不同培養基檢測沙門氏菌的效果對比

李秀秀，汪 琦

（1.德州市德城區疾病預防控制中心，山東德州 253000；2.樂陵市疾病預防控制中心，山東德州 253600）

沙門氏菌（Salmonella）是一類常見的食源性病原菌，為革蘭氏陰性桿菌，被認為是食品和水源中最主要的致病菌之一[1]。全球每年有數百萬人因攝入受污染的食物或水而感染沙門氏菌，導致食物中毒，對公共衛生構成嚴重威脅[2]。因此，對食品、水源的生產、運輸、銷售過程中的沙門氏菌進行檢測至關重要。

隨著生物技術的不斷發展，聚合酶鏈式反應技術（Polymerase Chain Reaction，PCR）、酶聯免疫法、恒溫熒光核酸檢測法等各種快速檢測技術被應用于沙門氏菌的檢測中。其中，PCR技術是最常用的方法之一[3]。但PCR技術也存在一定的局限性，其需要專門的實驗室設備和技術人員進行操作，且對樣品預處理和提取DNA的要求較高[4]。選擇性培養基通過優化培養條件，使目標微生物得以生長和繁殖，同時限制其他微生物的生長，從而實現高特異性的檢測，被廣泛應用于分離、鑒定和定量目標微生物[5]。

本研究通過比較不同選擇性培養基對沙門氏菌檢測效果的影響，篩選適用于沙門氏菌檢測的培養基，為沙門氏菌的快速檢測提供科學依據，為食品安全監管和公共衛生管理提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

目標菌株：鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028、甲型副傷寒沙門氏菌CMCC（B）50093。干擾菌株：糞腸球菌ATCC29212、奇異變形桿菌CMCC（B）49005、大腸埃希氏菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。亞硫酸鉍瓊脂培養基；沙門氏菌顯色培養基；HE瓊脂培養基；木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基；營養瓊脂培養基（復蘇培養基）；即用型胰蛋白胨大豆瓊脂培養基（參比培養基）；恒溫培養箱；酒精燈；無菌培養皿；純化水。

1.2 待測菌株的檢測

先進行平板制備，分別取47.3 g亞硫酸鉍瓊脂培養基干粉、34.9 g沙門氏菌顯色培養基干粉、90.8 g HE瓊脂培養基產品干粉、57.0 g木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基產品顆粒制備培養基和32.0 g營養瓊脂培養基，將稱量好的樣品與1000 mL純化水混合加熱，不斷攪拌至完全溶解，冷卻至50 ℃后倒入無菌培養皿中（至少3 mm厚），置于平臺上半開蓋至瓊脂凝固后蓋蓋備用。

將不同菌株接種在營養培養基上置于恒溫培養箱中36 ℃培養1 d進行菌株復蘇，再將不同菌株分別接種在亞硫酸鉍瓊脂培養基、沙門氏菌顯色培養基、HE瓊脂培養基、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養基上，目標菌株采用平均涂布，干擾菌株采用平板劃線（圖1），再次置于恒溫培養箱中36 ℃培養2 d后進行鑒定。

圖1 干擾菌株平板劃線示意圖（GB 4789.28—2013）

1.3 鑒定原理

亞硫酸鉍瓊脂培養基內的亞硫酸鹽可被沙門氏菌還原成硫化物，生成的硫化物與硫酸亞鐵反應后可使菌落呈現黑色。

沙門氏菌顯色培養基中混合色素與沙門氏菌內部特異性酶進行反應，使沙門氏菌群落呈紫紅色。

HE瓊脂培養基中的硫代硫酸鈉和檸檬酸鐵銨可與部分可發酵糖類的沙門氏菌產生的硫化氫反應，該反應可使菌落中心部位呈黑色，從而實現對沙門氏菌的檢測；同時培養基中的麝香草酚藍等酸堿指示劑也可將群落顯色為橘黃色群落和藍綠色群落，用于鑒定菌種。

