宮頸癌組織中BAG3蛋白表達水平及意義

馮 寧,劉 艷

陜西省西安市中心醫院婦產科,陜西西安 710061

宮頸癌是我國發病率僅次于乳腺癌的惡性腫瘤,既往研究顯示宮頸癌以中老年居多,但近年來發病逐漸向年輕化發展[1],根據相關數據發現,全世界每年約有50萬宮頸癌新發病例,且約有50%女性死于宮頸癌[2]。宮頸癌已成為威脅女性生命健康的重大公共衛生問題。近年有研究發現部分分子標志物與宮頸癌進展有關,對疾病治療療效及預后評估具有重要意義[3]。Bcl-2相關抗凋亡基因3(BAG3)具有調節細胞生長、發育、凋亡及蛋白降解等作用[4],并且廣泛存在惡性腫瘤中,參與多種腫瘤的形成與發展[5-6]。但BAG3在宮頸癌組織中的表達水平及意義少見報道。因此,本研究擬通過檢測BAG3蛋白在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變和宮頸正常組織中的表達情況,分析其與宮頸癌患者病理特征、預后的關系。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年10月至2018年10月西安市中心醫院收治的201例研究對象的宮頸組織標本作為研究對象。201例標本中宮頸正常組織標本35例(正常組,因子宮肌瘤手術行全子宮切除術而獲取),年齡25～65歲、平均(45.66±3.45)歲;宮頸上皮內瘤變組織標本96例(宮頸上皮內瘤變組),年齡24～66歲、平均(44.96±3.25)歲,其中低級別宮頸鱗狀上皮內瘤變(LSIL)組織標本46例(LSIL組)、高級別宮頸鱗狀上皮內瘤變(HSIL)組織標本50例(HSIL組);宮頸癌組織標本70例(宮頸癌組),年齡23～65歲、平均(44.85±3.41)歲,FIGO分期:Ⅰ～Ⅱ期40例、Ⅲ～Ⅳ期30例,分化程度:高/中分化43例、低分化27例,有淋巴結轉移28例,浸潤深度≥1/2有33例、<1/2有37例。納入標準:(1)宮頸癌患者均符合宮頸癌診斷標準[7],并經病理檢查確診;(2)所有患者術前均未行放化療治療。排除標準:(1)伴其他惡性腫瘤等疾病者;(2)伴嚴重肝、腎功能障礙者;(3)妊娠期或哺乳期女性;(4)既往有精神病史者;(5)臨床資料不全者。宮頸上皮內瘤變組與宮頸癌組的年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究已獲得本院醫學倫理委員會審核批準, 所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1臨床特征資料 收集所有納入對象預后結局及隨訪時間等。

1.2.2BAG3蛋白表達檢測 宮頸組織標本均經60 ℃熔點石蠟包埋、4 μm連續切片后,采用二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水及蘇木精染色,并在確定病變區域后采用檸檬酸修復液高溫高壓修復抗原,冷卻后經PBS漂洗3次(每次3 min),隨后加入按1∶1 000稀釋的一抗(兔抗人BAG3多克隆抗體)4 ℃孵育過夜,PBS漂洗3次(每次3 min),再加入1∶100稀釋二抗(兔抗人BAG3單克隆抗體)37 ℃孵育30 min,PBS漂洗3次(每次3 min),最后使用DAB顯色,蘇木精復染,酸酒精進行短暫分化,之后脫水、透明及封片。最后在顯微鏡下觀察染色情況。所有操作均嚴格按照SP試劑盒說明書進行。兔抗人BAG3多克隆抗體、兔抗人BAG3單克隆抗體、DAB顯色試劑盒等均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.2.3BAG3蛋白表達結果判定[8]BAG3蛋白表達以細胞質或細胞核內出現棕色顆粒為陽性。免疫結果由2位高年資的病理醫師共同利用雙盲法對染色結果進行半定量分析,隨機選取30個高倍鏡視野(×200),每個視野讀取細胞計數200個細胞,隨后根據細胞染色強度與陽性細胞百分比進行綜合評分。細胞染色強度評分:無色為0分、淺黃色為1分、棕色為2分、深褐色為3分。細胞占總細胞百分比:<25%為1分、25%～50%為2分、>50%～75%為3分、>75%為4分。最終得分為陽性細胞百分比和染色強度平均分數的乘積,總分≥3分為高表達(陽性),<3分為低表達(陰性)。

1.3隨訪 出院后均采用電話、門診復診或上門等方式對本研究所有出院患者進行隨訪,隨訪時間以患者出院日開始,截止于2021年10月31日,若中途出現轉移或死亡,隨訪即停止。

2 結 果

2.1不同宮頸組織中BAG3蛋白表達水平比較 BAG3蛋白在正常組的低表達率為85.71%,高表達率為14.29%;在LSIL組的低表達率為63.04%,高表達率為36.96%;在HSIL組的低表達率為36.00%,高表達率為64.00%;在宮頸癌組的低表達率為20.00%,高表達率為80.00%。BAG3蛋白在宮頸癌組中的高表達率>HSIL組>LSIL組>正常組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同宮頸組織中BAG3蛋白表達水平比較 [n(%)]

