肝癌患者血清中sB7-H3、GP73、QSOX-1 的表達(dá)水平及臨床診斷價(jià)值研究

曹晨，陳曉娟，楊琳

（鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450014）

原發(fā)性肝癌是一種臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤且發(fā)病率較高[1]，其臨床癥狀一般表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛，食欲下降、乏力、腹脹等。在臨床一般采用手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療、放射治療、生物治療及中醫(yī)藥治療，其中手術(shù)治療是最有效的治療方法，然而早期的原發(fā)性肝癌患者由于臨床癥狀并不明顯，所以大部分患者待到確診時(shí)已是中晚期[2]，導(dǎo)致錯(cuò)過(guò)了最佳的手術(shù)治療時(shí)期。目前甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體是原發(fā)性肝癌主要的早期診斷生物標(biāo)志物，但是其均存在靈敏度和特異度不高等不足之處[3]。有研究表明血清可溶性B7-H3（Serum soluble B7-H3，sB7-H3）、血清中巰基氧化酶-1（Quiescin sulfhydl oxidase-1，QSOX-1）、高爾基體蛋白73（Golgi protein 73，GP73）在原發(fā)性肝癌中表達(dá)量顯著高于肝硬化組和正常組。因此本研究探討肝癌患者血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 的表達(dá)水平及臨床診斷價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料 選取在2018 年2 月至2020 年2月期間來(lái)我院治療原發(fā)性肝癌患者310 例及同期健康體檢人員100 例作為研究對(duì)象。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）觀察組患者符合原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；（2）經(jīng)過(guò)受試者及其家屬同意，簽署知情同意書(shū)，并上報(bào)我院倫理委員會(huì)獲得批準(zhǔn)同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者在參加研究前接受過(guò)化療、放療、手術(shù)等治療；（2）合并其他腫瘤、心肝腎等疾病。

將原發(fā)性肝癌患者作為觀察組，同期健康體檢人員作為對(duì)照組。其中觀察組310 例，男186例，女124 例；年齡32～70 歲，平均年齡（55.68±5.67）歲；對(duì)照組男62 例，女38 例；年齡30～72 歲，平均年齡（55.64±5.65）歲。兩組受試者在性別、年齡資料上對(duì)比差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法 所有受試者均在清晨空腹采集靜脈血5 mL，在室溫下靜置10 min，3 000 r/min 離心15 min，吸取上清液，放置在-80℃下保存待檢。采用雙抗體夾心法檢測(cè)血清中的sB7-H3、GP73、QSOX-1 的水平，其中sB7-H3 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自蘇州大學(xué)生物技術(shù)研究所，GD73 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)R＆D 公司，QSOX-1 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海滬震生物科技有限公司，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，對(duì)溶度超出線性范圍樣本稀釋5～20 倍重新進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 研究所得數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)［n（%）］的形式表示，采用獨(dú)立樣本χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以()的形式表示，采用配對(duì)樣本t 檢驗(yàn)或獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，P＜0.05為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；根據(jù)血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 的水平繪制受試工作特征曲線（Receiver operator characteristic curve，ROC），利用ROC 曲線下面積評(píng)價(jià)血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 對(duì)肝癌臨床診斷價(jià)值，并確定最佳的臨界值。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平的比較 由數(shù)據(jù)結(jié)果可知: 觀察組受試者的sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組受試者血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平的比較()

表1 兩組受試者血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平的比較()

2.2 血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系 血清sB7-H3、GP73、QSOX-1水平在患者的性別、年齡上差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Ⅰ～Ⅱ期組患者的血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平顯著低于Ⅲ～Ⅳ期組，而GP73水平卻顯著高于Ⅲ～Ⅳ期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；腫瘤直徑≥3 cm 組患者血清GP73、QSOX-1 水平顯著高于腫瘤直徑＜3 cm 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的肝癌患者血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平顯著高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系()

表2 血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系()

2.3 血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 對(duì)原發(fā)性肝癌患者的臨床診斷價(jià)值 采用ROC 曲線分析血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 在兩組受試者的表達(dá)情況，見(jiàn)表3、圖1。

圖1 血清sB7-H3、GP73、QSOX-1診斷原發(fā)性肝癌患者的ROC 曲線圖

表3 血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 對(duì)原發(fā)性肝癌患者的臨床診斷的ROC 曲線參數(shù)

