疑似遺傳代謝病串聯質譜檢測結果和臨床分析

王衍俊

【摘要】目的：探討串聯質譜技術在高危新生兒代謝病篩查的結果，分析遺傳代謝病發病率、疾病分布情況。方法：對2021年1月—2022年10月于我院就疑似遺傳代謝病尋求醫療措施的兒童一共500例作為本次研究的全部觀察對象。針對所有兒童通過串聯質譜檢測技術進行遺傳代謝檢測；針對所有初篩陽性、高度懷疑存在遺傳代謝病的病例召回復查，隨后結合其他檢測措施開展臨床分析。結果：針對500例開展檢測的兒童中，初篩陽性病例一共存在30例，陽性暴露率為6%，結合其他監測措施分析，最終被確診存在遺傳代謝病的患者只有2例，占比率為0.4%。所罹患的遺傳代謝病分別為：苯丙氨酸氫化酶缺乏癥：1例；甲基丙二酸血癥：1例。結論：在本次研究中，針對存在類似狀況的家庭的孩子就遺傳代謝病的檢測，總體上的發病率較高，但針對遺傳代謝病的檢出病種較少，因此需要更大樣本容量的兒童進行檢測。

【關鍵詞】串聯質譜檢測技術；遺傳代謝病；發病率；分布

Results and clinical analysis of suspected genetic metabolic disease by tandem mass spectrometry

WANG Yanjun

Taian Maternal and Child Health Hospital， Taian， Shandong 271000， China

【Abstract】Objective： To explore the results of tandem mass spectrometry in high-risk neonatal metabolic disease screening， analyze the incidence of genetic metabolic disease， disease distribution. Methods： A total of 500 children who sought medical treatment for suspected genetic metabolic diseases in our hospital from January 2021 to October 2022 were all observed in this study. Genetic metabolism was detected by tandem mass spectrometry in all children. All cases with positive initial screening and high suspicion of genetic metabolic disease were recalled for re-examination， and then clinical analysis was carried out in combination with other detection measures. Results： Among the 500 children tested， there were 30 positive cases in the initial screening， with a positive exposure rate of 6%. Combined with analysis of other monitoring measures， only 2 patients were finally diagnosed with genetic metabolic disease， accounting for 0.4%. The genetic metabolic diseases were phenylalanine hydrogenase deficiency （1 case） and glycogen storage disorder （1 case）. Conclusion： In this study， the detection of genetic metabolic diseases among children from families with similar conditions showed a higher incidence on the whole， but fewer diseases were detected for genetic metabolic diseases， so a larger sample size of children was needed for detection.

【Key Words】Tandem mass spectrometry detection technology； Genetic metabolic disease； Incidence of disease； Distribution

遺傳代謝病也被稱之為遺傳代謝紊亂（Inherited metabolic disease LMD），該疾病的發生在很大程度上受到遺傳缺陷的影響；串聯質譜檢測技術（Tandcm Mass Spectrometry MS/MS MS2）在當前是一種特異性生化代謝物測定技術，該檢測技術的應用步驟大致是針對標本的質荷比、湘陰離子強度完成測定之后，以該結果為依據針對物質進行定量分析[1]。MS2涉及到質譜選擇的多個步驟，MS2作為一種化學分析技術，在實驗研究、臨床實踐中主要被應用于鑒定未知化合物且闡明該物質的分子結構[2]。MS2也可以被適用于分子種類的定量，因為其應用效果，MS2被認為是一種非常敏感的技術，適用于微量樣品（低至10～12g，10～15moL）的定量分析，并且易于與色譜分離方法配合使用，以鑒定混合物中的成分[3]。在生物醫學研究、臨床實踐中，MS2有幾種應用途徑，即：臨床試驗、毒理學、先天性代謝缺陷---兒童篩查、癌癥病理篩查、藥物應用結果檢測等；MS2的這些特點為早期識別遺傳代謝病并為其及時干預提供了依據[4]。據此，本文就串聯質譜技術在高危新生兒代謝病篩查的結果進行分析。

1 資料和方法

1.1 一般資料

對2021年1月—2022年10月于我院就疑似遺傳代謝病尋求醫療措施的兒童一共500例作為本次研究的全部觀察對象。患兒家屬中的直系親屬、旁系親屬在三代之內存在代謝性疾病的情況；于我院尋求MS2技術檢測的患兒均存在反復嘔吐、抽搐、喂養困難、黃疸、肝臟體積和肌張力異常的情況。兒童年齡區間（3～6個月）。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集 確保樣本采集發生在兒童出生48h且喂養活動達到6次的情況下進行的。通過兒童的足跟采集血液并制作成干濾血片，然后從樣本中采集4個血液斑點，血液斑點的采集要求是：所采集血液斑點的直徑必須達到8mm，針對血片，依次開展平置、懸空、充分陰干的程序，再確認針對上述血片樣本完成上述程序工作之后，將這些血片標本送到本院新生兒疾病篩查中心備檢。

