高效液相色譜法快速測(cè)定保健品中6 種人參皂苷的含量

居廣琳

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建福州 350002）

人參皂苷是人參、西洋參等人參屬植物中被證實(shí)具有增強(qiáng)體質(zhì)、調(diào)節(jié)神經(jīng)、延緩衰老及抗腫瘤等功效的有效成分[1-2]。其中人參皂苷Rg1具有調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)、保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞的作用[3]；人參皂苷Rb1具有促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)，減少神經(jīng)元損傷的作用[4]；人參皂苷Re 具有抑制胰島素抵抗、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗炎的作用[5]；人參皂苷Rd 有抗氧化作用[3]；人參皂苷Rb2具有降脂降糖、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、維持心臟和血管正常生理功能的作用[6]；人參皂苷Rc 有抗氧化和抗炎作用[7]。本實(shí)驗(yàn)以3 種保健品基質(zhì)為研究對(duì)象，參照《保健食品理化及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（2020 年版）》應(yīng)用高效液相色譜法建立了快速穩(wěn)定高效檢測(cè)以非人參及其加工品為主要原料的保健品中6 種人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re 和Rg1含量的方法[8]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

唐傳牌阿拉伯糖粉、力保健牛磺酸功能飲料、湯臣倍健蜂膠軟膠囊，購(gòu)自市場(chǎng)。

人參皂苷Rb2（批號(hào)CCPE900007，純度96.0%）、人參皂苷Rc（批號(hào)CCPE900217，純度95.6%）、人參皂苷Rd（批號(hào)CCPE900216，純度95.3%）、人參皂苷Re（批號(hào)CCPE901307，純度98.7%）和人參皂苷Rg1（批號(hào)CCPE900 214，純度94.9%），均購(gòu)自廣州佳途科技股份有限公司；人參皂苷Rb1（批號(hào)1ST400 41，純度98.7%），購(gòu)自天津阿爾塔科技有限公司；甲醇（分析純）、乙腈（色譜純），購(gòu)自山東禹王化學(xué)試劑有限公司；水為自制超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

D3200 高效液相色譜儀，大連依利特分析儀器有限公司；KQ-500DE 數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；ME204 電子天平，梅特勒托利多儀器有限公司；超純水機(jī)，美國(guó)密理博公司；多位平行濃縮儀，睿科集團(tuán)（廈門）股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 溶液的制備

標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液的配制：稱取人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re 和Rg1標(biāo)準(zhǔn)品于同一容量瓶中，用甲醇配制成各組分濃度為9.92 mg·mL-1、10.3 mg·mL-1、9.54 mg·mL-1、9.59 mg·mL-1、9.84 mg·mL-1和9.94 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液。

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液1.0 mL、2.0 mL、2.0 mL、2.0 mL 和1.0 mL，置于100 mL、100 mL、50 mL、25 mL 和10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即配成人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制濃度如表1 所示。

表1 人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制

唐傳牌阿拉伯糖粉和力保健牛磺酸功能飲料樣品溶液的制備：稱取樣品5 g，置于50 mL 容量瓶中，加入20 mL 水溶解，超聲提取15 min 后，加20 mL甲醇繼續(xù)超聲提取15 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取10 mL 上清液，氮吹濃縮至1 mL 即得樣品溶液。

蜂膠軟膠囊樣品溶液的制備：按上述方法取內(nèi)容物進(jìn)行供試品溶液的制備。

1.3.2 色譜系統(tǒng)條件

色譜柱：依利特Hypersil 300? C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水，洗脫程序見表2；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

表2 梯度洗脫程序

2 結(jié)果與分析

2.1 液相色譜圖

按1.3.2 色譜系統(tǒng)條件分析人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re 和Rg1濃度為992.0 μg·mL-1、1 030.0 μg·mL-1、954.0 μg·mL-1、959.0 μg·mL-1、984.0 μg·mL-1和994.0 μg·mL-1時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，基線分離較好。液相色譜圖見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液液相色譜圖

2.2 人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re 和Rg1 的線性范圍

取1.3.1 配制的人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液10 μL 進(jìn)高效液相色譜分析，以人參皂苷濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表3。

表3 人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re 和Rg1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re 和Rg1 的回收率

稱取供試樣品各2 份，按1.3.1 方法制備樣品溶液測(cè)定6 種人參皂苷含量，結(jié)果表明阿拉伯糖粉、力保健牛磺酸功能飲料及蜂膠軟膠囊均不含被測(cè)組分。稱取5.031 2 g、5.041 2 g、5.036 4 g、5.112 4 g、5.095 4 g、5.038 7 g、5.098 3 g、5.064 4 g 和5.046 1 g 共9 份阿拉伯糖粉，稱取5.112 4 g、5.064 2 g、5.310 2 g、5.142 1 g、5.010 6 g、5.065 4 g、5.041 5 g、5.210 4 g 和5.009 4 g 共9 份力保健牛磺酸功能飲料，稱取5.048 9 g、5.210 5 g、5.131 5 g、5.198 2 g、5.176 6 g、5.077 8 g、5.210 6 g、5.116 2 g 和5.130 2 g共9 份蜂膠軟膠囊內(nèi)容物，分成3 組分別加入標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液30 μL、80 μL、200 μL，按1.3.1 方法制備樣品溶液，按1.3.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表4～表6。結(jié)果表明該實(shí)驗(yàn)方法有較好的回收率和精密度，回收率為82.9%～109.2%，精密度為4.0%～8.3%。

表4 測(cè)定阿拉伯糖粉中人參皂苷的回收率和精密度

表5 測(cè)定力保健牛磺酸功能飲料中人參皂苷的回收率和精密度

表6 測(cè)定蜂膠膠囊中人參皂苷的回收率和精密度

3 結(jié)論

越來越多的年輕人開始重視中醫(yī)理療養(yǎng)生，關(guān)注養(yǎng)生，因此向保健品中添加人參提取物成為趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定了保健品中6 種人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re 和Rg1的含量，為保健品質(zhì)量檢測(cè)提供了方法參考。