自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化及其重疊綜合征患者白介素-17、核轉(zhuǎn)錄因子-κB、轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)水平及意義

孫小媚,劉 微,闞麗娜 ,崔韶軒,楊昊龍

(1.北京大學(xué)第三醫(yī)院秦皇島醫(yī)院風(fēng)濕免疫科,河北 秦皇島 066000;2.北京大學(xué)第三醫(yī)院秦皇島醫(yī)院消化科,河北 秦皇島 066000;3.秦皇島市北戴河醫(yī)院消化科,河北 秦皇島 066000;4.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院感染科,黑龍江 齊齊哈爾 161000)

自身免疫性肝病(Autoimmune liver disease,AILD)指由自身免疫介導(dǎo)、以高γ球蛋白血癥為特征、不明原因的慢性肝病,包括自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis,PBC)及其AIH-PBC重疊綜合征(Overlap syndrome,OS),各種疾病均存在嚴(yán)重肝臟病變表現(xiàn),如若不及時治療可迅速向肝硬化進(jìn)展,甚至誘發(fā)肝功能衰竭[1]。目前此三種疾病的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,臨床多認(rèn)為其發(fā)生與自身免疫異常、免疫平衡狀態(tài)失衡以及遺傳、環(huán)境因素有關(guān),尤其以女性多見[2-3]。由于此病發(fā)病隱匿、進(jìn)展緩慢,較多患者就診時已處于疾病中晚期,病情控制難度較大,加之不同AILD類型的癥狀、病理特點(diǎn)有重疊,增加了臨床上診斷的難度?，F(xiàn)如今,有關(guān)輔助性T細(xì)胞亞群(Th)在AILD中的作用已得到證實(shí),其中輔助性T 細(xì)胞17(T helper cell 17,Th17)作為新型的Th細(xì)胞亞型,因其參與介導(dǎo)自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展而引起了臨床的廣泛關(guān)注。不同于傳統(tǒng)的Th細(xì)胞亞群,Th17細(xì)胞具有獨(dú)立的分化和調(diào)節(jié)機(jī)制,可特異性產(chǎn)生白細(xì)胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)、白細(xì)胞介素 -22(Interleukin-22,IL-22)等[4]。陳雙平等[5]在一項(xiàng)動物試驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)免疫性肝損傷小鼠肝臟組織中IL-17呈明顯高表達(dá)。核因子κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)為具有轉(zhuǎn)錄激活功能的Rel蛋白家族成員。實(shí)驗(yàn)表明,NF-κB是多種炎癥介質(zhì)的上游信號分子,可激活炎性因子、趨化因子、轉(zhuǎn)化生長因子β(Transforming growth factor-β,TGF-β)等,是炎性反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)[6]。研究發(fā)現(xiàn),NF-κB信號通路參與肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展[7]。轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)為TGF-β的異構(gòu)體,其主要的生物活性在于誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡以及抑制肝細(xì)胞再生。研究表明[8],TGF-β1表達(dá)上調(diào)可加重小鼠急性肝衰竭和肝性腦病。結(jié)合上述文獻(xiàn),不難看出IL-17、NF-κB、TGF-β1與AILD的發(fā)生發(fā)展有關(guān)聯(lián),但目前尚缺乏IL-17、NF-κB、TGF-β1在AIH、PBC及AIH/PBC OS作用的相關(guān)研究?；诖?本研究檢測上述三種疾病患者外周血IL-17、NF-κB、TGF-β1表達(dá)情況,探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2020年1月至2023年1月我院收治的自身免疫性肝病(AILD)患者72例,其中AIH 28例(A組),診斷符合《2015年歐洲肝病學(xué)會臨床實(shí)踐指南:自身免疫性肝炎》[9];PBC 25例(B組),診斷符合《原發(fā)性膽汁性肝硬化(又名原發(fā)性膽汁性膽管炎)診斷和治療共識(2015)》[10];重疊綜合征19例(C組),診斷參考?xì)W洲肝臟研究協(xié)會推薦的AIH/PBC OS診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]。所有入選患者均排除其他類型的肝臟疾病、因藥物、嗜酒導(dǎo)致的肝損傷、妊娠及哺乳女性等。另選同期健康體檢者30例作為對照組,均為我院體檢中心健康體檢志愿者,無自身免疫性疾病以及心、肺、肝、腎等嚴(yán)重基礎(chǔ)病,且近期不存在感染情況。所有受試者均簽訂知情同意書,本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過。四組在性別、年齡上比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);A、B、C組性別、年齡、病程、臨床表現(xiàn)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),具有可比性。見表1。

