2022年食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測能力驗證結(jié)果分析

鄧錦秀

（廣西融安縣疾病預(yù)防控制中心，廣西柳州 545400）

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄球狀排列，無芽孢、無莢膜，廣泛分布于自然界，能引起各種感染和疾病，如皮膚感染、呼吸道感染、食物中毒、敗血癥等[1-2]。金黃色葡萄球菌具有廣泛的多重耐藥性和毒力因子，已成為公共衛(wèi)生領(lǐng)域備受關(guān)注的問題之一，可通過細菌培養(yǎng)和鑒定、分子生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)檢測等對其進行檢測和診斷。在臨床和食品安全等領(lǐng)域，對金黃色葡萄球菌的快速檢測和準確診斷具有重要意義，可幫助預(yù)防和控制其感染和傳播[3]。

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）為革蘭氏陰性菌，呈弧狀、棒狀等多形態(tài)，無芽孢，有鞭毛，常存在于海水和海產(chǎn)品中，可引起腸胃感染，癥狀包括腹瀉、腹部絞痛、嘔吐、惡心等[4]。人們主要通過進食受污染的海產(chǎn)品感染副溶血性弧菌，潛伏期一般為4～96 h，嚴重感染者可能導(dǎo)致腸穿孔和敗血癥，甚至危及生命[5]。副溶血性弧菌是我國東南沿海地區(qū)引起食物中毒的重要病原體之一，目前食物中毒已成為主要的突發(fā)公共事件之一[6-7]。

能力驗證是指通過對已知樣品的測試評估實驗室在特定領(lǐng)域檢測能力的精確度、準確度和可靠性。能力驗證不僅可以評估實驗室的技術(shù)水平和能力，還能幫助實驗室制定和改進質(zhì)量管理體系、提高檢驗人員的素質(zhì)和意識、推動技術(shù)創(chuàng)新和學(xué)術(shù)交流，促進實驗室良性循環(huán)和發(fā)展。因此，能力驗證在現(xiàn)代實驗室管理中具有廣泛的應(yīng)用價值和社會意義。

本文通過分析本實驗室2022年參加由中國檢驗檢疫科學(xué)研究院測試評價中心組織和實施的食品中金黃色葡萄球菌（定量）[ACAS-PT1328（2022）]、副溶血性弧菌（定性）[ACAS-PT1329（2022）]的檢測能力驗證的檢測結(jié)果，提升本實驗室對食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測能力。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

樣品來源于中國檢驗檢疫科學(xué)研究院測試評價中心，共檢測2個項目，每個項目2個樣品，樣品為白色凍干塊狀，為人工污染的食品樣品，西林瓶真空包裝。

1.2 試劑與儀器

Baird-Parker瓊脂（北京陸橋）；凍干血漿（北京陸橋）；腦心浸出液肉湯（北京陸橋）；血瓊脂平板（北京陸橋）；TCBS培養(yǎng)基（北京陸橋）；3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂（北京陸橋）；副溶血性弧菌干制生化鑒定試劑盒（北京陸橋）；科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基（科瑪嘉）；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱；XDD-84立式電熱壓力蒸汽消毒器；HR40-ⅡA2生物安全柜等。

1.3 檢驗依據(jù)

依據(jù)能力驗證參試指導(dǎo)書、《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》（GB 4789.10—2016）[8]第二法 金黃色葡萄球菌平板計數(shù)法、《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 副溶血性弧菌檢驗》（GB 4789.7—2013）[9]對樣品進行檢測。

1.4 檢驗方法

1.4.1 樣品制備

（1）金黃色葡萄球菌樣品（22-K795、22-Y967）用60 mL稀釋液再水化。樣品開啟后，立即加入5 mL稀釋液再水化，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復(fù)用余下的稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁2～3次，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液為待測樣品原液。

（2）副溶血性弧菌樣品（22-L696、22-E161）用60 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水再水化。樣品開啟后，立即加入5 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水再水化，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復(fù)用余下的3%氯化鈉堿性蛋白胨水清洗西林瓶內(nèi)壁2～3次，回收清洗液置于上述無菌瓶中，此溶液為待測樣品原液。

1.4.2 接種、增菌及分離培養(yǎng)

（1）金黃色葡萄球菌樣品。以無菌吸管吸取25 mL金黃色葡萄球菌待測樣品原液置于盛有225 mL稀釋液的無菌瓶中，充分混勻，制成1∶10的樣品勻液；用微量移液器吸取1∶10樣品勻液1 mL注于盛有9 mL生理鹽水的無菌試管中，充分混勻，制成1∶100的樣品勻液。選擇3個稀釋度（100、10-1、10-2）的樣品勻液，每個稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL的接種量分別加入3個Baird-Parker平板，用無菌涂布棒涂布整個平板，注意不要觸及平板邊緣。平板涂布后靜置10 min，倒置后于36 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。同時以標準菌株金黃色葡萄球菌作陽性對照。典型的金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤，顏色呈灰黑色或黑色，有光澤，周圍繞以不透明圈，其外常有一清晰帶。

（2）副溶血性弧菌樣品。以無菌操作取25 mL副溶血性弧菌待測樣品原液置于盛有225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的無菌瓶中，充分混勻，制成1∶10樣品勻液。將樣品勻液于36 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h。22-L696、22-E161增菌液均渾濁生長，取增菌液各一環(huán)分別劃線接種于科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基和TCBS培養(yǎng)基，36 ℃培養(yǎng)24 h。同時以標準菌株副溶血性弧菌作陽性對照。

