血清Asprosin、miR-206、IMA在多囊卵巢綜合征患者中的表達及臨床意義

歐慧慧,胡新,李婧,張暢

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是以雄性激素過高、胰島素抵抗(insulin resis-tance,IR)、內分泌失調造成卵巢異常改變的常見病,常見于育齡女性[1]。有研究認為[2],大約有4%的女性會患PCOS,表現為月經紊亂、多毛、肥胖,還容易影響生育力,對患者家庭生活造成嚴重傷害。PCOS病因尚不清楚,多認為與代謝、環境、遺傳有關。脂肪組織作為機體最大內分泌組織,可分泌參與PCOS發生發展的脂肪因子,如白脂素(Asprosin)可調節IR,與糖尿病、肥胖疾病有關[3]。研究認為[4],PCOS缺血介導的炎性反應和氧化應激是PCOS發生發展的關鍵,微小RNA-206(micro RNA-206,miR-206)作為miRNA家族重要成員,其表達與IR關系密切;缺血修飾白蛋白(ischemia-modified albumin,IMA)是組織缺血的敏感標志物,可反映不同疾病活動狀態,在PCOS患者中可反映機體氧化應激[5]。但由于目前Asprosin、miR-206、IMA三者在PCOS患者中的研究相對較少,對PCOS患者發生IR與三者間的關系不明確,因此,本研究通過對PCOS患者血清Asprosin、miR-206、IMA及逆行檢測,旨在分析血清Asprosin、miR-206、IMA在PCOS患者中的表達變化和意義,為PCOS的可能病理生理變化提供參考依據,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年6月—2022年6月青島市市立醫院收治的PCOS患者120例為病例組,另選同期健康體檢孕齡婦女60例為健康對照組。根據BMI將PCOS患者分為超重/肥胖亞組(BMI≥25 kg/m2)68例、體質量正常亞組(BMI<25 kg/m2)52例;再根據胰島素抵抗指數(HOMA-IR)將PCOS患者分為IR亞組(HOMA-IR≥2.69)73例、非IR亞組(HOMA-IR<2.69)47例。本研究經醫院倫理委員會批準(2019審字第077號),入選者及家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準:①符合《多囊卵巢綜合征中國診療指南》中PCOS的診斷標準[6],青春期、生育期癥狀:月經異常、多毛、不孕;中老年癥狀為糖尿病、心血管疾病、高血脂癥狀;超聲下顯示卵巢有直徑2～9 mm卵泡12個以上,卵巢體積增大超過10 cm3;血清激素檢查顯示卵泡刺激素正常或偏低,黃體生成素、雌二醇升高。②患者近期無感染,3個月內未使用避孕、降脂、降糖藥。③患者均為育齡已婚婦女,年齡18～40歲。(2)排除標準:①存在嚴重精神類、免疫系統疾病患者。②合并肝腎、心血管疾病及導致雄性激素分泌增多、月經異常的疾病患者,如庫欣綜合征、卵泡膜細胞增殖癥、功能性下丘腦性閉經、甲狀腺疾病等。③存在惡性腫瘤者。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 血清Asprosin、IMA表達水平檢測:研究對象均于月經周期第5～8 d抽取清晨空腹外周靜脈血5 ml,閉經患者靜脈血抽取時間不限,以3 000 r/min離心10 min,取上清,采用上海臻科生物人Asprosin Elisa試劑盒、人IMA Elisa試劑盒檢測血清Asprosin、IMA,操作步驟嚴格按照試劑盒說明書。

1.3.2 血清miR-206表達水平檢測:采用美國 Invitrogen 公司Trizol reagent RNA 提取試劑盒,提取總RNA,采用美國ABI公司7500型熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR)儀,應用實時聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測血清miR-206表達水平,以U6為內參,RNA催化合成采用cDNA:PrimerScriptTMRT試劑盒,RNA擴增采用SYBR Premix Ex TaqTMqRT-PCR試劑盒,miR-206正向引物:5'-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3',反向引物:5'-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3',U6正向引物:5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3',反向引物:5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3',反應條件為:95℃ 5 min預變性,95℃ 15 s 變性,60℃ 30 s 退火,72℃ 10 s延伸,共40個循環,以U6為miR-206內參,采用2-ΔΔCt法計算miR-206表達水平,ΔΔCt =ΔCt實驗組標本-ΔCt健康對照組標本。

1.3.3 血糖、血脂檢測:魚躍血糖儀580檢測空腹血糖(FPG),上海化邦生物人空腹胰島素 Elisa試劑盒檢測FINS,根據空腹血糖×空腹胰島素/22.5計算穩態模型胰島素抵抗指數(homeostatic model insulin resistance index,HOMA-IR);采用西門子全自動生化分析儀Viva-proE檢測總膽固醇、三酰甘油。