表1 四組基本資料比較

1.2 檢測方法 采集所有受試者空腹靜脈血 5 ml,3000 r/min離心10 min,留取血清標(biāo)本,A、B、C組于入院次日清晨采集,對照組于體檢當(dāng)日采集。以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定IL-17(試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司)、NF-κB及TGF-β1(試劑盒購自上海裕平生物有限公司)表達(dá),檢測均以雙抗體夾心法完成;總膽紅素(TBIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)等肝功能指標(biāo)采用全自動生化分析儀進(jìn)行測定。

2 結(jié) 果

2.1 四組血清IL-17、NF-κB及TGF-β1水平比較 A、B、C組血清IL-17、NF-κB、TGF-β1水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);四組血清IL-17、NF-κB、TGF-β1水平比較:對照組

表2 四組血清IL-17、NF-κB及TGF-β1水平比較

2.2 四組肝功能指標(biāo)比較 A、B、C組血清TBIL、ALT、AST、GGT水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);四組血清TBIL、GGT水平比較:對照組

表3 四組肝功能指標(biāo)比較

2.3 AILD患者血清IL-17、NF-κB、TGF-β1與肝功能指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性 AILD患者血清IL-17與NF-κB、TGF-β1、TBIL、GGT正相關(guān)(r=0.332、0.448、0.242、0.339,P<0.05),與ALT負(fù)相關(guān)(r=-0.300,P<0.05);NF-κB與TGF-β1、TBIL、GGT正相關(guān)(r=0.733、0.472、0.682),與ALT、AST負(fù)相關(guān)(r=-0.624、-0.612,P<0.05);TGF-β1與TBIL、GGT正相關(guān)(r=0.549、0.640,P<0.05),與ALT、AST負(fù)相關(guān)(r=-0.661、-0.634,均P<0.05)。見表4。

表4 AILD患者血清IL-17、NF-κB、TGF-β1與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

AIDL的發(fā)病機(jī)制尚未明了,目前普遍認(rèn)為環(huán)境因素、免疫因素和感染因素在AIDL的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,這三種因素均可誘導(dǎo)T細(xì)胞對肝臟抗原進(jìn)行免疫攻擊,引起典型的AIDL組織病理學(xué)改變[12-13]。AIDL具有惡變傾向,但進(jìn)展相對緩慢。研究指出,AILD患者的總體癌癥風(fēng)險(RR=3.64,95%CI:2.64～5.03,P<0.001)和癌癥相關(guān)死亡風(fēng)險(RR=2.48,95%CI:1.73～3.53,P<0.001)明顯增加[14]。近年來,隨著臨床對AILD研究的深入,肝臟活檢、自身抗體檢測等技術(shù)的推廣應(yīng)用,我國AILD的檢出率明顯提高[15],在此背景下,AIDL的診治也引起了臨床醫(yī)師的廣泛關(guān)注。

AIDL臨床常見AIH、PBC、AIH/PBC OS三種類型,其中AIH起病隱匿,大部分患者表現(xiàn)為嗜睡、乏力、疲勞、食欲不振、腹痛、黃疸、瘙癢等,特異性并不顯著。PBC同樣為關(guān)聯(lián)于自身免疫的慢性炎癥性肝臟疾病,好發(fā)于女性,病程呈慢性進(jìn)展性,黃疸、瘙癢、乏力等慢性膽汁淤積性疾病特點(diǎn)為其主要臨床表現(xiàn),部分患者還可伴隨上消化出血、骨質(zhì)疏松、腹部不適等癥[16]。AIH/PBC OS患者由于同時或在疾病不同階段發(fā)生AIH、PBC,因此其臨床癥狀與AIH、PBC相類似,既有程度不一的肝炎、肝硬化、肝性腦病等癥狀,亦有疲勞、乏力、瘙癢、黃疸等表現(xiàn),其臨床癥狀主要由兩種疾病中哪個優(yōu)勢更突出而決定[17]。本研究中,A、B、C三組患者均以中老年女性為主,三組在性別、年齡、臨床表現(xiàn)上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與既往報道一致。提示AIH、PBC與AIH/PBC OS患者具有相似的臨床癥狀和體征,因此僅僅依靠體格檢查進(jìn)行鑒別診斷較為困難,臨床應(yīng)引起重視。