1.4.3 鑒定試驗

（1）金黃色葡萄球菌鑒定試驗。選擇有典型金黃色葡萄球菌菌落且同一稀釋度3個平板菌落數(shù)合計在20～200 CFU的平板，計數(shù)典型菌落數(shù)。從典型菌落中挑取5個可疑菌落進行鑒定試驗，分別做染色鏡檢、血漿凝固酶試驗（36 ℃培養(yǎng)6 h），同時劃線接種到血平板36 ℃培養(yǎng)24 h。

（2）副溶血性弧菌鑒定試驗。挑取3個可疑菌落接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板進行純培養(yǎng)，于36 ℃培養(yǎng)24 h后進行染色鏡檢、生化鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 鑒定試驗結(jié)果

2.1.1 金黃色葡萄球菌鑒定試驗結(jié)果

金黃色葡萄球菌樣品22-K795、22-Y967在血平板上的菌落形態(tài)均為圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色，菌落周圍可見完全透明溶血圈，鑒定試驗結(jié)果見表1。

表1 金黃色葡萄球菌鑒定試驗結(jié)果

2.1.2 副溶血性弧菌鑒定試驗結(jié)果

副溶血性弧菌樣品22-L696、22-E161在科瑪嘉弧菌顯色平板上均為淡紫色菌落，在TCBS平板上均為圓形、半透明、表面光滑、綠色菌落，其鑒定試驗結(jié)果見表2。樣品22-L696、22-E161均檢出副溶血性弧菌。

表2 鑒定試驗結(jié)果

2.2 能力驗證實驗結(jié)果

2.2.1 金黃色葡萄球菌（定量）能力驗證結(jié)果

能力驗證結(jié)果判定|Z|≤2.0為滿意結(jié)果；2.0＜|Z|＜3.0為可疑結(jié)果；|Z|≥3.0為不滿意（離群）結(jié)果[10]。22-K795、22-Y967樣品的Z值分別為-1.5、0.4，|Z|≤2.0，說明本實驗室檢測均獲得滿意結(jié)果。

2.2.2 副溶血性弧菌（定性）能力驗證結(jié)果

能力驗證結(jié)果判定實驗室檢測結(jié)果與指定值一致時，評價為滿意，否則為不滿意（假陰性或假陽性）[11]。22-L696、22-E161樣品均檢出副溶血性弧菌，均與指定值一致，說明本實驗室檢測均獲得滿意結(jié)果。

3 結(jié)論與討論

能力驗證是檢測實驗室、認可機構(gòu)和實驗室管理部門判定實驗室檢測能力的重要技術(shù)手段之一，也是實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的有效補充。能力驗證活動是判定實驗室能力的國際通行做法，其結(jié)果得到廣泛承認，對實驗室了解、提高和證實自身能力都具有積極作用。疾控機構(gòu)的微生物檢驗室是為衛(wèi)生行政部門制定疾病預(yù)防與控制策略及采取措施、為衛(wèi)生監(jiān)督提供實驗室技術(shù)支持、為社會日益增長的衛(wèi)生需要提供衛(wèi)生技術(shù)服務(wù)的檢測機構(gòu)，為保證所提供數(shù)據(jù)的公正、準確和科學(xué)，檢測實驗室需保證測定結(jié)果達到確定的檢驗質(zhì)量標準。

本實驗室檢測結(jié)果（實驗室代碼ACAS-PT1328-056、ACAS-PT1329-056）均與ACAS-PT1328食品中金黃色葡萄球菌（定量）、ACAS-PT1329副溶血性弧菌（定性）的檢測能力驗證計劃指定值一致，能力評價均為“滿意”結(jié)果，說明本實驗室具有食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測能力。通過本次能力驗證，極大提高了本實驗室的檢測能力水平，同時在檢測過程中發(fā)現(xiàn)一些需要注意的事項。①樣品處理時要完全溶解、混勻，無菌操作。②Baird-Parker平板在使用前要確認無水珠，如果有水珠可放置于25～30 ℃培養(yǎng)箱中干燥，直到平板表面水珠消失，否則會出現(xiàn)菌落成片生長而無法計數(shù)的情況。③在Baird-Parker平板培養(yǎng)至24 h后可進行一次預(yù)計數(shù)，對發(fā)現(xiàn)的特征菌落用記號筆進行描點標記，避免在48 h后出現(xiàn)雜菌干擾結(jié)果判定[12]。④要嚴格控制培養(yǎng)基的溫度、濕度和通風(fēng)等條件，以確保菌落的正常生長，并防止外界細菌污染。⑤在選擇培養(yǎng)基和試劑盒等試劑時，應(yīng)注意其質(zhì)量和有效期，避免使用過期或受污染的試劑，影響檢測結(jié)果的準確性和可靠性[13]。⑥在實驗過程中要按照規(guī)范的操作程序和實驗室管理要求進行，做好記錄和報告工作，及時處理發(fā)現(xiàn)的問題和異常情況，并根據(jù)檢測結(jié)果進行相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析和結(jié)論推斷，提高實驗室的整體技術(shù)水平和科學(xué)研究能力[14]。