清咽宣肺袋泡茶的質量標準研究

鄭黎明 梁小蕾 梁 敏

1.廣東省湛江市第一中醫(yī)醫(yī)院藥學部，廣東湛江 524300；2.廣東省湛江市食品藥品檢驗所中藥實驗室，廣東湛江 524000

清咽宣肺袋泡茶的處方是由荊芥、薄荷、桔梗、法半夏、射干、蟬蛻等多味中藥組成，經(jīng)多年臨床實踐證明，該方劑具有清咽宣肺、開音散結、化痰止咳的功效，用于急慢性咽炎、扁桃體炎等。為能對清咽宣肺茶泡劑的質量進行有效的控制，本研究進行了該制劑質量標準的研究，建立了薄荷、荊芥的顯微鑒別方法[1]及法半夏、桔梗的薄層色譜鑒別方法[2]，同時建立了氣相色譜法對袋泡茶中的薄荷腦、胡薄荷酮的含量進行測定[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子天平CPA324S（北京賽多利斯科學儀器），高速粉碎機KC-02（開創(chuàng)同和科技），生物顯微鏡及攝影成像系統(tǒng)BX51-TF；Pro580ES（日本奧利巴斯），氣相色譜儀7890B（美國安捷倫）。

1.2 試藥

桔梗對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號121028-202113），半夏對照藥材（批號121272-201806），薄荷腦對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110728-201707），胡薄荷酮對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號111706-201907），清咽宣肺袋泡茶（醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，批號210820、210923、211012）。試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 顯微鑒別方法

取本品置高速粉碎機粉碎，過5號篩，取少許粉末于載玻片上，滴加水合氯醛試液1～2滴，在酒精燈上微微加熱，以不燒干為度直至完全透化，透化后加封蓋玻片[1]，放置在顯微鏡下，用40×10顯微倍數(shù)觀察，可見其藥材顯微特征。

2.1.1 薄荷的顯微鑒別 非腺毛稍彎曲、壁較厚；腺鱗頭部具有8細胞，柄單細胞（圖1）。

圖1 薄荷的顯微鑒別圖

2.1.2 荊芥的顯微鑒別 內(nèi)果皮石細胞具有密集紋孔；腺鱗頭部具有8細胞，柄單細胞（圖2）。

圖2 荊芥的顯微鑒別圖

2.2 薄層鑒別

2.2.1 法半夏薄層色譜鑒別 分別取三個批號（210820、210923、211012）的清咽宣肺茶1包12 g，加入50 ml乙醇溶液，回流加熱提取1 h，放置冷卻，濾過后將濾液蒸發(fā)，在殘渣中加入乙醇2 ml，制得供試品液。根據(jù)處方剔除半夏藥材，制成陰性樣品，再按供試品溶液制作辦法制成陰性對照溶液。將半夏的對照藥材用同樣方法制成對照藥材液[4-7]。以上各溶液取15 μl分別點在硅膠G板，用石油醚/乙酸乙酯/丙酮/甲酸展開劑展開，取出晾干，用10%硫酸乙醇液噴灑，加熱至顯示斑點，顏色清晰，供試品與對照品色譜在相同位置顯同顏色的斑點[4-7]（圖3）。

圖3 法半夏薄層色譜圖

2.2.2 桔梗薄層色譜鑒別 分別取三個批號（210820、210923、211012）的清咽宣肺茶1包12 g，加入7%硫酸乙醇-水（1∶3）混合液60 ml，回流加熱提取3 h，放置冷卻后過濾，用三氯甲烷振搖萃取2次，每次30 ml，合并兩次三氯甲烷萃取液，純化水清洗2次，每次30 ml，將三氯甲烷液脫水，濾過后將濾液蒸干，在殘渣中加入甲醇液，制作成供試品溶液；根據(jù)處方剔除中藥桔梗，制成不含桔梗的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液；用桔梗對照藥材按同樣辦法制作對照藥材液[8-10]。上面幾種溶液各取15 μl，點在同一硅膠G板上，用三氯甲烷/乙醚展開，取出晾干，再噴10%硫酸乙醇液[11-12]，加熱至顯示斑點及顏色明顯，供試品溶液與對照藥材溶液色譜在相同的位置上顯示棕黑色斑點，陰性對照液無干擾（圖4）。

圖4 桔梗薄層色譜圖

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 安捷倫氣相色譜HP-INNOWAX毛細管柱（柱長為30 m，內(nèi)徑為0.25 mm，膜厚度為0.25 μm），程序升溫，初始溫度70℃，保持4 min，先以1.2℃/min的速率升溫至120℃，再以3℃/min的速率升溫至200℃，最后以30℃/min的速率升溫至230℃，保持2 min，進樣口溫度200℃，檢測器的溫度是300℃，所有樣品不分流進入色譜柱。

2.3.2 制備溶液 ①制備對照品溶液：分別精確稱取薄荷腦對照品、胡薄荷酮對照品適量，置容量器中，加無水乙醇分別制成100 μg/ml薄荷腦對照品溶液、100 μg/ml胡薄荷酮對照品溶液，密封保存于陰涼處。②制備供試品溶液：精密稱定本品粉末1包約12 g，放在錐形瓶中，加50 ml無水乙醇，用250 W超聲處理（頻率33 kHz）1 h[3，12-13]，放置冷卻，根據(jù)冷卻后的減少量，用無水乙醇補充，然后取濾過的濾液。③制備陰性對照品溶液：按處方與制備方法制成不含荊芥和薄荷的陰性對照樣品，用與供試品溶液一樣的制備方法制作成陰性對照液[3，12-13]。

