針刀療法對神經痛大鼠的鎮痛作用研究

劉亞南 ，楊 雙 ，彭煜航 ，陳 靜 ，徐世蓮

（1）昆明醫科大學基礎醫學院，云南 昆明 650500;2）山東化工職業學院中職學院，山東 濰坊 261100）

神經病理性痛是臨床較為常見的一種慢性疼痛，目前臨床使用阿片類鎮痛劑等鎮痛藥物治療神經痛，但因其發生發展機制復雜，致使至今臨床對其治療效果并不理想。針刀醫學借鑒了中醫針灸的精華，同時又創立了閉合性手術理論、慢性軟組織損傷病理學理論、經絡實質理論體系。治療時將小針刀刺入治療點的深部組織，對病變部位進行松解、切開和剝離，發揮了“針”和“刀”的作用，具有止痛效果好、作用持續時間長等優點。

針刀療法的鎮痛作用在臨床應用較為廣泛。有研究表明在100 例腰腿痛患者臨床治療中，針刀干預組的總有效率高于對照組（針灸及推拿組）[1]；在對腰椎間盤突出癥患者的治療中，針刀干預的臨床療效優于硬膜外注射類固醇激素以及針刺、推拿等傳統療法[2]。在臨床治療50 例肩周炎患者中，按照患者的治療方案將其分為觀察組（采用關節松動聯合小針刀療法）和對照組（采用單純關節松動治療），各25 例，結果顯示聯合小針刀療法的臨床療效高于單純關節松動治療的療效[3]。在治療212 例頸肩腰腿疼患者中，單純應用中藥熏洗的總有效率（76.42%）顯著低于其結合小針刀療法的總有效率（94.34%）[4]。

在臨床實踐中因針刀療法方法簡便，且療效顯著，故得到患者的普遍認可和接受。但迄今為止有關針刀療法的鎮痛作用的實驗研究報道較少。本實驗研究針刀療法對神經痛大鼠的鎮痛作用，為針刀療法的臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物SD 大鼠56 只，雄性，體重180～220 g，購于昆明醫科大學實驗動物學部。實驗期間大鼠分籠飼養，自由取食和飲水，自然光照，室溫維持在（22±1）℃。所有動物實驗操作均遵循昆明醫科大學動物倫理委員會（No：kmmu2020052）及國際疼痛研究協會的規定。

1.1.2 實驗儀器智能熱板儀（YLS-6B，濟南益延科技有限公司）；Randall-Siletto 痛覺測試儀（37215，意大利UGO Basil 公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 痛覺行為學測試方法

熱板測試：熱刺激誘發的大鼠后爪縮爪潛伏期（hind paw withdrawal latency，HWL）使用智能熱板儀測定，熱板溫度維持在（52±0.2 ）℃。測試時分別將大鼠左右后爪足底平放于熱板的中央位置，確保足底與熱板充分接觸。大鼠后爪置于熱板后開始計時，當大鼠后爪因傷害性熱刺激產生疼痛而縮爪時，計時結束，此時智能熱板儀上記錄時間即為大鼠對傷害性熱刺激的HWL（精確度0.01 s）。為避免燙傷動物的后爪組織，測試時間15 s 即切斷測試。

壓力測痛儀測試：壓力刺激誘發的大鼠后爪縮爪閾值（hind paw withdrawal threshold，HWT）使用Randall-Siletto 痛覺測試儀測定。調整砝碼刻度至0，分別將大鼠左右后爪跗跖關節輕置于楔形壓力閥下，測試者用腳踩住馬達，步進馬達使砝碼向前移動，此時施加在后爪跗跖關節上的壓力以30 g/s 速度增加。當大鼠后爪縮爪時，讀出此時砝碼刻度，即為大鼠對壓力刺激的HWT。為避免壓傷動物的后爪組織，砝碼刻度為15 g 時即切斷測試。

