直接暴露感染、經(jīng)鼻注入、經(jīng)口注入,本研究經(jīng)口插管法將接種物送進(jìn)動(dòng)物的下呼吸道,其是直接用鈍性針經(jīng)口腔進(jìn)入氣管,導(dǎo)入接種物,因此無(wú)切口,避免了對(duì)動(dòng)物的損傷[16]。而本方法需要使用麻醉,增加了大鼠的死亡風(fēng)險(xiǎn),本研究死亡的10只大鼠中4只因麻醉過度死亡。

3.3 黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素對(duì)白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎的作用 《中國(guó)藥典》(2015年)記載說(shuō)明黃芪是具有利水消腫、補(bǔ)氣升陽(yáng)作用的中藥,臨床中可廣泛應(yīng)用于糖尿病、高血壓、腎病綜合征疾病治療中[17]。黃芪多糖是黃芪的一個(gè)主要成分,其可用于抗氧化、糖尿病、肝纖維化治療中[18]。本研究將黃芪多糖用于白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎大鼠中,發(fā)現(xiàn)聯(lián)合應(yīng)用替加環(huán)素后,其可明顯降低大鼠的 MMP-9、IL-6、TNF-α水平,且二者聯(lián)合應(yīng)用MMP-9、IL-6、TNF-α水平明顯較單一用藥高,表明黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素可明顯降低白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎大鼠的炎癥因子水平。其中MMP是基質(zhì)金屬蛋白酶家族,在水解后可以降解細(xì)胞外基質(zhì),降解組織連接蛋白活性,從而誘發(fā)氣道炎癥反應(yīng)。TNF-α是參與全身炎癥反應(yīng)的一種細(xì)胞信號(hào)蛋白,僅存在于血液中,廣泛存在于多種組織中。TNF-α?xí)p害肺組織內(nèi)的溶酶體,從而損傷肺泡上皮細(xì)胞、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞,IL-6是多種免疫細(xì)胞,如T淋巴細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞等,會(huì)產(chǎn)生多效急性細(xì)胞因子,其在介導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)、免疫中起到重要作用。因此本研究選擇MMP-9、IL-6、TNF-α作為炎癥因子。

3.4 黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素降低白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎炎癥水平的作用機(jī)制 TLR4信號(hào)下游的一個(gè)重要核轉(zhuǎn)錄激活因子是NF-κB,TLR4會(huì)與配體結(jié)合,誘發(fā)多種下游效應(yīng),使得NF-κB活化,從而促進(jìn)機(jī)體分泌白介素等炎癥因子,使得巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞產(chǎn)生趨化聚集效應(yīng),從而引起急性炎癥反應(yīng)。NF-κB可以通過上調(diào)細(xì)胞環(huán)氧化酶的表達(dá)及活性,從而增加炎癥因子合成增加,促進(jìn)炎癥反應(yīng)[19]。鮑曼不動(dòng)桿菌會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng),從而在肺中出現(xiàn)炎癥細(xì)胞積聚,以白細(xì)胞為主,其會(huì)結(jié)合TLR4,促進(jìn)NF-κB等分子活化,誘導(dǎo)MMP-9過度表達(dá),同時(shí)分泌TNF-α、IL-6等因子。而NF-κB會(huì)對(duì)MMP-9轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行調(diào)控,會(huì)抑制蛋白IkBα,使IkBα處于穩(wěn)定狀,當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí),IkBα?xí)唤到?從而調(diào)控MMP-9轉(zhuǎn)錄過程[20]。本研究發(fā)現(xiàn),給予黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素后降低了白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎的MMP-9、TNF-α、IL-6等炎癥因子生成,減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn),從而起到保護(hù)血管壁的作用,改善肺功能。

總之,黃芪多糖聯(lián)合替加環(huán)素對(duì)白細(xì)胞減少性鮑曼不動(dòng)桿菌感染肺炎大鼠有一定療效,可能與其可通過TLR4/NF-κB通路改善炎癥水平有關(guān)。