1.2.2 MS2檢測 進行MS2檢測的儀器為；儀器為Waters公司生產的TQD 525以及PE公司生產的試劑盒：肉堿好琥珀酰丙酮測定試劑盒、非衍生化多種氨基酸試劑盒。針對LMD的篩查指標總共達到80項，其涉及到：琥珀酰丙酮、氨基酸、堿基肉堿及上述幾種指標的相應比值，以便對于迄今發現的所有LMD進行檢測；配藥設施還包括內標準品、質控品。通過Neo Base測試程序針對氨基酸、琥珀酰丙酮、酰基和游離肉堿；其具體測量過程包括但不限于：針對血片使用溶液對其開展萃取，隨后通過串聯質譜系統開展分析，而每一種樣本對于內標準的響應程度應當和其之間的濃度成比例；在針對非衍生化多種氨基酸、肉堿、琥珀酰丙酮開展定量分析時，應通過多反應監測模式獲得數據，在測定時間內針對分析物在碰撞誘導后的產物的定量分析應當完成；采用系統內軟件包執行數據采集、處理；而每一份報告應當由遺傳專科醫師負責審核、發放。

1.2.3 初篩陽性個體復查 在確認患者陽性之后，令其家屬攜帶其于我院復查，該階段檢查還應當配合血尿常規、血糖、乳酸、腦電圖、CT、血氧數值的檢查；在獲得結果之后，醫生針對患者建立檔案，并且定期追蹤、復查。

2 結果

2.1 MS2檢測結果、LMD確診情況統計

針對500例開展檢測的兒童中，初篩陽性病例一共存在30例，陽性暴露率為6%，結合其他監測措施分析，最終被確診存在遺傳代謝病的患者只有2例，占比率為0.4%。所罹患的遺傳代謝病分別為：苯丙氨酸氫化酶缺乏癥：1例、甲基丙二酸血癥1例。見表1、2。

3 討論

如上所言，針對LMD的醫療措施倡導盡早檢查、干預；LMD作為一種遺傳疾病，多數學者認為針對孩子的干預應當在1歲以前完成，這樣不僅僅改善預后，且對于患者家屬而言，所耗費的治療成本也更少[5]。

在本次研究中，500例存在類似情況的患者經過MS2、其他檢測之后，在最終被確認為存在LMD的患者只有兩例；一例為糖原貯積癥，另外一例為苯丙氨酸氫化酶缺乏癥。苯丙氨酸氫化酶缺乏癥被歸類為氨基酸代謝病，在早期不能及時進行干預，往往會在進展到幾個月之后出現小便鼠尿、喂養困難、肌力異常，達到晚期會發展為神經系統并發癥，本次研究中，該例患者的臨床癥狀不典型，在后續經過干預的，當前情況穩定，可能表明其病情正處于早期；這顯示了MS2聯合其他檢測在診斷早期苯丙氨酸氫化酶缺乏癥中發揮的重要價值[6]。

甲基丙二酸血癥屬于常染色體隱性進，在臨床上被歸類為有機酸代謝異常疾病；甲基丙二酸包括異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、奇數鏈脂肪酸等在代謝途徑中由甲基丙二酰輔酶產生，一般是因為甲基丙二酰輔酶A缺陷或者維生素B12的作用造成甲基丙二酸、丙酸等代謝物質異常積累，進而導致神經、肝臟、骨髓等重要器官出現損傷。該疾病發展到后期，患兒會出現脫水、生長發育遲緩、肝臟腫大、昏迷、智力異常等危險信號明顯的癥狀；重度患者在癥狀出現后，生存期可能在一年，但是這種情況較少，盡管甲基丙二酸血癥是一種治療難度較高的遺傳性疾病，但是大多數情況能得到有效控制，而早期的診斷非常重要；就臨床癥狀而言，該例患者也不典型，這對于先天性疾病的診斷要求很高，這也在一定程度上顯示了MS2診斷技術的優勢[7]。

MS2聯合基因檢測可以幫助LMD的診斷，在近幾年，隨著測序技術的改善，MS2受此影響針對LMD的診斷準確性也在提高；本研究中兩例LMD患者均被找到致病基因，且對于被查出致病定位點的患者進行家系基因檢查有助于滿足家屬今后的生育需要；本研究兩例患者的父母均被查出是基因攜帶者，均為常染色體隱性遺傳病，可以根據MS2、基因檢測結果指導如何健康生育下一胎[8]。

參考文獻

[1] 韓連書.遺傳代謝病檢測技術及應用選擇[J].臨床兒科雜志，2023，41（2）：81-85.

[2] 胡勤，何藝，韋懿.新生兒遺傳代謝病串聯質譜篩查影響因素和基因檢測結果分析[J].中國婦幼保健，2022，37（10）：1891-1895.

[3] 萬智慧.新生兒遺傳代謝病串聯質譜篩查帶教思考[J].中國優生與遺傳雜志，2022，30（3）：531-532.

[4] 趙娜，王金瑋，李雪燕.廊坊地區41062例新生兒遺傳代謝病串聯質譜篩查結果分析[J].中國優生與遺傳雜志，2022，30（3）：504-508

[5] 王菊，周玉俠.串聯質譜與二代測序聯用在新生兒遺傳代謝病診斷中的應用價值[J].中國優生與遺傳雜志，2021，29（12）：1739-1741.

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[7] 魯文東，王洪祥，朱敏.串聯質譜技術聯合高通量測序對新生兒遺傳代謝病的篩查分析[J].中國優生與遺傳雜志，2021，29（3）：413-415.

[8] 于愛真，馮雪，王欣.質譜檢測聯合下一代測序在新生兒遺傳代謝病診斷中的應用[J].海南醫學，2021， 32（2）：177-180.