1.3.4 性激素檢測:采用西門子全自動生化分析儀(Viva-proE)檢測雌二醇、催乳素、黃體生成素、卵泡刺激素、睪酮等。

1.3.5 血肌酐(SCr)、hs-CRP檢測:采用西門子全自動生化分析儀(Viva-proE)檢測SCr,上海初態生物人高敏C反應蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)ELISA試劑盒檢測hs-CRP。

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2 結 果

2.1 病例組和健康對照組臨床資料比較 病例組BMI、HOMA-IR、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、黃體生成素、卵泡刺激素、睪酮、hs-CRP、Asprosin、IMA高于健康對照組,miR-206低于健康對照組(P<0.05),其他資料比較差異無統計學意義(P>0.05),見表1。

表1 健康對照組、病例組臨床資料比較

2.2 病例組不同BMI患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較 超重/肥胖亞組PCOS患者血清Asprosin、IMA高于體質量正常亞組(P<0.01),miR-206低于體質量正常亞組,見表2。

表2 病例組不同BMI患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較

2.3 病例組不同HOMA-IR患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較 IR亞組PCOS患者血清Asprosin、IMA高于非IR亞組,miR-206低于非RI亞組(P<0.01),見表3。

表3 病例組不同HOMA-IR患者血清Asprosin、miR-206、IMA比較

2.4 血清Asprosin、miR-206、IMA與各指標間的相關性分析 Asprosin與BMI、HOMA-IR、總膽固醇、三酰甘油呈正相關(P<0.01),miR-206與HOMA-IR、Asprosin呈負相關(P<0.01),IMA與HOMA-IR、Asprosin呈正相關,與miR-206呈負相關(P<0.01),見表4。

表4 血清Asprosin、miR-206、IMA與各指標間的相關性分析

2.5 影響PCOS發生IR的多因素Logistic回歸分析 以PCOS患者是否發生IR為因變量(1=是,0=否),以血清Asprosin、miR-206、IMA連續變量為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,血清Asprosin、IMA高表達水平、miR-206低表達水平是影響PCOS發生IR的危險因素(P<0.05),見表5。

表5 影響PCOS發生IR的多因素Logistic回歸分析

2.6 血清Asprosin、miR-206、IMA及聯合對PCOS發生IR的預測價值分析 血清Asprosin、miR-206、IMA及聯合預測PCOS發生IR的AUC為0.761、0.894、0.667、0.918,聯合預測的AUC高于血清Asprosin、IMA(Z=3.831、4.663,P<0.01),見表6、圖1。

圖1 血清Asprosin、miR-206、IMA預測PCOS發生IR的ROC曲線

表6 血清Asprosin、miR-206、IMA及三者聯合對PCOS發生IR的預測價值分析

3 討 論

Asprosin是由哺乳動物白色脂肪組織產生的一種與肝臟葡萄糖釋放有關的空腹誘導的糖原蛋白激素,由140個氨基酸組成,分子量30 kDa,是反映葡萄糖穩態、胰島素抵抗、肥胖狀態等異常代謝性疾病的有效生物標志物,機體正常狀態下在血液中的含量極少,禁食后表達水平會升高,但進食后其濃度恢復正常,因此,認為Asprosin可能參與胰島素調節[10]。Alan等[11]研究表示,Asprosin表達水平升高與IR的PCOS有一定相關性,可作用于下丘腦調節患者食欲和體質量。miRNAs是一種類似于siRNA的單鏈RNA,由高等真核生物基因組編碼,在細胞生長、發育、凋亡、腫瘤形成過程的調節中起多種作用,miRNA在血液中表達穩定,易于檢測,該分子的發現和深入探究為臨床疾病的診療提供了新思路。miR-206位于人體染色體6p12.2上,在心肌組織、骨骼、腫瘤形成中具有調節作用[12]。研究表示[13],miR-206的表達可能會受胰島素調節,控制卵巢顆粒細胞凋亡,參與PCOS的發病。IMA是一種較為理想的新型缺血標志物,可反映機體氧化應激反應程度,在一些心血管疾病的早診斷、指導治療中有重要意義。國外學者Guven等[14]首次報道PCOS患者中存在血清IMA升高情況,PCOS患者由于糖脂代謝異常、胰島素抵抗,使患者機體處于氧化應激狀態。卵泡內分泌微環境存在氧化、抗氧化動態平衡,當機體處于氧化應激時,卵泡局部微環境氧化、抗氧化動態失衡,卵母細胞發育、成熟受損,無法正常排卵,出現月經少、閉經、不孕等PCOS的表現,因此,PCOS不單單是一種婦科疾病,還是復雜、多種因素參與的內分泌紊亂疾病[15]。