2.2不同臨床病理特征的宮頸癌患者BAG3蛋白表達水平比較 不同年齡、FIGO分期、肌層浸潤深度的宮頸癌患者BAG3蛋白表達差異無統計學意義(P>0.05);但低分化、淋巴結轉移宮頸癌患者的BAG3蛋白高表達率分別高于高/中分化、無淋巴結轉移患者(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征的宮頸癌患者BAG3蛋白表達水平比較

2.3宮頸癌患者預后生存情況 70例宮頸癌患者隨訪時間為3～46個月,隨訪3年生存率為60.00%(42/70),其中BAG3蛋白高表達、低表達患者3年生存率分別為53.57%(30/56)、85.71%(12/14)。K-M生存曲線顯示,BAG3蛋白高表達患者的生存率低于低表達患者,差異有統計學意義(Log-rankχ2=4.821,P=0.023)。見圖1。

圖1 不同BAG3表達水平宮頸癌患者生存曲線圖

2.4不同臨床病理特征的宮頸癌患者3年生存率比較 不同分化程度、有無淋巴結轉移、不同BAG3蛋白表達水平的宮頸癌患者3年生存率比較,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

2.5影響宮頸癌患者3年生存率的多因素Cox回歸分析 多因素Cox回歸分析結果顯示,低分化、淋巴結轉移、BAG3蛋白高表達均是宮頸癌患者3年生存率的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響宮頸癌患者3年生存率的多因素Cox回歸分析

3 討 論

近年來隨著環境的改變及性傳播疾病的影響,我國宮頸癌發病率不僅逐年升高,且逐漸趨向年輕化[9]。據相關流行病學研究顯示,宮頸癌發病率可達234/10萬人～555/10萬人[10],已經成為現代婦科腫瘤學者們面臨的嚴峻挑戰。目前導致宮頸癌發生的主要病因是高危型HPV感染,盡管HPV感染的篩查技術已得到推廣,但宮頸癌后期復發與轉移的概率仍未得到明顯改善[11]。宮頸癌是一個由多因素、多種分子參與的復雜病理過程,雖然病因明確,但發生、發展的分子機制目前尚不清楚。因此,尋找與宮頸癌病情進展有關的因素對疾病診斷、治療及預后有重要價值。但近年來眾多學者在探討宮頸癌發病機制及預后的過程中發現,生物學因子在宮頸癌發生、發展及預后中起重要作用[12]。因此。本研究主要分析了BAG3蛋白在宮頸癌組織中的表達水平及臨床意義。

本研究發現,BAG3蛋白在宮頸癌組中的高表達率>HSIL組>LSIL組>正常組(P<0.05),表示BAG3蛋白隨著宮頸組織惡化程度而逐漸升高。既往有研究發現,BAG3蛋白在結腸癌癌組織中呈高表達[13],與本研究結果一致。同時本研究顯示,不同分化程度、有無淋巴結轉移的宮頸癌患者BAG3蛋白高表達率存在差異(P<0.05),說明BAG3蛋白可能與宮頸癌的發展密切相關。同時本研究通過3年隨訪結果顯示,宮頸癌患者3年生存率為60.00%,其中BAG3高表達患者3年生存率高于低表達患者,說明BAG3蛋白表達與宮頸癌預后有關,且高表達提示預后不良。本研究多因素Cox分析結果顯示,BAG3高表達是影響宮頸癌患者3年生存率的獨立危險因素(P<0.05),進一步證實BAG3參與宮頸癌發生、發展,有望作為評估宮頸癌預后的有效指標。宮頸癌作為最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一,有研究認為其發生與細胞凋亡機制的紊亂有關[14]。BAG是一個多功能的抗凋亡家族,其表達與多種腫瘤的發病及預后相關,同時也是目前研究最多的與細胞凋亡有關的蛋白家族。而BAG3蛋白作為BAG家族中的一員,基因位于10q25,參與機體的生長發育、細胞增殖、遷移和侵襲等,同時BAG3擁有BAG結構域,通過借助自身的結構域跟Bcl-2結合,促進伴侶蛋白的活性,維持蛋白穩定,誘導癌細胞增殖、侵襲與轉移[15-16]。并且有較多研究發現,BAG3蛋白表達升高能夠抑制腫瘤細胞凋亡[17-18]。同時BAG3也可能是通過影響宮頸癌的上皮間充質轉化過程而發揮促癌作用,因為既往細胞實驗研究顯示,BAG3可促進膠質母細胞瘤細胞和三陰性乳腺癌細胞的上皮間充質轉化過程,上皮間充質轉化過度正是癌癥發生的機制之一[19]。因此,本研究中BAG3蛋白表達水平升高有可能使宮頸癌細胞凋亡受到影響,促進細胞增殖、侵襲、遷徙和上皮間充質轉化過程,進而導致宮頸癌患者病情加重。具體機制有待進一步研究驗證。

綜上所述,BAG3蛋白在宮頸癌和癌前病變組織中的表達高于宮頸正常組織,且表達水平在不同分化程度、是否淋巴結轉移的宮頸癌患者有差異,可作為評估宮頸癌預后的有效指標。但本研究選擇的樣本來自單中心,因此更多研究結果需進一步探索。