3 討論

原發(fā)性肝癌患者生存質(zhì)量和生存率的提高取決于患者的早期診斷，而由于目前臨床肝癌患者輔助診斷的指標(biāo)主要為甲胎蛋白、癌胚抗原及甲胎蛋白異質(zhì)體等，但是上述輔助診斷指標(biāo)的敏感性和特異性皆不理想，并且存在漏診率較高情況。朱波等[7]在研究中表明甲胎蛋白在診斷肝癌時(shí)，其靈敏度僅為34.5%～64.8%，特異度為71.5%～93.6%。因此，發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標(biāo)志物對(duì)肝癌的早期診斷和改善患者預(yù)后具有重要的臨床意義。近幾年，許多臨床工作對(duì)肝癌的診斷指標(biāo)[8-9]進(jìn)行了大量的研究。

GP73 是一種跨膜蛋白，又稱2 型高爾基體膜蛋白，在正常肝臟組織中肝細(xì)胞很少表達(dá)GP73，其主要在肝膽管上皮細(xì)胞表達(dá)[10]。當(dāng)GP73 的增量表達(dá)到達(dá)飽和后，剩余的GP73 向高爾基體順面遠(yuǎn)側(cè)移動(dòng)，這可能是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞主動(dòng)釋放或者在腫瘤細(xì)胞壞死后GP73 進(jìn)入血液從而導(dǎo)入血清中[11]。鄭緒斌等[12]認(rèn)為在原發(fā)性肝癌患者血清中GP73高表達(dá)，具有一定的臨床診斷價(jià)值。

B7-H3 是一種共刺激分子免疫球蛋白，其mRNA 在人體機(jī)體中廣泛表達(dá)。目前，B7-H3 分子同時(shí)存在膜型和可溶型（sB7-H3）。B7-H3 的蛋白質(zhì)分子在B 細(xì)胞、活化的T 細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和單核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。康富標(biāo)等[13]在研究中發(fā)現(xiàn)B7-H3在原發(fā)性肝癌患者組織中表達(dá)水平升高，并且與腎癌、乳腺癌、胃癌等多種腫瘤組織的發(fā)生和發(fā)展有聯(lián)系。趙和平等[14]認(rèn)為sB7-H3 在原發(fā)性肝癌患者血清中表達(dá)量高于對(duì)照組，且能夠作為診斷肝癌的指標(biāo)。

QSOX-1 是一種參與蛋白質(zhì)折疊的氧化巰基的酶，主要分布在高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。Knutsvik G等[15]在研究中表明QSOX-1 的高表達(dá)是乳腺癌存活率下降的獨(dú)立影響因素，且QSOX-1 的表達(dá)水平可能作為腫瘤疾病的生物標(biāo)志物。陶智、馮顯紅[16]的研究表明QSOX-1 對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的截?cái)嘀禐?8.75 ng/L，靈敏度為74.3%，特異度為77.1%。

本研究顯示：觀察組受試者的sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平均顯著高于對(duì)照組。血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平在患者的性別、年齡上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅰ～Ⅱ期組患者的血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平顯著低于Ⅲ～Ⅳ期組，而GP73水平卻顯著高于Ⅲ～Ⅳ期組；腫瘤直徑≥3 cm 組患者血清GP73、QSOX-1 水平顯著高于腫瘤直徑＜3 cm組；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的肝癌患者血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 水平顯著高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組。B7-H3、GP73、QSOX-1 的曲線下面積（AUC）分別為0.930、0.820 及0.817，最佳臨界值分別為2 870.58 ng/mL、115.68 ng/mL 及68.715 pg/mL，敏感度分別為74.2%、73.2%、57.1%，特異度分別為93.0%、98.0%、93.0%。若sB7-H3、GP73、QSOX-1 聯(lián)合診斷，即其中之一為陽(yáng)性即診斷為肝癌，其敏感度為84.5%，特異度為98.9%。

綜上所述，血清sB7-H3、GP73、QSOX-1 在原發(fā)性肝癌血清中高表達(dá)，表達(dá)水平與腫瘤直徑、臨床分期及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，且sB7-H3、GP73、QSOX-1 可作為原發(fā)性肝癌早期診斷的良好指標(biāo)，sB7-H3、GP73、QSOX-1 聯(lián)合檢測(cè)更能提高原發(fā)性肝癌的診斷的準(zhǔn)確性。