2.3.3 專屬性試驗 將供試品液、薄荷腦與胡薄荷酮對照品液以及陰性對照品液各吸取1μl，按2.3.1項下的色譜條件進行含量測定，薄荷腦對照品、胡薄荷酮對照品溶液與供試品溶液有同樣的色譜峰，陰性對照品溶液不顯示[11，14]。

2.3.4 線性關系考察 分別精密稱取胡薄荷酮和薄荷腦對照品，分別制成薄荷腦100 μg/ml胡薄荷酮100 μg/ml、薄荷腦50 μg/ml胡薄荷酮50 μg/ml、薄荷腦25 μg/ml胡薄荷酮25 μg/ml、薄荷腦10 μg/ml胡薄荷酮10 μg/ml、薄荷腦5 μg/ml胡薄荷酮5 μg/ml的混合對照品溶液并注入氣相色譜儀，進行含量測定，各1 μl的進樣量，進行回歸方程計算。薄荷腦、胡薄荷酮在進樣量范圍的回歸方程式：薄荷腦Y=10.927 00X+7.695 98（r=0.999 40），胡薄荷酮Y=10.327 14X+6.593 17（r=0.999 52）[3，12]，結 果 表明薄荷腦進樣量在5.0290～100.5800 ng，胡薄荷酮進樣量在5.0105～100.2100 ng范圍內(nèi)具有良好的線性關系。

2.3.5 精密度試驗 精確吸取供試品液，按照2.3.1項下色譜條件，共進行6次重復進樣，記錄每次的峰面積，結果薄荷腦RSD為0.97%和胡薄荷酮RSD為0.94%（n=6），說明有良好的精密度[3，11]。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗 上面同樣的供試品液與色譜條件，在0，2，4，8，12，24 h分別進行測定，將峰面積記錄，結果是薄荷腦RSD為1.59%、胡薄荷酮為1.89%。說明供試品液有良好的穩(wěn)定性[2-3，11-12]。

2.3.7 重復性試驗 批號相同（批號210923）的供試品6份，按照2.3.2項下的制備方法制備供試品液，與2.3.1項下色譜條件來進行測定，將測得的峰面積記錄，然后計算6份樣品中薄荷腦和胡薄荷酮的含量，結果是薄荷腦RSD為1.10%、胡薄荷酮RSD為1.15%（n=6），說明該方法具有良好的重復性[11，15]。

2.3.8 加樣回收率試驗 精確稱取樣品（批號210923）溶液9份，加入70%、100%、130%的混合對照品液，用2.3.2項下制備方法制得供試品液，在同樣的色譜條件中測定，計算回收率，試驗結果說明該方法具有良好的回收率（表1～2）[1-6]。

表1 薄荷腦回收率試驗

表2 胡薄荷酮回收率試驗

2.3.9 樣品含量測定 取3批不同批號的清咽宣肺袋泡茶，按2.3.2項下同樣的方法制得供試品溶液和對照品溶液，將供試品溶液與薄荷腦對照品溶液、胡薄荷酮對照品溶液分別取1 μl，按2.3.1項下色譜條件進行測定，計算薄荷腦與胡薄荷酮的含量，結果見表3～4。本品每袋含薄荷和荊芥以薄荷腦（C10H20O）計算不得少于0.86 mg；以胡薄荷酮（C10H16O）計算不得少于0.59 mg。

表3 薄荷腦含量測定結果

表4 胡薄荷酮含量測定結果

3 討論

3.1 顯微鑒別藥材的選擇

荊芥、薄荷是清咽宣肺方中的君藥，首選作為顯微鑒別藥材，結果顯示顯微特征明顯，清晰可見。

3.2 薄層鑒別藥材的選擇

清咽宣肺方的組成共有11味中藥，成分多而復雜，處方中的中藥在進行薄層鑒別的過程中，除桔梗、法半夏外，其他藥材成分在檢測中受干擾、結果不理想，故只將桔梗、法半夏作為定性鑒別藥材，結果顯示桔梗、法半夏的薄層鑒別斑點與顏色都清晰[4]、明顯。

3.3 含量測定指標成分的選擇

清咽宣肺方中，將君藥荊芥、薄荷的有效成分胡薄荷酮與薄荷腦的含量作為含量測定指標，在選擇樣品的處理方法時，比較了水蒸氣提取法和超聲儀提取法，超聲儀提取法更多地保留了胡薄荷酮和薄荷腦，也比較了提取時間30、60、90 min，以60 min提取效果最好，通過氣相色譜方法制訂了胡薄荷酮和薄荷腦的含量，操作方法簡易，測定的結果準確，有良好的重復性[2-3]，可控制清咽宣肺茶的質量。

本實驗操作方法簡單，同時具有良好的靈敏度，可以作為清咽宣肺袋泡茶的質量控制方法。