既往研究表明,初始CD4+T細(xì)胞可分化為Th1、Th2細(xì)胞2個亞型,前者主要作用于誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng),而后者則主要參與體液免疫反應(yīng)[18]。Th17細(xì)胞主要特征為分泌IL-17等細(xì)胞因子參與肝臟損傷及再生,能對Th1、Th2細(xì)胞無法抵抗的細(xì)菌和真菌進(jìn)行有效抵抗。Beringer等[19]的研究指出,IL-17可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞浸潤和肝臟損傷,導(dǎo)致肝臟炎癥和纖維化,引發(fā)AILD。NF-κB為重要的炎性調(diào)節(jié)反應(yīng)因子,其活化途徑具有多重性,主要包括P50、P65、c-Rel和RelB等,其中研究最為廣泛的是P65/P50NF-κB二聚體,主要參與NF-κB信號經(jīng)典通路激活,可誘導(dǎo)多種促炎因子表達(dá),加重體內(nèi)炎癥反應(yīng)[20]。姚婷等[21]研究也顯示,免疫性相關(guān)疾病可能與炎癥相關(guān)信號通路的活性及炎性因子分泌異常相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),NF-κB多種信號通路參與肝硬化、肝纖維化以及肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程。TGF-β1是促進(jìn)肝纖維化的重要因子,可同時分化啟動Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞。本研究中,A、B、C組血清IL-17、NF-κB、TGF-β1水平均高于對照組,提示AIH、PBC、AIH/PBC OS患者可能存在不同程度IL-17、NF-κB、TGF-β1升高情況,IL-17、NF-κB、TGF-β1可能參與AIDL發(fā)生、發(fā)展。通過比較IL-17、NF-κB、TGF-β1在疾病發(fā)展不同階段的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),其中C組最高,其次為B組,A組次之,可見IL-17、NF-κB、TGF-β1水平隨著AIDL病情進(jìn)展而逐漸升高。究其原因可能是[22]:AIH患者的病理學(xué)變化主要表現(xiàn)為肝臟組織界面炎癥,此時肝組織局部免疫增強(qiáng),肝細(xì)胞與Th17細(xì)胞之間的正反饋調(diào)節(jié)導(dǎo)致炎癥過程功能性增強(qiáng),使血清IL-17、NF-κB、TGF-β1有所升高;PBC階段時,其病理學(xué)表現(xiàn)以匯管區(qū)炎癥為主,淋巴細(xì)胞圍繞損傷膽管,并向受損膽管浸潤,加快Th17細(xì)胞分化速度,使外周血IL-17水平顯著升高,生成前炎癥反應(yīng),并促進(jìn)炎癥細(xì)胞移行,此時過表達(dá)的IL-17可加重慢性膽管炎癥,NF-κB、TGF-β1表達(dá)亦有大幅提升;而AIH/PBC OS兼具AIH與PBC的病理學(xué)改變,肝臟炎癥損傷、肝臟纖維化程度更嚴(yán)重,故而血清IL-17、NF-κB、TGF-β1升高最為顯著。

TBIL、ALT、AST、GGT是目前用于評價肝功能的重要指標(biāo),能夠較為敏感地反映肝細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度[23]。本研究中,A、B、C三組血清TBIL、ALT、AST、GGT水平均高于對照組,其中A組患者以血清ALT、AST升高最顯著,這可能與AIH的干細(xì)胞炎性破壞有關(guān);B組患者以GGT升高為主要血清學(xué)表現(xiàn),與PBC的膽管損害特征一致;而C組患者因兼具AIH、PBC生化特點(diǎn),血清TBIL、ALT、AST及GGT均有所升高。另外,本研究還發(fā)現(xiàn),72例ADIL患者血清IL-17、NF-κB、TGF-β1水平與上述肝功能指標(biāo)呈現(xiàn)不同程度的相關(guān)關(guān)系,提示AIH、PBC、AIH/PBC OS患者血清IL-17、NF-κB、TGF-β1表達(dá)與肝功能關(guān)系密切,其可能在導(dǎo)致AIH、PBC、AIH/PBC OS的肝細(xì)胞損傷以及疾病進(jìn)展中發(fā)揮了協(xié)同作用,但其具體的作用機(jī)制本研究尚未闡明,是今后研究的方向。

綜上所述,IL-17、NF-κB、TGF-β1在AIH、PBC及AIH/PBC OS患者血清表達(dá)中有不同程度升高,并且與肝功能損傷程度之間有關(guān)聯(lián),極有可能參與肝臟疾病損傷-炎癥及免疫損傷過程,應(yīng)用其變化規(guī)律可能對提高臨床診斷和治療水平有一定幫助。