木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基中的木糖經沙門氏菌發酵后產生酸，酸性環境促進沙門氏菌產生脫羧酶使XLD瓊脂培養基中的賴氨酸脫羧，導致培養基內pH值不斷升高形成堿性環境，在堿性環境下硫代硫酸鈉和硫酸亞鐵銨與沙門氏菌產生的硫化氫反應使群落呈黑色。

1.4 生長率和選擇性測定

采用生長率評價目標菌的檢測結果，生長率的計算公式為

式中：Pr為生長率；Ns為待測培養基平板上的菌落總數，CFU；N0為和參比培養基平板上的菌落總數，CFU。

采用生長指數（G）作為干擾菌檢測結果的評價指標，根據每條劃線上菌落的生長情況計算生長指數（0≤G≤6），其評價標準如表1所示。

表1 生長指數（G）的評價標準

2 結果與分析

2.1 不同培養基上目標菌的生長情況

如表2所示，在亞硫酸鉍瓊脂培養基中，鼠傷寒沙門氏菌易于被檢出，菌落顏色呈黑色并帶金屬光澤，而甲型副傷寒沙門氏菌相對較難檢出，其菌落顏色呈現暗綠色，易與其他綠色系菌落混淆（如銅綠假單胞菌），這與甲型副傷寒沙門氏菌不發酵糖類產生硫化氫有關。沙門氏菌顯色培養基中鼠傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌均有特異性反應。HE瓊脂培養基中鼠傷寒沙門氏菌菌落中心呈黑色，相較于甲型副傷寒沙門氏菌更易被檢出。木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基中鼠傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌均呈淺紅色菌落且中心呈黑色，檢測效果較好。

表2 目標菌的菌落生長情況

2.2 不同培養基上干擾菌的生長情況

如表3所示，4種培養基中，糞腸球菌均受到明顯的抑制，奇異變形桿菌在沙門氏菌顯色培養基被抑制。除木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基中的奇異變形桿菌難與鼠傷寒沙門氏菌相區分外，其他條件下均可與沙門氏菌區分。

表3 干擾菌的菌落生長情況

2.3 不同培養基目標菌的生長率

如表4所示，4種培養基中，鼠傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌的生長率均較高（＞0.70）。其中，亞硫酸鉍瓊脂培養基中的2種沙門氏菌生長率最高；沙門氏菌顯色培養基中的2種沙門氏菌生長率最低。

表4 不同培養基目標菌的生長率

2.4 不同培養基干擾菌的選擇性

如表5所示，糞腸球菌在4個培養基中的生長指數均小于3，說明4個培養基對以糞腸球菌為代表的革蘭氏陽性菌有明顯的抑制作用；而由于培養基的設計不同，沙門氏菌顯色培養基對奇異變形桿菌、亞硫酸鉍瓊脂培養基對大腸埃希氏菌也表現出了明顯的抑制作用。奇異變形桿菌和大腸埃希氏菌在HE瓊脂培養基以及銅綠假單胞菌在4種培養基中均表現出了一定程度的生長，但其菌落特點與沙門氏菌存在一定差異，故這些培養基也可作為這些干擾菌的選擇性培養基。

表5 不同培養基干擾菌的生長指數

3 結論

本研究通過比較4種不同選擇性培養基對沙門氏菌的檢測效果發現，鼠傷寒沙門氏菌在亞硫酸鉍瓊脂培養基、沙門氏菌顯色培養、HE瓊脂培養基和木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基中較易分辨；而甲型副傷寒沙門氏菌因不產硫化氫，在亞硫酸鉍瓊脂培養基和HE瓊脂培養基中較難區分。4種干擾菌中，除木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽培養基中的奇異變形桿菌，其他條件下均可與沙門氏菌區分；4種培養基中，鼠傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌的生長率均較高（＞0.70）；4種培養基對革蘭氏陽性菌有明顯的抑制作用。