為使大鼠的HWL 和HWT 較為穩定，在CCI造模前對大鼠進行5 d 的訓練。

1.2.2 神經病理性痛大鼠模型建立神經痛動物模型制作采用左側坐骨神經結扎（chronic constriction injury，CCI）的方法[5]。使用戊巴比妥鈉（50 mg/kg）麻醉大鼠后，暴露左側大腿中部坐骨神經，用4 號羊腸線每隔1.0～1.5 mm 輕度結扎神經，共結扎4 圈。

1.2.3 針刀松解術將CCI 大鼠隨機分為針刀組（n=11）、對照組（n=9）和模型組（n=8）。針刀組大鼠在CCI 造模第10 天行針刀干預治療，對照組僅針刀插入，不行縱向疏通及橫向剝離干預治療。每周治療1 次，共3 次。模型組不做針刀處理。

針刀治療前，測定各組大鼠的雙側HWL 和HWT，每個值測定3 次，取平均值做基礎值。治療后，測定第1 天至第20 天的HWL 和HWT，計算它們的變化百分率[（治療后值-基礎值）÷基礎值×100%]。

1.3 統計學處理

數據采用“均數±標準誤”表示，用GraphPad Prism 6 軟件統計分析。各組之間樣本比較采用重復測量雙因素方差分析（two-way repeated measure ANOVA）或雙尾配對t檢驗統計。檢驗標準為α=0.05，P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 左側坐骨神經結扎引起大鼠HWL 和HWT減小

和結扎前（n=8）比較，CCI 后第10 天（左側后爪：t=4.22，P<0.01；右側后爪：t=4.38，P<0.01）和第20 天（左側后爪：t=10.62，P<0.001；右側后爪：t=7.62，P<0.001）大鼠HWL縮短；且坐骨神經結扎后第10 天（左側后爪：t=9.01，P<0.001；右側后爪：t=19.99，P<0.001）和第20 天（左側后爪：t=12.54，P<0.001；右側后爪：t=16.38，P<0.001）大鼠HWT 減小。坐骨神經結扎后引起的HWL 的縮短（左側后爪：t=12.77，P<0.001；右側后爪：t=3.28，P<0.05）和HWT 的減小（左側后爪：t=9.85，P<0.001；右側后爪：t=14.55，P<0.001）一直持續到結扎后第30 天。各組間差異采用雙尾配對t檢驗統計分析，見圖1。說明在此期間，左側坐骨神經結扎造成大鼠外周神經損傷，產生慢性疼痛。

2.2 針刀干預對神經痛的鎮痛作用

坐骨神經結扎第10 天，針刀組大鼠行針刀干預治療，每周1 次，連續3 次。于治療第1 天開始檢測各組大鼠的HWL 和HWT。與對照組比較，針刀組大鼠HWL（左側后爪：F=361.30，P<0.001；右側后爪：F=54.67，P<0.001）和HWT（左側后爪：F=60.43，P<0.001；右側后爪：F=49.36，P<0.001）均顯著延長。與模型組比較，針刀組大鼠的HWL（左側后爪：F=289.00，P<0.001；右側后爪：F=69.97，P<0.001）和HWT（左側后爪：F=85.36，P<0.001；右側后爪：F=54.48，P<0.001）也顯著增加。而模型組與對照組比較則差異無統計學意義（HWL：F=0.55，P左>0.05；F=0.25，P右>0.05。HWT：F=1.59，P左>0.05；F=0.50，P右>0.05）。組間差異采用重復測量雙因素方差分析進行統計，見圖2。

2.3 針刀療法對神經痛的鎮痛作用與嗎啡鎮痛作用比較

將CCI 大鼠隨機分為針刀組（n=10）與嗎啡組（n=10），造模第10 天2 組分別行針刀治療或皮下注射嗎啡（10 mg/kg），檢測針刀治療或嗎啡注射后1/6、1/3、1/2、1、3、6、12、24、48、72 h的HWL 和HWT。比較針刀組和嗎啡組在不同時間點的HWL 和HWT，結果顯示嗎啡組在用藥1/6～3 h 鎮痛作用顯著，但隨著時間的延長，其鎮痛作用也隨之減弱甚至消失。而針刀組對神經痛的鎮痛作用穩定，且持續時間長，見圖3。組間的差異采用重復測量雙因素方差分析進行統計。