本研究中,PCOS患者BMI、HOMA-IR、總膽固醇、三酰甘油、黃體生成素、卵泡刺激素、睪酮、hs-CRP、Asprosin、IMA均高于健康對照組,miR-206表達水平低于健康對照組,表明PCOS可能與上述指標有關,超重肥胖是PCOS常見特征,同時本身為代謝類疾病,存在糖脂代謝異常,雖然超重/肥胖并未納入PCOS診斷標準,但在PCOS患者中,50%～70%伴有超重/肥胖。IR是PCOS的發病機制之一,IR可提高17α羥化酶活性,促進卵泡膜細胞合成雄激素,引發高雄激素血癥,進而影響胰島素介導的葡萄糖代謝能力,加重機體IR程度,導致惡性循環;IR的存在可影響竇卵泡發育,增加流產風險,降低生育力,同時IR與超重/肥胖相互促進,兩者共同存在在PCOS的發生發展中起重要作用[16]。PCOS激素失衡導致總膽固醇、三酰甘油升高,與IR有關,其中激素睪酮作為PCOS患者體內活性最高的雄激素,對卵巢顆粒細胞的分化影響較嚴重,可導致卵泡發育停滯,影響生育力。研究認為[17],氧化應激是造成PCOS患者體內雄激素升高的重要原因。hs-CRP由PCOS慢性炎性反應引起,可增高心血管疾病、糖尿病風險,袁芬等[18]研究顯示,PCOS患者中BMI、hs-CRP、睪酮、黃體生成素、IMA均高于正常健康體檢者,hs-CRP與IMA無相關性,其水平升高的原因可能與PCOS患者超重/肥胖有關,與本研究結果相符。Asprosin可影響機體體質量,作為增進食欲激素,其表達水平高說明患者食欲高,缺乏Asprosin可導致食欲減退,患者出現消瘦情況,因此,本研究結果中Asprosin在超重/肥胖PCOS患者中的表達水平較高,同時IR亞組PCOS患者Asprosin較高,高表達水平是影響PCOS發生IR的危險因素,提示Asprosin與PCOS患者BMI、IR有關。Alan等[11]研究顯示,RI組和超重/肥胖PCOS患者Asprosin水平較高,Asprosin與PCOS患者的BMI、IR密切相關。Wang等[19]研究提示Asprosin在肥胖兒童中的表達水平較高,與HOMA-IR呈正相關。另有研究表示[20],減肥術后患者血清Asprosin表達水平較術前低,說明BMI與Asprosin有關。本研究結果顯示,超重/肥胖PCOS患者血清IMA表達水平較高,高表達水平是影響PCOS發生IR的危險因素,與歐英霞等[21]研究結果一致。miR-206可通過促進胰島素信號減少葡萄糖產生,本研究結果發現,在超重/肥胖和IR亞組PCOS患者中血清miR-206表達水平較低,低表達水平是影響PCOS發生IR的危險因素,提示miR-206與IR有關,桑敏等[22]研究顯示,miR-206與PCOS患者BMI呈負相關,劉彩霞等[23]研究顯示,miR-206在PCOS不孕患者中表達水平較低,經治療后藥物通過改善葡萄糖代謝、IR調節miR-206,使miR-206表達水平上升。經Pearson相關性分析顯示,血清Asprosin與BMI、總膽固醇、三酰甘油、HOMA-IR呈正相關,miR-206與HOMA-IR、Asprosin呈負相關,IMA與HOMA-IR、Asprosin呈正相關,與miR-206呈負相關,與以往研究結果相符[24-25]。白愛紅等[13]研究顯示,miR-206與HOMA-IR呈負相關,與本研究結果一致。

褚冉等[26]研究提示,Asprosin在胰島素調節中扮演重要角色,通過血糖、胰島素影響PCOS的發生進展,由于PCOS存在IR導致Asprosin水平升高,但具體機制不明,仍需進一步深入研究。進一步研究發現Asprosin預測PCOS發生IR的AUC為0.761,與本研究結果一致。本研究經ROC曲線分析顯示,Asprosin、miR-206、IMA及三者聯合預測PCOS發生IR的AUC為0.761、0.894、0.667、0.918,三者聯合預測的AUC高于Asprosin和IMA,提示聯合檢測有助于提高PCOS發生IR的預測價值。但由于本研究樣本量較小,對于Asprosin、miR-206、IMA與PCOS發生IR的機制未進行詳細分析,需臨床進一步研究。

綜上所述,血清Asprosin、IMA在PCOS中呈高表達,miR-206呈低表達,與IR有關,對預測PCOS患者發生IR具有一定價值,可作為PCOS發生IR的預測指標。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

歐慧慧:設計研究方案,實施研究過程,論文撰寫;胡新:提出研究思路,分析試驗數據,論文審核;李婧:實施研究過程,資料搜集整理,論文修改;張暢:進行統計學分析及課題設計,論文撰寫