圖3 針刀治療和嗎啡對 CCI 大鼠的鎮痛作用比較Fig.3 The analgesic effects of needle-knife therapy on CCI rats were compared to morphine analgesia

3 討論

為探索和研究神經痛的發病機制，研究者們建立了多種神經痛模型，典型的神經病理性疼痛模型有坐骨神經分支選擇性損傷模型、坐骨神經痛慢性結扎損傷模型、坐骨神經痛部分結扎模型和脊髓選擇性結扎模型等。本實驗采用1988 年Bennet 等[5]通過單側輕度結扎坐骨神經建立的CCI 模型，該模型與人體坐骨神經壓迫或損傷引起的坐骨神經痛的癥狀很相似。大鼠在坐骨神經結扎術7～10 d 后出現疼痛綜合征，14～28 d 達到痛敏高峰，持續2 個月后疼痛會逐漸消退。本研究結果顯示在針刀治療期間（造模第10～30 天）CCI 大鼠對傷害性熱刺激誘發的HWL 和壓力刺激誘發的HWT 均縮短，表明左側坐骨神經結扎引起大鼠產生慢性疼痛，見圖1。

針刀療法在臨床治療神經痛的應用中顯示了其鎮痛作用穩定且持續時間長的特點，并且鎮痛作用顯著。坐骨神經痛患者（由腰椎間盤突出癥引起）給予針刀松解干預后，疼痛癥狀有效緩解[6-7]。此外，針刀療法在三叉神經痛治療中療效顯著[8]。另有研究報道，針刀治療可有效緩解腰大肌損傷引起腰腿痛患者的疼痛程度，從而提高患者生活質量[9]；針刀療法能改善膝關節炎患者的疼痛癥狀[10]。雖然針刀療法的鎮痛作用的臨床研究較多，但有關針刀療法鎮痛作用的動物實驗研究報道較少，本實驗研究發現，針刀療法對CCI 大鼠具有明顯的鎮痛作用，見圖2。

在對針刀療法與其他鎮痛策略的比較中，有研究報道與電針對照組比較，針刀松解術對枕神經痛的治療總有效率明顯高于電針對照組[11]；對第3 腰椎橫突綜合征患者采用針刀松解術治療后鎮痛作用優于電針對照組[12]。張建軍等[13]采用針刀松解加口服普瑞巴林膠囊治療 30 例帶狀皰疹引起神經痛患者，結果顯示臨床療效總有效率96.7%，與口服普瑞巴林膠囊對照組（總有效率66.7%）比較，差異有顯著性。與阿米替林組比較，足三里小針刀刺激可顯著提高大鼠痛閾[14]。本實驗研究比較了針刀療法和皮下注射嗎啡對CCI 大鼠的鎮痛作用，結果發現針刀療法的鎮痛作用穩定、持續時間長，見圖3。

雖然臨床對針刀療法的鎮痛作用的研究較多，但目前為止有關針刀療法鎮痛作用機制的研究報道較少。有研究報道[15-16]針刀治療可促進亮氨酸-腦腓呔、β-內啡呔等內源性鎮痛物質的釋放，從而對神經痛具有鎮痛作用。筆者前期的研究[17]發現針刀治療可能引起甘丙肽的釋放增加。但其鎮痛機制有待進一步研究。

綜上所述，針刀干預延長CCI 大鼠對熱刺激誘發的HWL 和壓力刺激誘發的HWT，提示針刀療法對CCI 大鼠具有明顯的鎮痛作用；且與嗎啡鎮痛作用比較，針刀治療神經痛的作用穩定且持久。